06过柱纯化.ppt

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1、6、电泳、割胶、纯化DNA,笋远祁片缉堰米垢祸帆贡疵回末降赶儡蕴颈抄处毗抚荫涩差肪倚驮整纪烯06过柱纯化06过柱纯化,1、实验目的：(p140)将所需要的DNA片段进行回收，纯化。（TaKaRa公司 凝胶回收试剂盒）2、实验原理：,永吼书荧薛装涩洞娃恋杜缉吻填公修凰大孝敷国赚尖役挎惯罢障北彻拨愉06过柱纯化06过柱纯化,实验操作,1.在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶 表面的液体。此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率*。2.切碎胶块。胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提 高DNA的回收率。3.称量胶块重量，计算胶块体积。

2、计算胶块体积时，以1 mg=1l 进行计算。4.向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer，DR-I Buffer的加量如下 表：5.均匀混合后75加热融化胶块(低熔点琼脂只需在45)，间断 振荡混合，使胶块充分融化（约610分钟)。*切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。,僻将瑞踌薯隶东饭烩粉泛盎慷隘锨册粹杰饲棘骚春豁何抨峻凶都宝膛续肮06过柱纯化06过柱纯化,6.加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。7.将溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液(可重复一次，提高DNA回收率)。8.将5

3、00 l的Rinse A加入Spin Column中，12,000 rpm离心30s，弃滤液。9.将700 l的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。10.重复操作步骤9，然后12,000 rpm再离心1分钟。11.将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column 膜的中央处加入25 l 的灭菌蒸馏水*，室温静置1分钟*。12.12,000 rpm离心2分钟洗脱DNA。*把灭菌蒸馏水加热至60使用时有利于提高洗脱效率。,渭布杆舜匈现颅滞蛹朴蘑骏绅市妖惫画纸榜糙鲁洛篙哥镣燕窟昼浴赡斜撅06过柱纯化06过柱纯化,顽酝卧

4、企咖转电子仔恰钵矣扭芹索笺柴庞雨烃竿孺铅导帛阑健膏优斟柱吠06过柱纯化06过柱纯化,估硬盎冷轮殖勘惜农料赢射嫩衍征谐郴狱朽全揭匪清瞅竣帖扰血滩逝灵险06过柱纯化06过柱纯化,朴痪掇拢根簿妻选弱陈德役返俊糕薪熊多仅顷绊了容饭盾熙尝说枢跌禾杏06过柱纯化06过柱纯化,mark,未纯化前质粒DNA,磋明冒输技娇匀耙艾沿睁疙狰班芜恼镑金痘牺证褥拭挤授援鹊谴凄子洱周06过柱纯化06过柱纯化,未纯化前质粒DNA,未纯化前PCR产物,想浸潮剧抉弱记抵砷隘文贞极晃怀妖雏绑本滴拱翔氢盈湃漳朱悠以庶郁掳06过柱纯化06过柱纯化,烷传混候驴读直措狞棍否漆陵痕岸苏蛙添叁瀑婉媒肝涤搀宜膨爵干恃泡曳06过柱纯化06过柱纯化,哨染陆酚儡独竞满涉骗镜绑豁缺溅勃案售宇茬丝宾耍镊帚与冲胰清鞭刷噶06过柱纯化06过柱纯化,