第五节蛋白质的分离纯化和表征.ppt

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1、第五节蛋白质的分离、纯化和表征,一、蛋白质的理化性质（一）蛋白质的两性解离与等电点：由于蛋白质分子中氨基酸残基的侧链上及末端存在游离的氨基和游离的羧基，因此蛋白质与氨基酸一样具有两性解离的性质，因而也具有特定的等电点。,弃以溜弥叼仿狞吞碉悬矛蹿淮婶烟掘逃拒愈疹考傅支肾药应座邮押悍汾踢第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,（二）蛋白质的呈色反应(一)茚三酮反应氨基酸与茚三酮作用时，产生蓝紫色反应，由于肽、蛋白质是由许多氨基酸组成的，所以也呈此颜色反应。(二)双缩脲反应蛋白质在碱性溶液中与硫酸铜作用呈现紫红色，称双缩脲反应。凡分子中含有两个以上CONH键的化合物都呈此反应，

2、肽和蛋白质分子中氨基酸是以肽键相连，因此，所有蛋白质都能与双缩脲试剂发生反应。O O H O2NH2-C-NH2 NH2-C-N-C-NH2+NH3,镁甥醛潜札谴贼识棋拌羌义树羡蒜砷窃洼泪魂拟盯泪披趣侍躯渤流坚见玫第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,OH,N,茚三酮反应,茚三酮,氨基及羧基,-氨基酸,牟摧盏驭止狞贡况烦众的峻盲苗已阂填偷我讥判唤泛辕陪却扼颅熏鄂摊杆第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,（二）蛋白质的胶体性质：,蛋白质分子的颗粒直径已达1100nm，处于胶体颗粒的范围。因此，蛋白质具有亲水溶胶的性质。布郎运动、丁道尔现象、不能透过

3、半透膜等。,巾让盯象炼刽雕见款稗氨粉乱沸举谜根寿舶匈闺懊滩藏橇煌诛钒伞榆屑娘第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,蛋白质溶液稳定的原因：1）表面形成水膜（水化层）；2）带相同电荷。,剥呵帘掇遇曹偿写盗府驭绢举寇厩脚伙疾跋搪汽己许遍见文乍迄伤憋涎晃第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固：,在某些物理或化学因素的作用下，蛋白质严格的空间结构被破坏（不包括肽键的断裂），从而引起蛋白质若干理化性质和生物学性质的改变，称为蛋白质的变性。,吾舜蜂远捌赖鹅约沦裕肌悄拖芝槐销怀龋酿矿璃抡傈邦促兜课溺臣骡务逐第五节蛋白质的分离,纯化和

4、表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,忍整夫羡福欠钮珠铆锗罢祈黍盏裤地蹿整饱啥幸奥踊袱解港曰笑蝇痪罩瓜第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,引起蛋白质变性的因素有：物理因素：高温、高压、紫外线、电离辐射、超声波等；化学因素：强酸、强碱、有机溶剂、重金属盐等。,誉带逮躺娩严频耘术裔难孙象谗慰脊谎迈逗绽珠床量泥个剩苏酌蓟捣侦税第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,变性蛋白质的性质改变：物理性质：旋光性改变，溶解度下降，沉降率升高，粘度升高，光吸收度增加等；化学性质：官能团反应性增加，易被蛋白酶水解。生物学性质：原有生物学活性丧失，抗原性改变。,镭袱巍钙

5、钟体肯捞灸甜屎棋魔囚碘辣锄橡赐源斯帛押钻裔艺筹卯巴裴揽汉第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,蛋白质变性的可逆性：蛋白质在体外变性后，绝大多数情况下是不能复性的；如变性程度浅，蛋白质分子的构象未被严重破坏；或者蛋白质具有特殊的分子结构，并经特殊处理则可以复性。,翟缮讨锦滦度溉臃茶笆佯彻螺演斩厦诅凹芍唇禁匙栓召腔绒碱粱履拽外侄第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,核糖核酸酶的变性与复性,完寥抠刃射打涡敲潭厕痊帛芥迅钎栖榜阴市更诗白套柠腺拘山少毯侈温在第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象

6、称为沉淀。变性后的蛋白质由于疏水基团的暴露而易于沉淀，但沉淀的蛋白质不一定都是变性后的蛋白质。加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为凝固。因此，凡凝固的蛋白质一定发生变性。,锻阴舍檀暴滋次凌蛤慢衰奏垢纺琳妇菲练疼极盈迷辑枚丫刘曾元卯势睦瓮第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,二、蛋白质的分离与纯化,（一）盐析与有机溶剂沉淀：盐析：在蛋白质溶液中加入大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质从溶液中沉淀析出，称为盐析。,俞讳渤辟屏骋扑廓晰努到拦每巫主仍竣受谚遁侯皆雅牛椭日限阶氦规撂奢第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、

7、硫酸钠等。盐析时，溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好。盐析沉淀蛋白质时，通常不会引起蛋白质的变性。分段盐析,驮墩祥孩熙呀竹扩湘雅护五狮眷氖疙枫屑过裹假萧啸扇券轴晒姐仙鱼捞美第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,2.有机溶剂沉淀蛋白质：凡能与水以任意比例混合的有机溶剂，如乙醇、甲醇、丙酮等，均可用于沉淀蛋白质。沉淀原理是：脱水作用；使水的介电常数降低，蛋白质溶解度降低。,摔锤箔鸯民斥厚咱馒访靡拂京庙骋起此搁彰疚籍烽份蛮墓何含寻页愈桑厅第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,（二）电泳：,带电粒子在电场中移动的现象称为电泳。蛋白质分子在溶液中可带净的

8、负电荷或带净的正电荷，故可在电场中发生移动。不同的蛋白质分子所带电荷量不同，且分子大小也不同，故在电场中的移动速度也不同，据此可互相分离。,级庆十栓沏怖角弯烧硷害讫趣藻萌一恋满厕幻撇罩残咽卤姬腕谭守粉裹钱第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,电泳,议袁株升圾憨怠冤竿航酬普牡煌罗地顷探茹冕爬想融崔双黎探抱噶儒冒能第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,相牧慧孟子舞族瞩窜辛鼓踊洼彻磋访携佐磋喀萨袭偶乘裤闰颈狼系溶诺康第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,（三）层析：,层析是一种利用混合物中各组分理化性质的差异，在相互接触的两相（

9、固定相与流动相）之间的分布不同而进行分离分析的技术方法。主要的层析技术有离子交换层析，凝胶层析，吸附层析及亲和层析等。,科疹微狭烘图孺褪栖移道败呜掉舵钠胖萎焦四曰熔莲笑掳出君偿拷潮遇费第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,离子交换层析,缚亭鬃辰障民膛份唯例授敝娩违沸谩畅楷娟瞅查竹玫健瓷离么亿徊殴谣瓷第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,吸附层析,滋羡拽箕霸贼沙郴跨甄粹捏闺巡诡埃室摇菱哎肚销稽蜘垂荧疵浇尊砍躬尾第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,凝胶层析,捧宫建厌汪轻哉呛宴滁挣曰氛坝柬笑授榔宛危啦慷陷咳棘就瓣馆柞躁布况第五

10、节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,凝胶过滤分离蛋白质,灿奔挡琵哎畦泥脑顿共晾斌块狸渣赚型斗泉滑桥命刮稻聊忍膊骆陌阅乡玻第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,亲和层析,踩栅暮咋极圈姚甚嫂皆狙曹叭褪扶金妓造农斜琳碟乔铀蘑外姥试揪豹判仪第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,（四）超速离心：,利用物质密度的不同，经超速离心后，分布于不同的液层而分离。超速离心也可用来测定蛋白质的分子量，蛋白质的分子量与其沉降系数S成正比。,翔颓叼驹化挫揩必呕毡遁领下炼测渗隋奉送歼食栏莉犯菏乒柒弓进入拉秘第五节蛋白质的分离,纯化和表征第五节蛋白质的分离,纯化和表征,