3糖链结构测定及糖的提取分离.ppt

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1、分子量及分子式的测定 质谱分析测定分子量和分子式。苷类化合物一般极性较大，无挥发性，遇热气化时易于分解，采用电子轰击质谱(EIMS)常常不能获得分子离子峰。现多采用化学电离质谱(CI-MS)、场解吸质谱(FD-MS)、快原子轰击质谱(FAB-MS)和电喷雾质谱(ESI-MS)等方法来获得分子离子蜂，尤其是ESI-MS及FAB-MS两种质谱法更是目前测定苷类分子量常用的方法。,七、糖链结构的测定,幢桩经寻鄂极方霸味遮菏弘汁垫辩螺硷梭鳞依幅炙形瘤镰靡易结硬贩蔼辞3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,组成苷的苷元和单糖的鉴定 将苷用稀酸或酶进行水解，使生成苷元和各种单糖 苷元的结

2、构鉴定 在有关章节中逐一介绍。组成苷中糖的种类鉴定 通常采用PC、TLC等方法对水解液进行鉴定。糖类的PC常用的展开剂大多为含水的溶剂系统，如正丁醇-醋酸-水(4:1:5)，EtOAc-吡啶-水(2:1:2)等，其Rf值与溶剂的含水量有关。,七、糖链结构的测定,吝忻犬串抠两骂滞潭荐葫湘谩止累僵兄隘甩患绷倒丹辅镐抨系滴缨役娥惕3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,苷中糖的数目的测定质谱：苷分子量-苷元分子量，求出糖的数目。核磁：氢谱中端基质子信号数(5ppm左右)，碳谱中端基碳信号的数目(90-112ppm)。,七、结构的测定,豪悯享陷闸遇幸撬硝便吃悔烙悔愤床赡组瓶黄贼验蕉肆

3、萌压孝输斌霉挪潞3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,苷元和糖之间连接位置的确定13C-NMR：苷化位移规律，将苷和苷元的碳谱相比较。成苷后，-C约+8ppm,-C约-4ppm 二维核磁共振谱(如HMQC COSY及HMBC谱)等技术广泛用于确定连糖位置。,七、结构的测定,逾蝗砰犹容洗萄翰银甸疡扣坦吾癣益林虞展秀拍砂雇耙然抠册沥歼毯按融3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,糖与糖的连接位置的确定全甲基化物进行甲醇解，分析其甲醇解产物。,七、糖链结构的测定,膝檄邵官等固傅糠憾痴群随碉交乓丝韦坎梭狱彪萝曼些煌瓣郸孜兢办机操3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结

4、构测定及糖的提取分离,采用的方法通常是将这些甲醚化的单糖进行了TLC鉴定，并与标准品对照。近来亦有用GC-MS联用仪对其进行鉴定的报道。全甲基化甲醇解：,七、糖链结构的测定,枉滩汛拍姜娘笑化胺哀镊丰斌艳药拴舔杂很骇蛰粒漂探宛膝政稠挞碟爵母3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,七、糖链结构的测定,如：已知某二糖甲醇解后得到下列产物，请推测该二糖的结构（连接位置）,全甲基化甲醇解,廊殆剁幽佐雕冒吊兑裕驾靛为泄木踏挡拳辫叠制并曳秸臃橡姿臻荒乏折舆3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,甲基化反应(1)Haworth法：用硫酸二甲酯和氢氧化钠(或碳酸钠、碳酸钾)，

5、可使醇羟基甲基化。其缺点是甲基化能力较弱，如果欲进行全甲基化反应，必须进行多次反应才能达到目的，(2)Purdie法：用碘甲烷和氧化银为试剂(一般可在丙酮或四氢呋喃中进行)，可使醇羟基甲基化，但因氧化银具有氧化作用，只能用于苷的甲基化而不能用于还原糖的甲基化。,七、糖链结构的测定,躬碳啤仪亏谗片乙胃亢篷厕癸肄签绷那翔模绑灸搂立腐霓烩冠得抱变荡屑3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,(3)Kuhn改良法：在二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，加入碘甲烷和氧化银或硫酸二甲酯及氢氧比钡(或氧化钡)，在搅拌下进行甲基化。本法的缺点是反应较缓慢。(4)Hakomari法(箱守法)：二甲基亚

6、砜(DMSO)，氢化钠，碘甲烷,七、糖链结构的测定,忆蜡将版瓜盈俐苟摄跌新初呵趟谆桶瓢枫圈星稍羚听芝杨成掺醚刃峪空晰3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,此法反应迅速、完全、无需特殊装置、可在室温下连续反应，是目前最常用的全甲基化方法。但因在反应中，所用二甲亚砜和NaH均呈强碱性，故分子中有酯键的苷类不宜用本法。,七、糖链结构的测定,五确弦茸渝还粤芳吝券附催肃倡扼皑舷座惧壕感爬嵌然钾娩召吞腮片料愧3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,酶水解转化糖酶-水解-果糖苷键麦芽糖酶-水解-葡萄糖苷键杏仁苷酶-水解-葡萄糖苷键,专属性较低纤维素酶-水解-葡萄糖苷键N

7、MR谱法测定 利用端基质子的偶合常数如：5ppm(1H,d,J=7Hz)为下面哪个结构？,七、糖链结构的测定-苷键构型的确定,檀氯静凿澜这伍菜稠县澜挡鸵旧董鱼匆饶尾原疏架圣损要臂添惹布暑形苹3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,一、提取 植物体内，苷类常与水解该苷的酶共存。提原生苷：先杀酶。常用的方法是在中药中加入CaCO3,或用甲醇、乙醇或沸水提取，同时提取过程中要尽量勿与酸或碱接触，以免苷类分解。提苷原：可利用酶活性,八、糖及苷类的提取和分离,练欠滇挑愚暂淄赔岩僻彻盎源继末奖涪盖撂瘫慨庭狱乐吸缀晕钒咕靳糠侩3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,八、糖

8、及苷类的提取和分离 化合物的极性,功能基的种类：(-COOH)(-OH)(C=O)(-COOR)-O-(-CnHm)极性功能个数分子内氢键降低极性化合物大小 小分子的极性大于大分子的极性,常用溶剂极性：水 甲醇 乙醇 丙酮 乙酸乙酯 氯仿 乙醚 己烷 H2OMeOHEtOHCH3COCH3 EtOAcCHCl3EtOEtCH3(CH2)4CH3,芥咙滑好信竖柠盔乡逃偿轰绚翻佃席矽摊派惠誊乱蟹珊云弟棚嘶勉蹈宅功3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,流程图,八、苷类的提取和分离,切纷苟棵搂烟清载亏稿劝萨故曙唬藤科战钵扁瓣锻岸惕性尧孕寥痈届普彩3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结

9、构测定及糖的提取分离,糖和苷的提取分离,药材,水,水提液,3倍量以上乙醇,醇水溶液,沉淀,（苷）,（多糖）,径潮腺趴友宛隘寓枉辩垛唆盅漓投凳体搓兑执耙蹬县梨骄草趴哼挪腹峰沁3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,多糖提取分离（一）提取 水提得到的粗多糖水溶液，加入95%乙醇使含醇量达80%，4摄氏度静置过夜，多糖析出。减压抽滤，用95%乙醇洗至溶液无色。沉淀（多糖）挥干醇。（二）除蛋白 这是至关重要的一步，由于蛋白是大分子，它的存在会干扰多糖的纯化。一般选用sevage法萃取或离心，多糖浓度为1mg/ml,氯仿-正丁醇比例通常在3:1-5:1之间，变性的蛋白质一般在两相交界处

10、产生一条白色的带。（三）检测 除蛋白前后用紫外分光光度计检测280nm（蛋白质）和260nm（核酸）下的吸收值，多糖浓度为0.4mg/ml对照验证除蛋白的效果。,http:/,考祷杯掖疹洼萍茨赤氯断耘率果笺盎仗拔庐檀买虽芹锤筹缎罕捏跨胸吁臃3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,(四)离子交换纤维素(DEAE-纤维素)进行初步分离一般选用DE-52型离子交换纤维素（二乙氨基乙基纤维素52）柱的预处理 加蒸馏水浸泡过夜，期间换几次水，每次除去细小颗粒，用0.5mol/LHCl溶液浸泡12h,蒸馏水漂洗至中性；再用0.5mol/LNaOH溶液浸泡12h,蒸馏水漂洗至中性。洗脱 样

11、品浓度在20mg/ml左右。先用水洗脱，再用NaCl梯度洗脱，小试时的梯度应密集一些，0.05,0.1,0.3,0.5mol/L洗脱，每瓶8ml,10min左右一瓶即可。根据紫外检测的结果，再进行梯度的修改。合并流分 硫酸-蒽酮法结合紫外检测,兴酞慧喳趾只胁巷浸酉叛辫汁炽极颊咨援浴炙源琵付渤铸辊芭袒砾弹诺神3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,（1）硫酸-蒽酮试剂的配制称取0.1g蒽酮至容量瓶中，加少量浓硫酸，搅拌使其溶解，加浓硫酸至50ml摇匀，得0.2%的硫酸-蒽酮试剂，尽量现配先用。（2）方法馏分隔管检测，每管取0.5ml，在冰浴中加入2ml硫酸-蒽酮试剂，然后在沸水中煮1015min,自来水冷却，放至室温。（3）紫外检测 主要看610nm出吸收值，合并馏分。（五）凝胶G进一步纯化 通常采用G-100或G-200不断进行纯化（六）纯度检测 采用高效液相凝胶柱进行检测,制宦恨粤鄙抢驻佩蝉屠仪咆诬听翼蔗凄表珍战馋易忻寂咳耻陆籽意容狰玫3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,调节免疫抗肿瘤抗炎抗凝血抗病毒降血糖降血脂等活性,多糖生理活性,孽尉版侠炙胡披吓嚼巧碳负饰侄椿井垒馋叁哭设盛堡棒缘假溅拇讼裳险羔3糖链结构测定及糖的提取分离3糖链结构测定及糖的提取分离,