细菌染色和涂片观察的方法.ppt
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1、细菌的染色和涂片观察,第一节 不染色标本检查法,所谓不染色标本检查法是将细菌标本不经染色直接镜检,从而观察生活状态下细菌的形态及运动状况的一种检查方法。这种检查方法虽可看到细菌的大致轮廓,但主要用于观察细菌的动力。,一、不染色标本检查法的具体方法,1、压滴法2、悬滴法3、毛细管法,第二节 染色标本检查法,所谓染色标本检查法是用特殊的手段对细菌进行染色,而后再检查其形态、大小、排列方式、染色反应以及特殊结构的一种检查方法,有助于细菌的初步识别或诊断。,细菌染色的一般程序,细菌染色的基本程序是:涂片 固定(媒染)染色(脱色)(复染),1、涂片制备:,随标本的种类而略有不同。一般临床标本大多可直接涂
2、抹于洁净载玻片上;培养的细菌,若为液体培养液,亦可直接涂于载玻片上;若为固体培养基上的细菌,则先取一接种环生理盐水于载玻片中央,然后从培养基上取菌少许,在盐水中研磨均匀,使呈轻度乳浊,以接种环扩成1cm2或2份硬币大小的涂面,在室温下自然干燥或放在火焰上方的热空气中慢慢烘干。但切忌紧靠火焰烤干。,2、固定:,染色前必须先行固定。其目的在于凝固细胞质和其它细胞结构成分而杀死细菌;使菌体粘附于玻片上以及改变细菌对染料的通透性(因活菌通常不易使染料透入细胞内)。固定的方法一般采用火焰加热法,在特殊目的时也可用冷冻干燥法或化学法如醇、酸、氯化高汞、重金属盐或氧化剂等进行固定。,3、媒染:,媒染的目的是
3、增加染料和被染物的亲和力。凡使染料固定于被染物;或引起细胞膜通透性改变的物质统称为媒染剂。常用的媒染剂有明矾、苦味酸、金属盐、碘等。也可用加热法媒染。媒染剂可用于固定之后,亦可含于固定液或染液中,也可在初染之后复染之前进行。,4、染色:,随目的而选用适宜的染液。染色时,滴加染液以覆盖涂面为度,染色时间随方法而定。单染法只用一种染料如吕氏美兰、稀释石炭酸复红等;而多数染色法需用第二种染液进行复染。,5、脱色:,脱色:是使被染物脱去已染上的颜色。脱色的目的是观察细菌与染料结合的稳定程度,故可作为鉴别染色之用。凡具有脱色作用的化学试剂称脱色剂。脱色剂或呈溶媒作用,如醇类、丙酮等;或能影响蛋白质的电离
4、程度,改变其电荷性质或数量,因而影响细菌与染料的结合程度,如酸类能减少细菌的负电荷,故可作碱性染料的脱色剂。,6、复染:,已经脱色处理的细胞或其结构常以复染液作复染以便于观察。复染液与初染液的颜色不同而成鲜明对比,所以复染也称为对比染色。复染液不宜太强,以免掩盖初染的颜色而失去对比作用。,常用染色法,细菌的常用染色法有:单染色法、复染色法、特殊结构染色法、负染色法以及荧光染色法等。,(一)、单染色法:,单染色法是指用一种染料进行染色的方法。如用美兰或稀释石炭酸复红等,使各种细菌均染成同一种单一的颜色。故此法只能显示细菌的形态及大小,对细菌的鉴别价值不大。,(二)、复染色法:,复染色法是用二种以
5、上染料进行染色的方法。此法除显示细菌的形态、大小外,还有鉴别细菌种类的价值,因此也称鉴别染色法。常用的鉴别染色法有革兰氏染色法及抗酸染色法。,1、革兰氏染色法(Grams Stain),是最常用的鉴别染色法之一。此染色法是由丹麦细菌学家 Christian Gram氏于18821884年发明的,至今已逾百年,仍在广泛使用,是细菌学中最为经典的染色方法。,(1)、革兰氏染色的方法:,固定初染媒染脱色(结晶紫或龙胆紫)(卢戈氏碘液)(95%酒精)复 染(稀释复红),固定 初染 媒染 脱色 复染 革兰氏阳性菌,用符号“G+”或“GP”(Grams Positive)表示。革兰氏阴性菌,用符号“G”或
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