细胞融合与单克隆抗体.ppt
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1、3.2.1 杂交瘤单克隆抗体技术的理论3.2.2 杂交瘤技术过程3.2.3 单克隆抗体的规模化生产3.2.4 单克隆抗体的改造和应用,3.2 单克隆抗体技术,免疫系统,由淋巴器官、组织、细胞共同构成。免疫器官:中枢免疫器官:骨髓、胸腺、(鸟、禽)法氏囊 外周免疫器官:淋巴结、脾、扁桃体等免疫细胞:造血干细胞、淋巴细胞(T、B、NK)、白细胞等。免疫分子:抗体、补体、细胞因子、干扰素等。,3.2 单克隆抗体技术,胸腺,骨髓,中枢淋巴器官,外周淋巴器官,扁桃体,淋巴结,淋巴结,脾,淋巴管,肠系膜淋巴结,T细胞和B细胞的分化,3.2 单克隆抗体技术,T细胞介导的免疫应答,一、抗原的识别与递呈(感应阶
2、段),二、反应阶段,三、效应阶段,四、细胞免疫的生物学效应,3.2 单克隆抗体技术,一、抗原的识别与递呈(感应阶段),(一)APC对抗原的递呈(二)T细胞的双识别,3.2 单克隆抗体技术,抗原呈递细胞(antigen-presenting cell),一种特殊类型的细胞,携带细胞表面MHC(主要组织相容性复合体)II类分子,涉及抗原的加工和呈递给辅助T细胞。,3.2 单克隆抗体技术,3.2 单克隆抗体技术,T细胞活化的第一信号,二、反应阶段,由TCR 识别并结合抗原性多肽传递抗原信号;CD4、CD8分子分别识别MHC-II类和MHC-I类分子。,3.2 单克隆抗体技术,T细胞活化的第二信号,又
3、称协同刺激信号,由众多协同刺激分子与相应受/配体结合介导,主要是B7/CD28分子对之间的作用。,3.2 单克隆抗体技术,T细胞在双信号的激发下,表达细胞因子及相应受体,进一步促进T细胞活化、增殖。若TCR特异性识别并结合抗原肽的过程中缺乏协同刺激信号,则T细胞被诱导呈不应答。,3.2 单克隆抗体技术,(三)T细胞的增殖和分化,CD4+TH 分化为:TH1 CD8+CTL(TC)分化为:有杀伤效应的CTL(TC),3.2 单克隆抗体技术,Tc杀伤细胞,3.2 单克隆抗体技术,细胞免疫应答,3.2 单克隆抗体技术,体液免疫应答,3.2 单克隆抗体技术,抗原:一类能够刺激动物机体的免疫系统,诱导发
4、生免疫 应答,产生体液免疫的抗体和(或)细胞免疫的效 应淋巴细胞,并在体内外与之反应的物质。,3.2 单克隆抗体技术,能起抗原作用的各类物质必须具备如下特性:,(1)外源性 机体以往从未接触过的外源异物或异体;(2)结构性 分子量在10,000以上的大小,分子表面有稳定 的环状结构基团(而非线状基团)作为识别位点;(3)特异性 由于抗原有不同的决定簇,产生相应的抗体与 抗原间的反应是特异性的。,3.2 单克隆抗体技术,抗体:在对抗原刺激的免疫应答中,B淋巴细胞产生的一 类糖蛋白,能与相应抗原特异的结合,产生各种 免疫效应(生理效应)的球蛋白。,3.2 单克隆抗体技术,抗体(Ig):(Immun
5、oglobulin)抗体分类:IgG、IgA、IgM、IgD、IgE,抗体结构,3.2 单克隆抗体技术,抗体作用的机理,中和反应 聚集反应 沉淀反应 补体活化,3.2 单克隆抗体技术,每个B淋巴细胞只能产生一种针对它能够识别的特异性抗原决定簇的抗体,而由这一个细胞通过有丝分裂繁殖形成的细胞群称为“克隆”,由这一个克隆系产生的抗体称为单克隆抗体,3.2 单克隆抗体技术,单克隆抗体技术的基本理论,正常淋巴细胞(如小鼠脾细胞)具有分泌抗体的能力,但不能在体外长期培养,瘤细胞(如骨髓瘤)可以在体外长期培养,但不分泌抗体。于是Kohler和Milstein 于1975年将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技
6、术,获1984年诺贝尔奖。,3.2 单克隆抗体技术,Georges J.F.Kohler,Csar Milstein,3.2 单克隆抗体技术,单克隆抗体(monoclonal antibody),随着在研究上应用日益广泛,对抗体的数量和质量(专一性)要求越来越高数量多:传统的实验动物马,兔等免疫不方便 质量高:大动物免疫难以做到单克隆,3.2 单克隆抗体技术,3.2 单克隆抗体技术,单克隆抗体生产技术(杂交瘤技术),用细胞融合技术获得单克隆抗体综合了两方面优势:淋巴细胞肿瘤:能不断增殖,没有产生专一抗体能力。从脾脏得到淋巴细胞:能产生专一抗体,不能不断增殖。,3.2 单克隆抗体技术,杂交瘤技术
7、的基本原理,利用细胞融合技术,将已免疫过的B细胞与骨髓瘤细胞融合,在由此形成的单个杂种细胞中,B细胞提供产生单一型抗体的遗传信息,瘤细胞提供连续增殖的遗传信息。因此这种杂种细胞既能产生抗体又能无限繁殖。,3.2 单克隆抗体技术,高度均一性:纯度很高的均一性抗体 高度专一性:只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应 大量产生及稳定性:杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代,3.2.1.2 单克隆抗体的特性,3.2 单克隆抗体技术,3.2.1.3 亲本细胞的选择,骨髓瘤细胞:1.本身不能分泌抗体2.选择次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型(HGPRT-)或者胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型(TK-)的骨髓瘤细胞,3.2
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