疑难血型鉴定及配性[1].ppt

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1、疑难血型鉴定及配型,蒲晶淼,在ABO血型系统内，几乎所有缺乏抗原的人体，在其血清内必具有所缺乏抗原的抗体，若在红细胞上具有抗原时，则其血清内必缺乏对应的抗体，但这种规则偶然也有例外，血清中的抗体和细胞上的抗原不互补，正反定型相互不支持，出现血型难以确定。另外会遇到即使ABO和RH血型相同，但由于患者血清中存在意外抗体或红细胞上致敏有意外抗体及其它原因造成交叉配血不能相合。,在ABO分型实验中，技术上的错误与各种临床情况或疾病，都能造成正反定型之间的矛盾，当预期的正反定型不能产生ABO抗原与抗体的互补结果时，首先需要排除在技术上可能发生的错误，如果细心而反复的实行对照试验产生相同形式的凝集反应，

2、则需要考虑到细胞和血清的变异情况：,（一）、实验者技术问题,有时造成正反定型不符，并不是红细胞或血清本身的问题，而是由于操作不当造成。主要原因有：1.标本或试剂搞错 2.红细胞悬液过浓或过 3.标本混乱 4.未加试剂,5.试剂受到污染6.温度在离心过程中增高7.忽略观察溶血现象8.细胞与血清间比例不适当，未发现弱凝集9.如果使用血清来悬浮细胞，血清中的高浓度血型物质中和了抗体试剂，使其不能再与红细胞抗原发生反应，出现了假的阴性反应10.在反定型试验时没有加血清，误认为是阴性结果；11 结果判断错误,（二）如何解决技术原因造成的正反定型不符,为解决ABO血型不一致而开始做深入试验之前，首先要排除

3、技术上可能发生的错误，首先要重复作正反定性试验使用质量合格的试剂，严格地执行正规的操作，再者则重新抽取标本。如果先前试验中红细胞悬浮在血清或血浆中，改为用盐水洗涤红细胞后配成悬液，以及细心观察和解释试验结果就可解决许多明显的问题如果细心而反复的实行对照实验还是与先前一样的结果。就要根据情况从细胞和血清中寻找原因。,ABO血型定型中由于细胞和血清本身的原因造成正反定型不一致,一、减弱或缺少的抗原反应 二、未知的抗原反应 三、减弱或缺少的抗体反应 四、未知的抗体反应,绝大多数A和B型人红细胞用合格的抗-A和抗-B试剂检测都呈3十和4+的凝集强度，血清用合格的试剂红细胞检测绝大部分呈2+至4+的凝集

4、强度。在A和B型红细胞凝集强度低于2+和1+的人中，有一部分是变异基因所致的亚型红细胞或者是疾病相关的抗原减弱。血清中的抗A或抗B凝集强度低于2+和1+的人中，是抗体减弱或缺乏。,一个人减弱或缺少抗原的反应范例,一、减弱或缺少的抗原反应,促成红细胞抗原表面减弱或减少的情况包括下列3种情况：A或B抗原的亚型疾病状态（如白血病）血型特异性可溶性物质,（1）这位病人的红细胞分型法与正常的强凝集反应相比，证明是减弱的反应，依据反定型法，应预期病人具有A抗原的活性。红细胞与抗AB的减弱凝集反应及抗A试剂缺乏凝集反应，都暗示为A型的亚型。（2）补充的实验室试验：吸收和放散试验证明红细胞附着有抗A。病人唾液

5、含有A与H物质。（3）讨论：A亚型的问题要比B亚型者多而常见，因为A2或A2B型的人体血清中可能有抗A1抗体。比A2型为弱的A亚型不多见。若一位弱亚型病人错误地分型为O型而输予O型血液时，预期应无严重的后果。但若将一位弱亚型病人错误地分型而输给一位O型的病人时，则能引发严重的输血反应问题。,1.A或B抗原的亚型,当A、B及AB型红细胞与试剂抗血清作实验时，预期发生的反应皆为4+的强反应。正定型减弱的凝集反应，可暗示这可能是A、B亚型。当减弱的反应在健康供血者检查时，亚型是最可能的解释。抗AB分型血清能检出某些不与抗A抗B试剂发生反应的A及B型。,2、疾病状态：减弱的A抗原表现也可病人后天的特性

6、，如：A型急性白血病患者在疾病活动期改变为A2型或A3亚型，在疾病缓解期又恢复到原来A型反应。抗原性强度的减弱，也能发生于B抗原与H抗原以及其他血型系统的抗原。3、过量血型特异性可溶性物质：在患卵巢囊肿，胃癌或胰腺炎、肠道阻塞的稀有情况，能查见多量的血型特异性可溶性物质。病人血清中的ABH物质浓度极高，以抑制抗A或抗B试剂的作用，在正定型中，这种情形能产生假阴性，这种情况并非是病人的红细胞抗原发生改变，而是其血清含有过量的病人血清时，则能进行正确的ABO分型试验。,二、未知的抗原反应,未知的抗原反应在正定型中产生的情况范例，能有以下七种情况所引起：,1、获得性B抗原 获得性B抗原的特性，获得性

7、B只表现在A型红细胞上，使红细胞的反应像AB型，而血清中只有抗B 抗体，正定型中反应的强度，A抗原大于B抗原，自身对照实验为阴性反应且分泌型人体内有A物质，但B物质则缺乏。,当红细胞血型似乎是型而血清中含有抗时，应该考虑是获得性抗原只有型的红细胞能获得活性，因此称为获得性抗原，鉴别获得性抗原的方法如下：.观察细胞与抗及抗的凝集强度，与抗的反应要比与抗的反应强；.用自身的红细胞检查本人的血清其血清中的抗不能凝集自身红细胞中的类抗原；.检查唾液是否存在、物质，如果病人是分泌型，那么有物质而无物质；,4.获得性抗原在正常PH介质中，红细胞与抗-B血清发生凝集，但在等于和低于PH6的酸性条件下，凝集消

8、失，这是获得性抗原最主要的血清学特征。5.核对病人的诊断。获得性抗原的形成与结肠癌、直肠癌，革兰氏阴性细菌变形杆菌的感染有关。结论：病人为A型，具有获得性B抗原,类B抗原具有下例特点1.类B与抗B的反应一般无溶血现象。类B是获得性的，不符合遗传规律，病情好转，类B就消失，真正B抗原符合遗传规律终生不变。2.类B与抗B结合疏松，用类B红细胞作吸收放散试验，可放散出大量抗B抗体，类B病人的唾液中不含B血型物质。,3.因类B抗原而错定血型，其血清中天然抗体不合规律，如是AB型血清中应该不含天然抗B抗体。但A型类B表现似AB型，血清中却含有抗B抗体，此抗体并不凝集患者本人的红细胞，只要按正规操作，在血

9、型鉴定中很容易发现被检者红细胞所含抗原与血清中所含抗体的矛盾。在AB型的交叉配血时，如发现主侧凝集，应考虑类B存在，重新鉴定血型并检查唾液中的血型物质，测出被检者真正的血型，最后选择同型人输血。4.类B与全凝集或多凝集红细胞不同，前者只与抗B反应，在AB型血清中不凝集。,（二）改变的抗原,红细胞表面遗传产生的多凝集反应可分为先天性的或为获得性的。红细胞被大多数正常人类血清所凝集的反应称为多凝集反应。三种形式的多凝集反应包括：T抗原活化，Tn 抗原活化多凝集性。,所有正常人的血清含有抗T抗体，所以T活化的红细胞都是多凝集的。T活化的红细胞与血清的反应，是一种混合视野的凝集反应，T活化的红细胞不为

10、脐带血清所凝集，因为脐带血清中缺乏抗T抗体，预备T活化的红细胞，使其吸附血清中的抗T抗体，就能正确定出ABO分型法。,（三）抗体附着的红细胞：,有抗体稠密的附着的红细胞，显示直接抗人球蛋白试验阳性。可在正定型中产生混合视野或减弱的凝集反应。引起这种现象的原因包括：自身免疫溶血性贫血症 产生药物抗体 输血反应 新生儿溶血病,患新生儿溶血病(HDN)婴儿，其红细胞严重地包被IgG抗体分子，时常是与抗D试剂和抗-A、抗-B试剂发生这种自发凝集，在45C进行放散试验，可以从红细胞上解禽掉这些抗体，此后，即可用抗-A、抗-B很容易地检测这些红细胞血型。含冷抗体IgM自身凝集素的红细胞标本在盐水中也发生凝

11、集，这类冷抗体可能由37孵育和37C洗涤被清除掉，也可由DTT等巯基化合物消除掉。（还存在遮蔽现象）,自身免疫性溶血性贫血病人血清中可有温性自身抗体。能凝集自身和其它各型红细胞，病人的细胞上吸附了这种抗体，在自身或他人血清中，均可出现凝集，因此，其红细胞常被误定为AB，将其血清定型又被误定O型。由这种抗体造成的血型检查上的困难，可以用递增温度（由22度37度45度）的盐水许多红细胞后，在通过检查血型来解决，如此类抗体在配血中只影响影响病人红细胞，而血清内无游离抗体，也可用递增温度盐水洗涤红细胞后再进行配型，如果血清中有游离的抗体存在，表示病情严重，配血就较困难，不得已可选用凝集较弱的血，密切观

12、察，一旦出现反应立即停输。,（四）红细胞的混合性族群：,在ABO分型法中的混合视野型视野反应，通常是指示输了一种不同血型的血液，如输O型血至A型人或A型血或O型血人。因为输和病人自己血型不同ABO血型的严重性，故在输血前解释混合视野型凝集反应的原因至为重要。假设一位病人为A型时，而在他（她）的循环内，有些红细胞为B型或，故能招致不幸的结果。调查此病的病史，可有助于证实混合视野型凝集反应的原因。若新近输血或母儿出血或骨髓移植的受髓者能予确定排除，应考虑的其他原因为：A3亚型，Tn多凝集反应。,三、减弱的或缺少的抗体反应：,抗体的减弱或缺少，是由降低或缺少抗体的产生所致。在反定型中缺少抗体反应，可

13、有下列四种情况引起：年龄 丙球蛋白过低血症 丙球蛋白缺乏血症 嵌合现象。,一个缺少抗体的反应范例,（1）正定型抗A4+，暗示为A型，但反定型提示为AB型（2）补充试验：将正反定型试管放4度1030分钟，证明反定型的BC管能够出现凝集，自身对照试验仍保持阴性；加大血清量。（3）结论：病人为A型，抗B减弱。,（一）年龄：,新生儿与幼儿及老年人可显示种属抗体的减弱或缺少。对新生儿血清常规不做血清分型法，是因他们尚未开始产生抗体所致。在新生儿或幼儿能检的抗体，都是在母体子宫内被动获得者。,（二）丙球蛋白过低血症：,血浆蛋白的丙球蛋白部分减少（丙球蛋白低血症）能导致抗体的减弱或减少。证明的丙球蛋白过低血

14、症的情况包括：免疫抑制药物的应用，白血病，免疫缺乏性疾患及骨髓移植后。,（三）丙球蛋白缺乏血症：,丙球蛋白缺乏血症（血浆丙球蛋白减少）可为先天性的或为后天性的。如丙球蛋白缺乏血症、免疫缺乏性疾患、以及物理性（如放散线的暴露）与细胞毒杀剂的作用，都有促成丙球蛋白缺乏血症状态之发生。,溶血反应：,溶血反应和凝集反应在血型检定和交叉配血上的意义相同。在血型鉴定中因有相对应的抗原抗体而出现溶血反应时，应按血型不合处理，处理：灭活补体或用EDYA处理,四、未知的抗体反应：,反定型中所产生的未知的抗体反应是有四种情况引起：缗钱状形成冷型自身抗体未知的ABO种属凝集素未知的同种抗体。,（一）缗钱状形成：,如

15、红细胞被悬浮在自己的血浆中，红细胞的缗钱状形成或聚合现象可疑似凝集反应。能产生缗钱状形成的种种情况包括：血清蛋白浓度异常，球蛋白浓度在疾病中升高（如多发性骨髓瘤），原发性巨球蛋白血症，纤维蛋白原浓度增高，任何A/G倒置的病人，有血浆扩张剂存在。新生儿脐带内血内的华通氏胶亦能引起缗钱状形成。,（二）冷型自体抗体：,血清内可能有未知的自体抗体，与反定型中所用的A或B型红细胞抗原起反应。抗I是血清分型法最常见碰到的自体抗体。抗I通常凝集所有给血者的红细胞，包括病人自己的及反定型中所用的红细胞。一般由抗I所引起的凝集反应常比抗A及抗-B所引起者为弱。脐带血球显示的I抗原量较少，通常不被凝集。抗抗体。,

16、（三）未知的种属凝集素：,血清内未知的种属凝集素，可在室温与试剂红细胞上的对应抗原起反应。此种范例包括A2型及A2B型人体能产生“天然发生的”抗-A抗体，在A2或A2B型人体血清内的抗-A抗体可与A型红细胞发生强的凝集反应,（四）未知的同种抗体：,在一个人的血清内，除了ABO种属凝集素以外，未知的种属抗体可引起反定型的矛盾。在血清内存在的其他未知抗体，可能与试剂红细胞发生反应。如在这种情况下普检同种抗体的试验与O型红细胞的反应为阴性，则反定型应反复的与其他A1及B型红血球作试验。如此抗体与极罕见的抗原起反应，则随机选择的A1及B 型红细胞，亦可预想到缺少该抗原。,一个典型未知的抗体的反应范例（

17、1）,（1）正定型与抗A及抗AB发生（+）凝集及反定型与BC发生（4+）凝集，代表一个典型的A型反应。但与AC细胞有1+反应，暗示有额外减弱的反应抗体。（2）补充试验：血清各与三个的A1，A2及O型红细胞作试验。所有A1型红细胞都有凝集反应，但A2或O型红细胞反应为阴性。,（3）结论：病人为A2表现型，血清中有抗A1抗体。,一个典型未知的抗体的反应范例（2）,（1）依据（4+）的凝集反应，暗示为A型；但与O型红细胞发生反应，预示有额外的抗体存在。（2）补充的试验：病人红细胞与抗A反应。病人血清与额外的O、A2、A1型红细胞及O型脐带红细胞作试验。证明所有O型与A2型红细胞有凝集反应。额外的A1

18、型红细胞为阴性反应（3）结论：病人为A型表现型，具有抗-I H抗体。,一个典型未知抗体的反应范例（3）,（1）自身对照试验（病人的血清+病人的红细胞）为阳性反应，示初步认为血清有问题。（2）补体的实验室试验：实行冷自身抗体吸收法，用吸收的血清与抗A，B及O型红细胞作试验，吸收的血清与这些试剂红细胞未察见凝集反应。（3）结论：病人为AB型表现型，具有自身抗I抗体。,在每逢ABO分型问题发生时，有八个重要的自我答问方式，有助于矛盾问题的解决：,第一，受检的红细胞是洗涤后悬浮于生理盐水的吗第二，所用的检验技术为最敏感的试管方法吗？第三，已知病人年龄小于1岁或大于60岁吗？第四，已知病人的丙球蛋白浓度

19、减低吗？第五，病人血清与O型普检红细胞发生的反应和反定型所用的试剂红细胞一样吗？第六，病人的诊断是白血病、肠道阻塞、胃癌、结肠或直肠癌瘤吗？第七，血液标本是一位孕妇吗？第八，若红血球显示混合视野反应，是采自输血后的标本吗？,交叉配血,交叉配血中遇到的问题如果在血型鉴定中做了反定型，在血型鉴定中就能发现问题，如果血型鉴定中找到原因，配血问题自然能解决。,ABO同型之间交叉配血不合时的处理,1、如ABO正反定型相符，与同型血在盐水介质中不能配合。可能有IGM的不规则抗体另选同型几个献血者的血进行盲配。2、如在聚凝胺介质中不能配合，应考虑RH或其它系统免疫性抗体的存在。应做RH基因型鉴定，并用谱细胞检查病人的血清，确定抗体的特异性，另选则不含相应抗原的红细胞输血。如果没有条件鉴定，又不能及时送检的另选同型几个献血者的血进行盲配。,谢谢,