压可平Ⅱ胶囊溶出度.docx

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1、压可平II胶囊溶出度测定方法的研究摘要目的：建立压可平II胶囊中两种主成分阿替洛尔和硝苯地平的溶出度测定方法。 方法：采用小杯法，转速为50 r min-l,参照日本医疗用药品品质情报集中的溶出 度试验条件并根据样品实际情况作出相应调整，采用HPLC法分别考察压可平I胶囊在 pH1.2的人工胃液(含0.5%十二烷基硫酸钠溶液)、pH4.0醋酸盐缓冲液(含0.5%十二 烷基硫酸钠溶液)、pH6.8磷酸盐缓冲液(含0.25%十二烷基硫酸钠溶液)及水(含0.25% 十二烷基硫酸钠溶液)中的体外溶出行为。结果：阿替洛尔、硝苯地平与压可平I胶囊 中其他成分分离度良好，阿替洛尔、硝苯地平在1030gml-

2、1浓度范围呈良好线性 关系，两者在不同溶出介质中回收率均在99%以上；压可平I胶囊中两种主成分阿替洛 尔和硝苯地平在四种不同的溶出介质中溶出度的均一性良好。结论：该方法简便、准 确，重复性好，可用于该胶囊的溶出度测定。关键词：压可平I胶囊；溶出度；小杯法；反相高效液相色谱法Study on dissolution test of Yakeping II capsuleAbstract Objective:To establish a method of the dissolution test of two primary ingredients atenolol and nifedipine

3、 in yakeping I capsule. Methods:Small glass - methodwas adopted,50 r min-1.According to the dissolution test conditions in Japan squality of medical drugs information setand make appropriate adjustments in accordance with the actual situation of the sample,different yakeping II capsule were inspecte

4、d in pH1.2 solution(containing 0.5% twelve sodium dodecyl sulfate ) ,pH4.0 acetate buffer (containing 0.5% twelve sodium dodecyl sulfate ) , pH6.8 phosphate buffer (containing 0.25% twelve sodium dodecyl sulfate) and water (containing 0.25% twelve sodium dodecyl sulfate ) by HPLC. Results: The assay

5、 displayed a good linearity over the concentration range of 10 to 30 ug ml-1 for atenolol and nifedipine； the recovery of two components in different dissolution medium are all above 99%； the dissolution of different batches of yakeping! capsule in 4 different dissolution media had the similar natur

6、e.Conclusion: The method is simple, accurate and reproducible for the dissolution determination of atenolol and nifedipine in yakeping I capsule.Key words:yakeping I capsule;dissolution;small glass-method;RP- HPLC药物溶出度检查是评价制剂质量和工艺水平的一种有效手段,可以在一定程度上反 映主药的晶型、粒度、处方组成、辅料品种和性质以及生产工艺等的差异，也是评价制 剂活性成分生物利用度和

7、制剂均匀度的一种有效手段，在某种程度上能预示和区分同一 种药物生物利用度的差异，因此药物溶出度是药品质量控制必须检查的项目之一。压可平11胶囊是湖南省湘潭市城正街卫生院自制的一种中西结合降压制剂（2004湘食 药制批010号），由三味药物成分组成：丹参、阿替洛尔和硝苯地平，其中，丹参在处方 中含量较大，而两种西药成分阿替洛尔和硝苯地平的规格较小，仅为4 mg/粒。两种含 量低的西药成分（与高含量的中药成分共存于胶囊中时）在人体内是否能有效溶出？目 前，质量标准中对于该制剂还只限于测定崩解时限，该检验项目仅能反映药物是否崩解， 而不能反映出药物的生物利用度。本实验参考日本“药品品质再评价”工程在

8、溶出度研 究中所拟定的模拟人体消化道内体液的4种基本介质及相关文献1，并根据压可平11 胶囊处方成分的理化性质对溶出介质进行适当调整，建立了适宜的溶出系统，并采用高 效液相色谱法测定压可平11胶囊中两种西药成分阿替洛尔和硝苯地平的体外溶出度， 为评价和控制压可平11胶囊的质量提供了依据。1仪器与试药1.1仪器 LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司）；SPD-20AVP紫外检测器；威玛龙 色谱工作站；Luna C18柱（4.6X250 mm，5um）； ZRS-8G智能溶出仪（天津天大天 发科技有限公司）；AUD-220型电子天平（日本岛津公司）。1.2试药 阿替洛尔对照品（中国食品药品检定

9、研究院，纯度：100%，批号： 100117-200504）；硝苯地平对照品（中国食品药品检定研究院，纯度：100%，批号： 100338-200502）；压可平11胶囊（湖南省湘潭市城正街卫生院，批号：131005, 140101， 140307）；其他试剂均为国产分析纯，水为超纯水。2方法与结果2.1溶出试验条件的选择2.1.1溶出度方法的选择在本品处方中，阿替洛尔和硝苯地平含量较低，在进行溶出度 测定时考虑到含量测定方法的线性范围和检测灵敏度的要求，故采用小杯法4，溶出介 质体积为200 ml。2.1.2溶出介质的配制1 水：纯净水；pH1.2的人工胃液：取氯化钠2.0 g,加水适量溶解

10、后,加盐酸7 ml,再加水稀 释至1000 ml,混匀，即得;pH4.0醋酸盐缓冲液:将0.05 mol - L-1醋酸溶液与0.05 mol - L-1 醋酸钠溶液按16.4:3.6的比例混合，即得；pH 6.8磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾1.7 g 和无水磷酸氢二钠1.775 g,加水溶解并定容至1000 ml,即得。由于该制剂中的硝苯地平为亲水性极差的化合物，所以本实验选择采用十二烷基硫酸钠 为表面活性剂，分别采用含有1 %，0.5 %，0.25 %十二烷基硫酸钠溶液5的四种介质(pH1.2, pH 4.0, pH6.8,水)200 ml为溶出介质进行实验(由于阿替洛尔的水溶性较好， 表面

11、活性剂对其溶解影响不大，因此没有考察表面活性剂对阿替洛尔溶出曲线的影响)， 不同添加量十二烷基硫酸钠对硝苯地平溶出行为的影响结果见图14。10090807060504030200102030405060t/min1009080706050403020100102030405060t/min10图1 pH 1.2介质中分别添加0.25 %，图2 pH 4.0介质中分别添加0.25 %，0.5 %，1 %十二烷基硫酸钠的溶出曲线0. 5%，1 %十二烷基硫酸钠的溶出曲线Fig 1 Dissolution curve of pH 1.2 mediumFig 2 Dissolution curve o

12、f pH 4.0 mediumwere added twelve sodium dodecyl sulfate were added twelve sodium dodecyl sulfate0.25 %，0.5 %，1 %0.25 %，0.5 %，1 %100806040200102030 t/min40506000102040506030 t/min图3 pH 6.8介质中分别添加0.25 %，0.5 %，1 %十二烷基硫酸钠的溶出曲线图4水介质中分别添加0.25 %，0.5 %，1 %十二烷基硫酸钠的溶出曲线 Fig 3 Dissolution curve of pH 6.8 mediu

13、m were added twelve sodium dodecyl sulfate 0.25 %, 0.5 %, 1 %Fig 4 Dissolution curve of water medium were added twelve sodium dodecyl sulfate 0.25 %,0.5 %,1 %由图1可知，在pH 1.2介质中十二烷基硫酸钠的浓度对硝苯地平的释放有一定的影 响，当十二烷基硫酸钠的浓度由0.25 %增加到0.5 %时，硝苯地平的溶出量明显增加， 但当十二烷基硫酸钠的浓度由0. 5 %增加到1 %时，硝苯地平的溶出量没有明显变化， 按国家药典委员会对国家药品标准

14、中溶出度及释放度应用指导原则的修改建议指南和 考察结果，当溶出介质为pH 1.2时，十二烷基硫酸钠的添加量为0.5 %；由图2可以看出， 与在pH 1.0介质中的情况类似，在pH 4.0介质中，添加0.5 %十二烷基硫酸钠介质的溶出 曲线与添加1 %十二烷基硫酸钠介质的溶出曲线很相似，硝苯地平在此两种溶出介质中 的释放量明显高于在添加量为0.25 %十二烷基硫酸钠介质中的释放量，同样，当溶出介 质为pH 4.0时，我们选择0.5 %为十二烷基硫酸钠的最终添加量；由图3可知，在pH 6.8 介质中，添加了不同浓度十二烷基硫酸钠的溶出曲线基本重合，可见，硝苯地平在三种 不同浓度十二烷基硫酸钠的溶出

15、介质中的释放行为十分类似，故选择最低浓度0.25 %作 为十二烷基硫酸钠的最终添加量；从图4可以看出，在水介质中十二烷基硫酸钠的浓度 对硝苯地平的释放量非常敏感，我们选择了最低浓度0.25 %作为最终的添加量。2.1.3转速的选择 根据国家药品标准工作手册中对溶出度的检查与指导原则桨 法以50 r min-1为主，其最能体现人体正常肠胃蠕动状态，故选用50 r min-1作为测 定转速。经过上述实验筛选，确定最终的溶出试验条件：溶出方式统一选择小杯法，转速为 50 r - min-1，溶出介质量200 ml；溶出介质中表面活性剂十二烷基硫酸钠的添加量分别 为：pH 1.2 （含0.5 %十二烷

16、基硫酸钠溶液），pH 4.0 （含0.5 %十二烷基硫酸钠溶液），pH 6.8 （含0.25 %十二烷基硫酸钠溶液），水（含0.25 %十二烷基硫酸钠溶液）。2.2溶出度测定方法的建立2.2.1色谱条件 流动相：甲醇-水-磷酸（70： 40： 0.11），流速为1.0 ml.min-1，检测波长 为237 nm，进样体积为10l。在此色谱条件下测定对照品、压可平11胶囊样品及阴性 样品，色谱图见图5,待测指标成分与其他成分分离度良好。mAU250min0.05.010.015.0mAU图5对照品(A)、样品(B)和阴性样品(C)的高效液相色谱图Fig 5 Chromatograms of re

17、ference substances( A) , sample( B) and negative sample(C)1、2 阴性样品(negative sample) 3、阿替洛尔(atenolol)4、硝苯地平(nifedipine)2.2.2线性实验 分别精密称取阿替洛尔、硝苯地平对照品各约20mg，置100ml量瓶中， 用以上四种溶出介质溶解并稀释至刻度，即得对照品储备液，精密量取对照品储备液适 量，用溶出介质稀释制成浓度为10,15,20,25,30瞄.ml-1的溶液，精密量取上述溶液各10 ul,分别进样分析。记录色谱图，以阿替洛尔、硝苯地平的浓度(C)为横坐标，以相应 的峰面积(A

18、)为纵坐标，进行线性回归，阿替洛尔、硝苯地平在1030哽.ml-1的浓度范 围内线性关系均良好，结果见表1。表1标准曲线试验结果Table 1 results of standard curve介质(medium)成分(ingredients)标准曲线(linear equation)相关系数pH 1.2阿替洛尔 (atenolol) 硝苯地平 (nifedipine)A=395218XC+3175.3A=513257XC+2831.70.99960.9998pH 4.0阿替洛尔(atenolol)A=402117XC+3327.80.9997硝苯地平 (nifedipine)A=495572

19、XC+3585.40.9999pH6.8阿替洛尔(atenolol)A=415892XC+4781.50.9995硝苯地平(nifedipine )A=524681XC+3317.20.9998水 (water)阿替洛尔(atenolol)A=423416XC+5713.10.9996硝苯地平(nifedipine )A=534921XC+2781.50.99992.2.3回收率试验 精密称取阿替洛尔对照品与硝苯地平对照品适量，分别用以上四种溶 出介质溶解制成20哽ml-1的对照品溶液，另取相当于1 /2粒的阴性样本量(包括囊壳)， 置100ml量瓶中，分别加以上四种溶出介质振摇溶解并稀释至刻

20、度，配制相当于标示量 80 %(16 pg ml-1)，100 %( 20 pg ml-1)，120 %( 24 gg ml-1)的溶液，每个浓度各三份， 摇匀，用0.45 um的微孔滤膜滤过，精密量取各续滤液10 ul进样分析，计算分别为按外 标法以峰面积计算阿替洛尔、硝苯地平的平均回收率，结果表明，各溶出介质中回收率 试验结果均良好，见表2。表2压可平II胶囊在不同溶出介质中回收率试验结果Table 2 results of recovery test in 4 mediums for yakeping II capsule平均回收率(%)(average recovery) RSD(%)

21、 介质(medium) 成分(ingredients)(n=9)16 pg ml-120 pg ml-124 pg ml-1pH 1.2阿替洛尔 (atenolol) 硝苯地平 (nifedipine)99.52%99.72%99.73%99.45%99.67%99.38%0.730.65pH 4.0阿替洛尔(atenolol)99.29%99.65%99.72%0.47硝苯地平(nifedipine)99.57%99.62%99.36%0.51pH 6.8阿替洛尔(atenolol)99.43%99.55%99.61%0.67硝苯地平(nifedipine)99.59%99.32%99.63

22、%0.72水 (water)阿替洛尔(atenolol)99.58%99.69%99.35%0.63硝苯地平(nifedipine)99.68%99.39%99.77%0.592.2.4精密度试验量取用以上四种溶出介质稀释制成的20 gg mi-1的阿替洛尔、硝苯地 平对照品溶液分别连续进样6次，每次10 M，记录色谱图，计算各组峰面积的RSD，阿替 洛尔和硝苯地平在四种介质（pH 1.2, pH 4.0, pH 6.8，水）中的峰面积RSD分别为0. 3 % 和0.5 % , 0. 5 %和0.7 % , 0. 9 %和0.8 %, 0. 7 %和0.9 %,表明本方法精密度良好。2.2.5

23、稳定性试验取回收率试验中浓度为20哽.ml-1的阿替洛尔、硝苯地平对照品溶液， 室温放置，分别在0, 2, 4, 6, 8, 24 h进样10 M,记录色谱峰面积，阿替洛尔、硝苯地平在 四种介质（pH 1.2, pH 4.0, pH 6.8，水）中的峰面积RSD分别为1. 2 %和1.0 % , 1. 3 %和 1.1 % , 1. 2 %和1.5 %, 1. 1 %和1.3 %，表明阿替洛尔与硝苯地平在各溶出介质中24 h内基 本稳定。2.2.6滤膜的干扰试验取阿替洛尔、硝苯地平对照品溶液，考察经滤膜（0.45 gm） 过滤前后的峰面积变化情况，结果表明滤膜没有干扰。2.2.7阴性干扰试验

24、取按压可平11胶囊工艺方法制备缺阿替洛尔、硝苯地平的压可平 II胶囊1粒（含胶囊壳），分别加以上四种溶出介质200 ml，在37 C水浴中超声（200 w,45kHz） 10 min,放冷，用0.45皿的微孔滤膜滤过，取续滤液10进样分析，记录色谱图， 结果表明，各溶出介质条件下阴性样本均不干扰本品溶出度的测定。2.2.8溶出度试验 取本品，照溶出度测定法中国药典2010年版二部附录XC第三法，分别以pH 1.2的人工胃液（含0.5 %十二烷基硫酸钠溶液）、pH 4.0醋酸盐缓冲液（含0.5 %十二烷基硫酸钠溶液）、pH 6.8磷酸盐缓冲液（含0.25 %十二烷基硫酸钠溶液）及水（含0.25

25、%十二烷基硫酸钠溶液）200 ml为溶出介质，转速为50 rmin-1，依法操作，于第5，10，15，30，45，60 min分别取样5 ml （并及时补充相应介质5 ml），用0.45皿 微孔滤膜滤过，按“2.2.1”项下色谱条件测定阿替洛尔、硝苯地平的溶出量，分别绘制 溶出曲线。2.2.9溶出曲线的均一性取压可平11胶囊样品6粒，照溶出度试验方法，每个溶出杯中 加入1粒胶囊进行试验，考察溶出均一性。计算累计阿替洛尔、硝苯地平溶出量与时间 的溶出曲线，结果在四种溶出介质中，6粒胶囊样本中的两种西药成分溶出度RSD均小于2 %，表明样品溶出度的均一性良好，见图6、7。1008060402010

26、2030405060t/min0102030405060t/min图6压可平II胶囊中阿替洛尔的溶出曲线Fig 6 The dissolution curves of atenolol in yakeping II capsuleA. pH 1.2 (含0.5 %十二烷基硫酸钠溶液(containing 0.5 % twelve sodium dodecyl sulfate) B. pH 4.0 (含0.5 %十二烷基硫酸钠溶液(containing 0.5 % twelve sodium dodecyl sulfate) C. pH 6.8 (含0.25 % 十二烷基硫酸钠溶液(contai

27、ning 0.25 % twelve sodium dodecyl sulfate) D.水(含0.25 %十二烷基 硫酸钠溶液(containing 0.25 % twelve sodium dodecyl sulfate)0102030405060t/min0102030405060t/min10080604020100806040200102030405060t/minCD图7压可平I胶囊中硝苯地平的溶出曲线Fig 7 The dissolution curves of nifedipine in yakeping II capsuleA. pH 1.2 (含0.5 %十二烷基硫酸钠溶液

28、(containing 0.5 % twelve sodium dodecyl sulfate) B. pH 4.0 (含0.5 %十二烷基硫酸钠溶液(containing 0.5 % twelve sodium dodecyl sulfate) C. pH 6.8 (含0.25 % 十二烷基硫酸钠溶液(containing 0.25 % twelve sodium dodecyl sulfate) D.水(含0.25 %十二烷基 硫酸钠溶液(containing 0.25 % twelve sodium dodecyl sulfate)2.2.10样品溶出度检测 取3批样品进行溶出度试验（批

29、号：131005, 140101, 140307）, 两种成分在四种不同的溶出介质中的累计溶出数据（平均值）见表25。表2样品的溶出度测定结果（介质：pH 1.2 （含05 %十二烷基硫酸钠溶液），n=3）Table 2 results of dissolution determination（medium :pH 1.2 （containing 0.5 % twelve sodium dodecyl sulfate）, n=3）批号(Lot No.)阿替洛尔溶出度(%)硝苯地平溶出度(%)(dissolution result of atenolol) (%)(dissolution res

30、ult of nifedipine) (%)13100581.2%0.376.5%0.414010179.5%0.577.2%0.314030780.9%0.776.9%0.6表3样品的溶出度测定结果(介质：pH 4.0(含05 %十二烷基硫酸钠溶液)，n=3)Table 3 results of dissolution determination(medium :pH 4.0 (containing 0.5 % twelve sodium dodecyl sulfate), n=3)批号阿替洛尔溶出度()硝苯地平溶出度()(Lot No.) (dissolution result of at

31、enolol) (%)(dissolution result of nifedipine) (%)13100582.1%0.580.1%0.314010180.6%0.381.5%0.414030781.7%0.682.4%0.7表4样品的溶出度测定结果(介质：pH 6.8(含025 %十二烷基硫酸钠溶液)，n=3)Table 4 results of dissolution determination(medium :pH 6.8 (containing 0.25 % twelve sodium dodecyl sulfate), n=3)批号阿替洛尔溶出度()硝苯地平溶出度()(Lot N

32、o.) (dissolution result of atenolol) (%)(dissolution result of nifedipine) (%)13100581.6%0.380.7%0.414010180.5%0.781.9%0.614030782.3%0.582.1%0.4表5样品的溶出度测定结果(介质：水(含0.25 %十二烷基硫酸钠溶液)，n=3)Table 5 results of dissolution determination(medium :water (containing 0.25 % twelve sodium dodecyl sulfate), n=3)批号

33、阿替洛尔溶出度(%)硝苯地平溶出度(%)(Lot No.) (dissolution result of atenolol) (%)(dissolution result of nifedipine) (%)13100583.1%0.583.5%0.714010182.8%0.382.6%0.614030781.2%0.683.9%0.53讨论1、压可平11胶囊为中西结合类降压制剂，其溶出度测定方法尚未见报道，本文以制剂 中含量较低的两种西药成分为溶出指标，采用高效液相色谱法与紫外检测器，参考原标 准含量测定项下的色谱条件，对目标峰进行分离定量检测，结果峰型良好，两个目标物 与制剂中其他成分分

34、离度符合规定，整个方法简单、结果准确，可适用于压可平11胶囊 的溶出度测定及质量控制。2、本实验开始采用日本医疗用药品品质情报集中的溶出度试验条件，转速为50 rmin-1，考察了压可平11胶囊在pH 1.2的人工胃液、pH 4.0醋酸盐缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲 液及水中的溶出情况，分别于5、10、15、20、30、45、60 min时取样，并及时补充溶 出介质，研究发现压可平11胶囊中的阿替洛尔在四种溶出介质中的溶出情况均良好，30 min时的溶出百分率均超过了70 %，60 min的溶出百分率超过了80 %；而硝苯地平在以 上四种溶出介质中的溶出情况均不理想，60 min时的溶出百分

35、率均未超过25 %。考虑到 硝苯地平的理化性质，实验采取了在溶出介质中加入表面活性剂的方式。3、由于两种西药成分在本品中含量较低(均为4 mg/粒),在进行溶出度测定时采用了 小杯法，分别考察了压可平11胶囊中的两种西药成分在四种不同溶出介质中的溶出行 为，结果显示，压可平11胶囊在四种介质中均能顺利溶出，且溶出均一性良好。参考文献：1谢沐风.溶出曲线相似性的评价方法J.中国医药工业杂志,2009,40(4):308-311李瑞芳,程秀民.自制恩替卡韦片与上市对照制剂体外溶出度对比研究J.药物分析杂志，2011,31(7):1333-13353 翟学佳，刘金梅，史芳，等.复方川脊片溶出度的测定J,中国药师,2012,15(2):227-2294 国家药典委员会.中国药典M 2010版二部:附录：735 张锦袁，龚士学袁,董晓蓉.环扁桃酯胶囊溶出度测定方法的研究J .药物分析杂志， 2011,31(10):2001-20047国家药典委员会.国家药品标准工作手册M .3版.北京，中国医药科技出版社.1998:68.