《实验室检验》课件.ppt
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1、第2章 实验室检验,实验室检验就是运用物理学、化学和生物学等实验技术和方法,对病畜的血液、尿液、粪便、体液(如胃液、脑脊髓液、胸腹腔穿刺液)、组织细胞及病理产物,在实验室特定的设备和条件下,测定其物理性状,分析其化学成分,或借助于显微镜观察其有形成分的方法,以获取反映机体功能状态,病理变化或病因等客观资料,配合临床资料进行综合分析。,实验室检验是一种复杂而细致的工作,为了得到正确的结果,必须遵守严格的操作规程和次序。采取的样本必须有代表性,检验所有的试剂与器材,应符合要求,并定期进行检查和校正。要注意消毒工作,污染的器皿应先消毒后洗涤,以防传染性物质的扩散。,血液检验,血液检验是临床医学检验中
2、应用最广,对辅助诊断最有价值,最常用的基本内容之一。血液是由血浆和血细胞两部分组成,是通过循环系统与全身各个组织器官密切联系,参与机体呼吸、运输、防御,调节生理,维持正常新陈代谢和内外环境平衡的。,临床血液学检查内容,物理学检查:借助物理学方法测定其物理特性,如出血时间、凝血时间、红细胞脆性、红细胞沉降率、红细胞压积。化学检验:即用定性或定量的化学分析方法,检测被检标本各种化学成分方面的变化,如血红蛋白的检查。显微镜检查:检查其血细胞的形态及数量的变化,如红细胞,白细胞,血小板等。,临床血液检查内容,自动化仪器检验,血液分析仪,血液检验,血液样本的采取与抗凝,猪的前腔静脉采血,马的颈静脉采血,
3、兔的耳静脉采血,血液检验,血液的抗凝,草酸钠 是常用的抗凝剂,每1.52.0mg可抗凝1.0ml血液,可用于血液常规检验。因对红细胞大小有影响,故不能用红细胞压积测定,如测定红细胞压积时,可用双草酸盐抗凝剂或乙二胺四乙酸二钠。,双草酸盐抗凝剂 草酸钠 0.8g草酸铵 1.2g蒸馏水 加至100ml 溶解后吸取0.5ml,加入供采血试管或小瓶中,置干燥箱内(温度不超过80)烘干备用,可供5ml全血抗凝。,血液检验,乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2)每10mg可使5ml全血抗凝;或配成10%的溶液,每2滴可使5ml全血抗凝。可适用于一般的血液学检查,特别是血小板计数,但因为影响血小板聚集和白细胞吞
4、噬功能,不适合于血象及血小板功能检查。,3.8%枸橼酸钠溶液 每0.5ml可使5ml全血抗凝。常用于血沉、凝血因子和血小板功能检查。因其毒性小又可作为血液保养液。但不适用于血液化学检验。由于抗凝剂溶解缓慢,故只能配成溶液,不能用粉剂。,血液的抗凝,血液检验,肝素 肝素价格最贵,其优点是抗凝作用强,不影响血细胞的体积,不致溶血等,可用于多种血液生物化学分析和红细胞压积测定。但过量的肝素可引起白细胞聚集和血小板减少,故不适用于白细胞和血小板计数,也不适用于血涂片检查,因其在瑞氏染色时会出现蓝色背景,更不能用于凝血象的检查。,血液的抗凝,通常用肝素粉剂配成1g/L水溶液。取0.5ml置小瓶内,放于3
5、750中烘干后贮于冰箱内保存。能使5ml血液不凝固,肝素抗凝剂应及时使用,放置过久易失效。怀疑传染病时,采血应防止到处流散,检后残余血液及所用器皿应进行消毒处理。,红细胞背景知识,红细胞也称红血球,是血液中数量最多的一种血细胞,同时也是脊椎动物体内通过血液运送氧气的最主要的媒介。在所有的脊椎动物及若干无脊椎动物,其血红素包含在特定的细胞中来进行其机能活动,这种血球称为红细胞。其它的血细胞,如白血球,则是免疫细胞。,红细胞中含有血红蛋白,因而使血液呈红色。血红蛋白能和空气中的氧结合,因此红细胞能通过血红蛋白将吸入肺泡中的氧运送给组织,而组织中新陈代谢产生的二氧化碳也通过红细胞运到肺部并被排出体外
6、。血红蛋白更易和一氧化碳相合,当空气中一氧化碳和含量增高时,可引起一氧化碳中毒。红细胞和血红蛋白的数量减少到一定程度时,称为贫血。红细胞大量被破坏可引起溶血性黄疸。红细胞描述:多,小而圆,中央着色较浅,无核。禽类称为凝血细胞,一般为卵圆形,有细胞核,比哺乳动物的大得多,数量少。,血液检验,红细胞沉降率测定,魏氏法,魏氏血沉管长30cm,内径2.5mm管上有0200的刻度,每一刻度的距离为1mm,其溶积为1ml。,先向10ml刻度试管中加入3.8%枸橼酸1ml,再自静脉采血4ml,颠倒混合数次,然后用魏氏血沉管吸取抗凝剂至刻度0处,擦去管外血液,在室温条件下,垂直放于血沉管架上,经15、30、4
7、5、60min,分别观察并记录细胞沉降数值。,血液检验,红细胞沉降率测定,“六五”型血沉管法,于血沉管中加入抗凝剂(草酸钠0.0150.02g,枸橼酸钠粉末0.040.05g),自颈静脉直接采血至刻度“0”处,立即充分混合,于室温垂直立于试管架上,镜15、30、45、60min各观察一次,并记录红细胞沉降的数值。,血液检验,红细胞沉降率测定,各种动物的正常血沉值,测定血沉时必须用新配制的抗凝血;血液与抗凝剂混合要充分,柱面上不应有气泡,它可使血沉变慢;用魏氏法测定时,事先应检查血沉架是否好用,以防漏用;测定时室温以20左右为宜,温度过低可以减慢血沉。,血液检验,血红蛋白测定,红细胞遇酸溶解,游
8、离出血红蛋白,并被酸化为褐色的酸性血红素,稀释后与标准色柱比色,即可求得血红蛋白的含量。,血红蛋白试纸测定法 器材应备有测定血红蛋白试纸和4g%15g%血红蛋白标准比色板。测定时,取试纸一条,吸附被检血液一小滴,待血完全浸透后,立即置于所附标准色板的小孔下,肉眼与色板色泽进行比较,选择颜色相同或近似者,即得100ml血液所含血红蛋白的克数。,沙利氏血红蛋白测定法 沙利氏血红蛋白计由比色架、标准比色柱、血红蛋白测定管及血红蛋白吸管组成。测定管有两个刻度标志,一侧的224刻度表示100ml血液中含有的血红蛋白克数;另一侧有20160刻度,表示100ml血液中所含血红蛋白的百分数。,血液检验,血红蛋
9、白测定,血红蛋白增高 见于各种原因引起的血液浓缩,如腹泻、呕吐、大汗、多尿及肠梗阻等。血红蛋白减少 见于各种贫血,如马鼻疽、牛结核、牛羊肝片吸虫病、仔猪蛔虫等。,血液检验,红细胞计数,红细胞计数是将一定量的供检血液经一定倍数稀释后,计数一定容积的红细胞数,并换算为每立方毫米血液内含量。,血液检验,红细胞计数,健康动物红细胞数(万/立方毫米),白细胞计数,血液检验,白细胞计数,用冰醋酸将红细胞破坏后,计算每立方毫米内白细胞总数。,健康动物白细胞数(个/立方毫米),结核病时鸡的肝脏结核结节,血液检验,白细胞分类计数,健康动物各类白细胞分类数值(%),血液检验,临床意义,白细胞增多嗜中性白细胞增多:
10、见于猪、牛巴氏杆菌病、马腺疫、肺炎及化脓性感染等。嗜酸性白细胞增多:见于某些蠕虫病、过敏性疾病及湿疹等。淋巴细胞增多:见于结核、鼻疽、布氏杆菌病、猪瘟及牛梨形虫病。单核细胞增多:见于败血性疾病,某些梨形虫病及李氏杆菌等。,白细胞减少嗜中性白细胞减少:见于病毒性传染病、药物中毒(如长期服用抗生素)、各种疾病的垂危期。嗜酸性白细胞减少:见于败血症、某些病毒病及牛梨形虫病等。淋巴细胞减少:多为嗜中性白细胞增多而造成的相对性变化。,血液检验,在分析嗜中性白细胞增、减变化时,还应注意嗜中性白细胞的成熟情况。若未成熟的嗜中性白细胞增多,即出现嗜中性髓样细胞、幼稚型和杆状核嗜中性白细胞的比例增多,则称为核左
11、移。若血液内分叶核嗜中性白细胞大量增多,而且核的分叶数目也增多,则称为核右移。,白细胞总数增多的同时,出现核左移,表示骨髓造血机能加强,机体处于积极防御阶段;而白细胞总数减少时见有核左移,则表示骨髓造血机能减退,机体的抗病力降低。至于核右移,乃骨髓造血功能衰退的标志,多因机体高度衰竭而引起,常提示预后慎重。,临床意义,光学显微镜的使用,物镜转换器 2.接物镜 3.游标卡尺 4.载物台 5.聚光器 6.彩虹光阑 7.光源 8.镜座 9.电源开关 10.光源滑动变阻器 11.粗调螺旋 12.微调螺旋 13.镜臂 14.镜筒 15.目镜 16.标本移动螺旋,操作步骤-1.观察前准备,显微镜从显微镜柜
12、或镜箱内拿出时,要用右手紧握镜臂,左手托住镜座,平稳地将显微镜搬运到实验桌上。将显微镜放在自己身体的左前方,离桌子边缘约10cm左右,右侧可放记录本或绘图纸。调节光照:不带光源的显微镜,可利用灯光或自然光通过反光镜来调节光照,光线较强的天然光源宜用平面镜;光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜,但不能用直射阳光,直射阳光会影响物像的清晰并刺激眼睛。将10物镜转入光孔,将聚光器上的虹彩光圈打开到最大位置,用左眼观察目镜中视野的亮度,转动反光镜,使视野的光照达到最明亮最均匀为止。自带光源的显微镜,可通过调节电流旋钮来调节光照强弱。凡检查染色标本时,光线应强;检查未染色标本时,光线不宜太强。可通过扩
13、大或缩小光圈、升降聚光器、旋转反光镜调节光线。,2.低倍镜观察,镜检任何标本都要养成必须先用低倍镜观察的习惯。因为低倍镜视野较大,易于发现目标和确定检查的位置。将标本片放置在载物台上,用标本夹夹住,移动推动器,使被观察的标本处在物镜正下方,转动粗调节旋钮,使物镜调至接近标本处,用目镜观察并同时用粗调节旋钮慢慢下降载物台,直至物像出现,再用细调节旋钮使物像清晰为止。用推动器移动标本片,找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。,3.高倍镜观察,在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜。较好的显微镜,低倍、高倍镜头是同焦的,在转换物镜时要从侧面观察,避免镜头与玻片相撞。然后从目镜观察,调节光照,使亮度
14、适中,缓慢调节粗调节旋钮,慢慢下降载物台直至物像出现,再用细调节旋钮调至物像清晰为止,找到需观察的部位,并移至视野中央进行观察,并准备用油镜观察。,4油镜观察,(1)用粗调节器将镜筒提起约2cm,将油镜转至正下方。(2)在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。(3)从侧面注视,用粗调节器将镜筒小心地降下,使油镜浸在香柏油中,其镜头几乎与标本相接,应特别注意不能压在标本上,更不可用力过猛,否则不仅压碎玻片,也会损坏镜头。(4)从接目镜内观察,进一步调节光线,使光线明亮,再用粗调节器将镜筒徐徐上升,直至视野出现物像为止,然后用细调节器校正焦距。如油镜已离开油面而仍未见物像,必须再从侧面观察,将油镜降下
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