血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液 黎振威 [2].ppt
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1、血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液,20104283班制作人:成洁琴组员:严文彦 刘秀 柯坤,血红蛋白与核黄素,血红蛋白1.结构:血红蛋白(Hb)是由两对珠蛋白肽链和 4 个亚铁血红素构成。珠蛋白 4条肽链(、链);亚铁血红素:原卟啉、铁。2.特点:(1)正常情况下,99%Hb为还原Hb(HbA),1%为高铁Hb(HbF)。(2)只有Fe2+状态的Hb才能与氧结合,称为氧和血红蛋白。(3)在人体生长不同时期,Hb的种类与比例不同。出生后3个月,HbA95%,而HbF降至1%以下。(4)血红蛋白合成受激素(红细胞生成素、雄激素)调节。(5)相对分子质量为64458。(6)降解产物为珠蛋白、血红素
2、。,核黄素维生素B2,又称核黄素,维他命B2。它是人体必需的13种维生素之一,作为维生素B族的成员之一,微溶于水,可溶于氯化钠溶液,易溶于稀的氢氧化钠溶液。维生素B2是机体中许多酶系统的重要辅基的组成成分,参与物质和能量代谢。分子式:C17H20N4O6分子量:376.37 熔点:290 水溶性:0.07 g/L(20)比旋光度:-135,实验目的,(1)掌握凝胶层析的原理。(2)掌握柱层析的基本装置。(3)熟悉凝胶层析的操作过程。,层析技术,层析技术的概念:任何层析都有两层:固定相与流动相,两相互不溶。固定相由层析介质组成,可以是固体或液体。这些物质能与待分离的化合物进行可逆的吸附,溶解于交
3、换作用,对层析的分离效果起关键作用。流动相只在层析过程中推动固定相上待分离的物质朝着一定方向移动的液体或气体。柱层析中流动相一般被称为洗脱剂。它也是层析中的重要影响因素之一。层析法的特点:分辨力高 分析效率高 灵敏度 应用广泛 局限性:在定量分析中需要纯制的标准物质 不能精确地解决物质的化学结构问题,凝胶层析,常用的层析方法:吸附层析 分配层析 离子交换层析 亲和层析 凝胶层析:是按照蛋白质分子量大小进行分离的技术,又称之凝胶过滤,分子筛层析或排阻层析。它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体,不带电荷,吸附力弱,操作条件比较温和,可在相当广的温度范围下进行,不需要有机溶剂,对于高分子物质有很
4、好的分离效果。本实验要求用Sephadex G-25(G-25型交联葡聚糖凝胶)凝胶层析柱将血红蛋白与核黄素的混合液分离,并测出洗脱曲线。,实验原理,凝胶层析原理 凝胶层析柱中装着许多直径小于1mm的凝胶颗粒,颗粒内部不是实心的,而是呈三维多孔网状结构。当含有大小不同的蛋白质样品加到凝胶柱上时,大分子物质因其直径大于凝胶网孔的孔径,不能进入凝胶颗粒内部,只能沿着凝胶颗粒的空隙随溶剂流动,流程短而速度快先流出层析柱。小分子物质由于其分子直径小于网状结构的孔径,可进入凝胶颗粒内部,受到来自凝胶珠内部的阻力,所以流程长而移动速度慢。因此,大的蛋白质直接通过凝胶珠之间的缝隙首先被洗脱下来。凝胶过滤所用
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