第十四章维生素类药物的分析AnalysisofVitamines.ppt

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1、第十四章 维生素类药物的分析 Analysis of Vitamines,维生素A维生素B1维生素C维生素E,一、结构与性质 1.结构 环己烯 多烯醇（共轭双键系统）R=H VA醇(维生素A1)：性质活泼 R=CH3CO-VA醋酸酯：性质稳定,第一节 维生素A的分析,2.物理性质 淡黄色或红色油状或固定物，几乎无气味，不溶于水，易溶于氯仿，乙醚，环己烷和油中 VA醇：max(异丙醇)325nm VA酯：max(环己烷)328nm,第一节 维生素A的分析,3.化学性质 日光照射裂解 空气、氧化剂、加热或金属离子等 产生环氧化物、醛、酸 三氯化锑反应 蓝色产物（不稳定）、渐变成紫红色,第一节 维生

2、素A的分析,（二）鉴别 1.Carr-price反应（三氯化锑）三氯化锑的氯仿液与VA作用产生蓝色 渐变成紫红色 无水：三氯化锑水解、VA不溶 无醇：乙醇能和反应中正碳离子作用,第一节 维生素A的分析,2.紫外法 本品加无水乙醇盐酸溶解，立即紫外扫描 326nm单一吸收峰(VA)水浴加热30s，迅速冷却，再扫描 348、367和389nm三个尖锐吸收峰(去水VA),第一节 维生素A的分析,三、含量测定紫外法（三点校正法）HPLC,第一节 维生素A的分析,1.维生素A中存在的相关物质和不相关物质1）衍生物维生素A2（去氢维生素A）维生素A3（去水维生素A）,(一)紫外法（三点校正法）,2）异构体

3、 目前分离得到5个异构体 新维生素Aa(2-顺型)新维生素Ab(4-顺型),(一)紫外法（三点校正法）,新维生素Ac(2.4-顺型),异维生素Aa(6-顺型)异维生素Ab(2.6-二顺型),(一)紫外法（三点校正法）,3）氧化产物：环氧化物，醛，酸 4）中间体、副产品：5）裂解产物：6）鲸醇（Kitol）:二聚体，非生物活性 7）不相关物质：抗氧剂，稀释用油 在325328nm处均有吸收 不相关吸收或背景吸收,(一)紫外法（三点校正法）,2.原理1）维生素A最大吸收波长附近（310340nm）杂质吸收近似一条直线2）物质吸收光谱的加和性 A总=AVA+A杂质,(一)紫外法（三点校正法）,3.三

4、点选择,(一)紫外法（三点校正法）,维生素A醇 1)三点：325、310、334nm 2)等吸收点：A310=A334=3）校子公式：A325（校正）=6.815A325-2.555A310-4.260A334,(一)紫外法（三点校正法）,维生素A酯 1）三点：328、316、340nm 2）波长等距：12nm 3）校正公式：A328（校正）=3.52(2A328-A316-A340),(一)紫外法（三点校正法）,4.校正公式的应用及含量计算 第一法:样品915IU/ml环己烷溶液 max326329nm 300、316、328、340、360nm（A1、A2、A3、A4、A5)计算吸收度比值

5、(A1/A3、A2/A3、A3/A3、A4/A3、A5/A3)计算比值差,(一)紫外法（三点校正法）,吸收度比值规定值,(一)紫外法（三点校正法）,第二法：a、max不在326329nm b、校正与未校正吸收度比较+3%样品：915IU/ml,(一)紫外法（三点校正法）,max323327nm之间 300、310、325及334nm A300/A3250.73，计算A325（校正）a、校正在未校正吸收度土3%以未校正吸收度计算 b、土3%，以校正吸收度计算,(一)紫外法（三点校正法）,max不在323327nm 或A300/A3250.73 需进一步纯化,(一)紫外法（三点校正法）,5.生物效

6、价和换算因子（Biological potency and conversion factor,CF）1IU=0.344g VA醋酸酯 1IU=0.300g VA醇 1g VA醋酸酯:2.907106IU/g 1g VA醇:3.33106IU/g,(一)紫外法（三点校正法）,(一)紫外法（三点校正法）,换算因子：单位百分吸收系数所相当于的效价 VA酯百分吸收系数=1530 VA醇百分吸收系数1820 CF(酯)=2.907106/1530=1900 CF(醇)=3.33106/1820=1830,(一)紫外法（三点校正法）,6.注意问题 仪器波长校准 半暗室快速进行,(一)紫外法（三点校正法）

7、,色谱柱：硅胶为填充剂流动相：正己烷-异丙醇（997：3）检测波长：325nm系统适应性试验：维生素A醋酸酯主峰与 其顺式异构体峰的R应大于3.0。进样5次RSD3.0%。,(二)HPLC,第二节 维生素B1(Vit B1),Vit B1,Thiamine Hydrochloride,H2O,结构特点与鉴别,噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化剂氧化，然后与嘧啶环上的-NH2缩合生成具有荧光的硫色素，后者易溶于异丁醇中显强烈的蓝色荧光，该反应又称为硫色素荧光反应。为维生素B1所特有。,生成沉淀反应,分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂(碘化铋钾、碘化汞钾、苦味酸等)，硅钨酸，雷氏盐等作用形成

8、组成恒定的沉淀维生素B1在碱性加热条件下反应放出H2S,与Pb(Ac)2试液形成黑色PbS。,含量测定 Assay,硅钨酸重量法 Silicotungstic Acid Gravimetry,非水溶液滴定法 Non-aqueous Titrimetry,硫色素荧光法 Thiochrone Fluoremetry,第三节 维生素C(Vit C),L-抗坏血酸 L-去氢抗坏血酸 L-二酮古罗糖酸,有生物活性 有生物活性 无生物活性,鉴别利用其还原性 硝酸银（银镜）2.6-二氯靛酚(褪色）高锰酸钾（褪色）亚甲蓝（蓝色褪去）磷钼酸（钼蓝）斐林氏溶液（红色氧化亚铜）,（1）与硝酸银反应 本品加水溶解加硝

9、酸银试液 银黑色沉淀（ChP、BP采用）,（2）2，6二氯靛酚反应 本品加水溶解2,6二氯靛酚试液 颜色消失（ChP采用）,含量测定,碘量法,2,6-二氯靛酚法,第五节 维生素E(Vit E),Vit E(dl-Tocopheryl Acetate),鉴别 1.本品无水乙醇溶解硝酸，75加热 鲜红色，逐渐转为橙红色。,2.本品醇制KOH，煮沸 游离生育酚 乙醚提取 联吡啶、三氯化铁乙醇液 深红色,ChP VE 中检查生育酚,取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺T.S.1滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml,固定液：5%SE30柱 温：25510检测器：FID内 标：十六酸十六醇酯,