免疫学诊断试验.ppt

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1、,临床常用免疫学检验,第一节 概述临床应用1.为临床确定诊断提供依据2.具有很高的临床诊断参考价值3.判断机体免疫功能高低和免疫耐受力,一、细胞免疫及相关分子检查1.免疫细胞T细胞 T细胞亚群及其功能B细胞 表面标志；表面受体；亚群NK细胞 巨噬细胞 其他细胞,2.CD分子3.细胞因子白细胞介素干扰素TNFCSF G-CSF；GM-CSF；M-CSF；EPO生长因子,二、免疫活性物质与体液免疫免疫球蛋白检测IgG;IgA;IgM;IgE;S-IgEM蛋白检测冷球蛋白检测尿本周蛋白检测三、补体和免疫复合物CH50C3；C4CIC,四、自身免疫病的免疫学检测1.ANA2.抗双链DNA抗体抗ENA抗

2、体抗线粒体抗体抗平滑肌抗体抗中性粒细胞胞浆抗体RFCRP,五、肿瘤免疫检查六、移植免疫学检查七、感染免疫学检查1.病毒性肝炎2.AIDS3.性传播疾病（STD）4.其他,免疫功能检验(Immunologic Function Test)免疫功能检验分为细胞免疫功能检验和体液免疫功能检验，对于了解患者的免疫状态，以及细胞的各种功能，为深入研究和认识机体免疫系统的生理、病理改变，阐明某些疾病的发病机制和临床诊断与治疗将提供有利的信息。下面简单介绍临床常用的一些免疫检验项目,一.IgG、IgA、IgM测定 免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig)是一组具有抗体活性的蛋白。存在于机体的血液、体

3、液、外分泌液及某些细胞的膜上，分为 IgG、IgA、IgM、IgD、和IgE 五类。其中 IgG、IgA、IgM 含量较多，一般应用单向免疫扩散法、免疫比浊法和速率散射比浊法测定。,参考值 依年龄、性别、地区等因素有差异。IgG：6.9416.18g/L IgA：0.683.78 g/L IgM：0.602.63g/L临床意义 1.Ig 含量减低：一种或多种Ig 水平减少，分原发性和继发性。见于各种先天性或获得性免疫缺陷病。继发性常与免疫抑制剂应用、射线、蛋白质丢失、营养不良等有关。也可见于细胞毒药物治疗后。,2.Ig含量增高：(1)多克隆性增高，见于各种慢性感染、慢性肝病、某些自身免疫病，如

4、 SLE、RA、SS等；也见于寄生虫疾病、结节病等。(2)单克隆性增高，又称“M”蛋白，主要见于免疫增殖性疾病，如多发性骨髓瘤、重链病、轻链病，巨球蛋白血症等。,注意事项 Ig水平与年龄、性别有一定的关系，Ig 含量因检测方法不同而有差别，各地区参考值也不相同，在判断结果时应综合考虑。如有“M 蛋白”，可进一步作 血清或尿液免疫电泳，检测轻链和重链。,二.血清总IgE测定 IgE 为 血清中含量极少的一种免疫球蛋白，与过敏性疾病和寄生虫感染有关。目前检测方法有多种，包括 ELISA、间接血凝试验（indirect hemoagglutination assay IHA）、RIA、电化学发光法（

5、electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA，）、IFA 等。参考值 0.1-150IU/ml,临床意义 1.IgE增高：见于IgE型多发性骨髓瘤、特应性哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎、寄生虫感染、热带嗜酸细胞增多症、SLE、RA及某些霉菌病等。2.IgE减低：一般无意义。可见于原发性无丙种球蛋白血症、恶性肿瘤及细胞毒药物治疗后。,注意事项 年龄、性别均可影响总IgE水平。一般男性高于女性；新生儿水平低，青春期水平最高，30岁以后逐渐下降。不同种族血清总IgE水平也有差别，混血人种比白人高34倍，黑人水平更高，黄种人水平也较高。总IgE水平高不一定是过敏；

6、过敏者总IgE也不一定高。因此，在评价总IgE结果时要考虑到以上因素。,三.特异性IgE抗体（sIgE)的检测 过敏患者的血清中存在着具有变应原特异性的IgE 称之为特异性IgE,如对牛奶过敏者则有针对牛奶变应原的IgE；对蒿草花粉过敏者，则有针对该花粉的IgE，该抗体只能与该变应原特异性结合。,四.血清补体测定 补体（Complement)是血清中的一组具有酶活性的蛋白。它由20多种蛋白组成。当机体受到病原微生物侵袭时，在抗体的存在下，补体参与灭活 virus 或杀死 bacteria 的免疫反应。在自身免疫病中，complement也能参与破坏自身组织或细胞而造成免疫病理损伤。测定血清中补

7、体活性或其单一补体成分含量，对于许多疾病的诊断和鉴别诊断、疗效观察以及发病机理的研究都有一定的临床意义。,(一)总补体活性测定（50%hemolytic unit of complement，CH50)Complement 可使溶血素(抗体)致敏的SRBC裂解而发生溶血，补体活性与溶血程度呈正相关。根据产生50%溶血所需要的最小补体量，可计算出血清总补体的活性。,参考值 75160 U/ml临床意义.增高：常见于各种急性炎症、组织损伤、心肌梗死和某些恶性肿瘤等。.降低：见于各种免疫复合物性疾病，如SLE、急、慢性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性贫血。也可见于病毒性肝炎、DIC、蛋白丢失性肠病、严重

8、灼伤、急性粒细胞性白血病等。,注意事项 待测血清需新鲜、无溶血。测定方法有试管法、微量板法，近来又有生化仪器法等。不同方法具有不同的参考值。,(二)补体C3测定（Complement 3，C3)C3为补体系统各组分中含量最高的组分，是激活补体传统途径与旁路途径的关键成分。检测方法主要有RID、免疫比浊、速率散射比浊等。参考值 0.8-1.55g/L,临床意义 1.C3增高：见于某些急性炎症或传染病早期以及某些恶性肿瘤等。2.C3降低：见于SLE、RA、急性肾小球肾炎、肝脏疾病、冷球蛋白血症等。狼疮肾炎时 血清 中C3含量降低，当病情好转时，含量恢复正常。,(三),补体C4测定（Compleme

9、nt 4，C4)C4是一种多功能的1-球蛋白，也是补体系统中的主要成分。在补体传统活化途径中发挥重要作用。裂解后的产物在补体的活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和毒素等方面发挥很大作用。检测方法同C3测定。,参考值 0.160.47g/L临床意义 1.升高：见于风湿热的急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、心肌梗死、Reiter综合征和各种类型的关节炎。2.降低：见于自身免疫病，例如：SLE、RA、慢性活动性肝炎、多发性硬化症、IgA型肾病等。在SLE，C4含量下降明显，并较C3下降为早。,五.循环免疫复合物（Circulating immunocomplex，CIC,)CIC是体内游离抗原与

10、抗体相结合的产物。复合物可分大、中、小三类。大的复合物(19s)可被吞噬细胞吞噬去除；中等复合物(约等于19s)存在于局部病变部位，如肾基膜、皮肤基底膜、血管内膜和关节滑膜等；只有小的复合物(19s)游离于血液、体液中，为一种可溶的CIC。CIC测定对免疫复合物病、自身免疫病以及肝病的诊断、疗效观察、预后判断均有重要意义。,检测方法有多种，如聚乙二醇沉淀法、C1q结合法等。PEG可引起蛋白沉淀，蛋白分子愈大沉淀所需 PEG 浓度愈小。CIC分子量较大，且抗原-抗体结合后发生构型改变，而被低浓度PEG从液相中析出，PEG还抑制CIC解离，促使CIC聚合成更大的凝聚物而被沉淀，用分光光度计在波长4

11、50nm处测定吸光度。计算出浊度值，可知CIC的存在和含量。,参考值 PEG沉淀法：10U/ml临床意义 1.CIC阳性常见于自身免疫病如SLE、RA等，也可见于血清病、慢性活动性肝炎、细菌感染、传染病、恶性肿瘤等。2.动态检测CIC的变化，可监测疾病的发展、判断疗效及预后。,注意事项 参考值依方法不同而有差别，此法快速简便，但特异性较差，只适于筛查。低密度脂蛋白可引起浊度增加，故应空腹取血。高球蛋白血症及标本反复冻融易造成假阳性。,六.T淋巴细胞亚群（T cell subpopulation)测定 T cell 因功能不同可将其分为若干亚群，如T辅助/诱导细胞；T抑制/细胞毒性细胞等。也可根

12、据T细胞表面分化抗原(CD)不同划分为相应的亚群，如CD3；CD4；CD8等。同一CD表型的细胞功能可能不同。如CD8细胞中既有T抑制细胞，也有细胞毒性T淋巴细胞。T细胞各亚群的相互协调，稳定地调节着机体的免疫应答反应。,应用抗CD抗原的单克隆抗体，如抗CD3、抗CD4、抗CD8等，对外周血单个核细胞进行检测，依据各单抗的阳性率，判定各T cell 亚群，并算出CD4/CD8的比值。测定方法有 IFA、IEA、APAAP法、流式细胞仪法等。,参考值（IFA法）总T细胞（CD3+）53-88%；CD4+细胞32-60%；CD8+细胞20-40%。CD4+/CD8+。（流式细胞仪法）总T细胞（CD

13、3+）955-2860/l；CD4+细胞27-51%，550-1440l；CD8+细胞15-44%，320-1250l。CD4+/CD8+。,临床意义 T cell 亚群在许多临床疾病中可发生异常改变，特别是免疫功能受损病人。测定 T cell 亚群变化对了解疾病的发病机制、指导临床治疗、控制疾病的发生发展均有重要意义。1.在自身免疫病中，如SLE、RA、自身免疫性溶血性贫血，以及乙型肝炎病人常表现为CD8细胞的数量及功能低下，有时也有CD4细胞增高，CD4+/CD8+比值升高。,2.免疫缺陷病患者CD4+/CD8+比值减少，如AIDS病人，CD4+显著减少，常出现CD4+/CD8+比值倒置。

14、常作为HIV感染者的监测指标。3.感染性疾病患者免疫抑制功能增强，表现为CD8+细胞的数量及功能都异常增高。病毒感染时，CD3+、CD4+细胞减少，CD8+细胞增多，CD4+/CD8+比值降低。,4.肿瘤病人CD3+，CD4+细胞明显减少，CD8+明显增加，CD4+/CD8+比值明显下降。据此，可了解机体的免疫状态，指导免疫调节剂及治疗药物的应用。5.支气管哮喘病人，在过敏原激发后，外周血CD4+T 细胞迅速降低，支气管肺泡灌洗液中CD3+、CD4+、CD8+T 细胞则增高。过敏性鼻炎患者CD3+、CD4+、CD8+T 细胞均比正常人低。6.血液系统疾病 T cell 亚群也有相应变化，如再生

15、障碍性贫血、粒细胞减少症时CD4+细胞减少，CD8+细胞增多，CD3+/CD8+比值下降。,注意事项 T cell 亚群检测方法很多，参考值也不尽相同，在判断结果时要全面考虑，结合临床及其他检查。此外，利用上法也可测定B细胞、NK细胞等。流式细胞仪法，B细胞绝对值为 90-560/l，百分数为 5-18%，NK细胞绝对数为 150-1100/l，百分数为 7-40%。华人较其他种族有较高的NK细胞值。,第四节 自身免疫病和风湿病的免疫学检验,自身免疫病（AID)是指由于过度而持久的自身免疫反应导致组织器官损伤并引起相应器官病变或临床症状的一类疾病。风湿病是一类涉及到关节、软骨、肌肉等结缔组织的

16、慢性疾病。实验室检查特别是免疫学检查对AID和风湿病的诊断是及其重要的。有些检查可作为诊断指标之一；有些检查可作为病情进展和预后判断的监测指标；有些检查可作为药物疗效的考核指标之一。,随着免疫学技术的发展以及分子生物学的应用，各种自身抗体的检查越来越多地应用于临床。作为临床医生，应该熟悉这些检验的意义，并能结合临床及其他检查，客观地运用这些指标，协助诊断，了解病情，指导治疗。这里仅介绍临床常用的一些自身抗体的检测。,1.抗核抗体（Antinuclear antibody,ANA)测定 ANA是抗细胞核多种成分的自身抗体，无种属及器官特异性。ANA可分为抗DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体

17、、抗核仁抗体及其他细胞成分抗体。这些 抗体共同组成ANA谱。常用检测方法为IFA、ELISA、免疫印迹法、RIA、免疫斑点法、胶体金标斑点免疫渗滤法等。其中IFA是应用较广的一种方法。一般采用鼠肝切片或Hep-2细胞为底物抗原片，当加入病人血清时，病人血清中的ANA可与细胞中相应抗原成分结合。再加入荧光标记抗人IgG，在荧光显微镜下可见细胞核内亮绿色荧光。,参考值 1:10或阴性临床意义 ANA阳性见于多种疾病，常用于风湿病及自身免疫病的诊断。SLE患者阳性率在95以上，且效价常在1：80以上。在其他风湿病如RA、系统性硬化症、皮肌炎、干燥综合征(SS)、混合结缔组织病(MCTD)等也可阳性。

18、其他如肝病，病毒感染等也可呈低效价阳性。,ANA阳性，在荧光显微镜下一般分为4个型别：(1)均质型，是针对DNA与组蛋白复合物的 抗体，常见于SLE；(2)周边型或膜型，主要是针对双链DNA的抗体，一般只见于SLE活动期；(3)斑点型，是针对可提取性核抗原（ENA）的抗体，见于SLE、MCTD等许多风湿性疾病；(4)核仁型，主要是针对 RNA 的抗体，主要见于系统性硬化症。注意事项 正常人中特别是老年人中可有低效价的ANA，此外，口服避孕药的妇女也可检测到ANA。,（一）抗Sm抗体 Sm是病人Smith的缩写。Sm抗原属于SnRNP，由5个RNA和多肽组成，抗原表位在29KD、28KD和13.

19、5KD多肽上，抗Sm抗体是酸性糖蛋白，是SLE的标记抗体。,(二)抗nRNP(u1RNP)抗体 u1RNP是u1RNA和蛋白质组成的，抗原表位在73KD、32KD和17.5KD多肽上，是MLTD的重要 血清 标志。,（三）抗SSA抗体 SS为干燥综合征的缩写。此抗体又称抗RO抗体。SSA抗原是RNA和蛋白质复合物，抗原表位在52KD多肽上，主要见于原发性干燥综合征患者及SLE。,（四）抗SSB抗体 SSB抗体常伴随SSA抗体同时出现，又称抗La抗体，SSB抗原属于SnRNP，是含有RNA和50KD蛋白质的复合物。抗原表位在45KD、47KD和48KD多肽上。与SSA抗体并存对诊断SS有特异性。

20、,（五）抗Scl-70抗体 Scl-70抗原表位在86KD、70KD的片段上，是DNA拓扑异构酶I的降解产物，抗Scl-70抗体几乎仅见于硬皮病，阳性率30%左右。,（六）抗Jo-1抗体 Jo-1抗体是组氨酰tRNA合成酶，抗原表位在55KD多肽，抗Jo-1抗体是多发性肌炎和皮肌炎的标记抗体，阳性率25-40%。,（七）抗核糖体抗体 核糖体在核仁合成，然后转入胞浆，抗原表位在大亚基上的38KD、16KD和15KD多肽上。抗核糖体抗体阳性主要见于SLE，阳性率20-30%。,检测以上抗体的方法主要有：对流免疫电泳法(CIE)、双相免疫扩散法，免疫印迹试验(IBT)，免疫斑点技术和ELISA法等。

21、一般采用兔胸腺或牛胸腺提取物或细胞提取物作为抗原。近年来，应用分子重组抗原制备的试剂盒已投入市场。,参考值阴性临床意义 1.抗n RNP抗体：见于3540的SLE病人，在MCTD病人中阳性率可达95100，也可见于其他风湿性疾病。2.抗Sm抗体：主要见于SLE及重叠综合征，急性期病人75为阳性。一般SLE患者3040阳性率。但Sm抗体阳性者90以上为SLE，故称之为SLE的标记抗体。,3.抗SSA和抗SSB抗体：见于4045的SS病人。抗SSA抗体也可见于25的SLE病人及其他风湿性疾病；抗SSA抗体与新生儿狼疮和先天性传导阻滞有关。抗SSA抗体也可见于病毒感染等非风湿性疾病。抗SSB抗体对原

22、发性干燥综合征较特异，但阳性率仅27左右。,4.抗Scl-70抗体：一般仅见于系统性硬化症病人，阳性率2060。5.抗Jol-1抗体见于30的多发性肌炎病人及10的皮肌炎病人。抗Jol-1抗体与多发性肌炎病人间质性肺炎的发生率增加有关。6.抗rRNP 抗体：主要见于SLE患者，阳性率20%左右，与中枢神经系统病变有关，多在疾病活动期出现。,注意事项 判断试验结果时要结合临床表现作出评价，也应根据试验方法来作出解释。对流免疫电泳法和双相扩散法敏感性低，但特异性较高；免疫印迹法、斑点免疫法及ELISA方法敏感性提高，但特异性相对减少。,三.抗双链DNA抗体（Antidouble-stranded

23、DNA，A-dsDNA，)A-dsDNA 对SLE有高度特异性，是针对细胞核脱氧核糖核酸的自身抗体。临床上常用的检测方法有：Farrs法：125IDNA与待检标本中的A-dsDNA形成免疫复合物，加饱和硫酸铵使复合物沉淀，以计数器分别测定上清中游离及沉淀物中已结合的125IDNA含量，可计算出 血清 中AdsDNA的结合活性。ELISA法：将小牛胸腺DNA包被在微孔板中，加入病人 血清，如有A-dsDNA则结合到微孔板上，加入酶标抗人IgG，加入底物显色后经酶标仪比色可知 血清 中A-dsDNA抗体的量。,免疫荧光法：采用马疫锥虫或短膜虫作为基质，加入病人 血清。血清中的A-dsDNA与膜上的

24、天然DNA结合，加入荧光标记抗人IgG。马疫锥虫和短膜虫的动基体会发出绿色荧光。金标斑点法：双链DNA包被于硝酸纤维膜上，加入病人 血清，加入金标记抗人IgG，如有A-dsDNA存在，会显示红色斑点。,参考值依方法不同参考值也有不同。Farrs法：0.20 免疫荧光法：1:10 ELISA法：依试剂盒而定，一般70u 金标法：阴性,临床意义 A-dsDNA 阳性对 SLE 有较高的特异性。大约60的活动性 SLE 病人会出现 A-dsDNA。其他风湿性疾病也会出现，但阳性率非常低，如RA、S.S。注意事项 假阳性结果非常少见，但阴性亦不能排除SLE的诊断。,四.抗中性粒细胞胞浆抗体（Antin

25、eutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)测定 ANCA是针对中性粒细胞胞浆多种成分的 自身抗体，主要有髓过氧化物酶(MPO)和蛋白酶3（Proteinase 3，PR3)的抗体。主要用于诊断Wegener 肉芽肿和系统性血管炎，特别是伴有肾病、呼吸疾病或其他类型血管炎引起多器官损害的患者。检测方法有IFA、ELISA、IBT等。,参考值 阴性。临床意义 免疫荧光法检查ANCA阳性一般分为两种荧光类型，一种是胞浆型，称为cANCA，一种是核周型，称为pANCA。cANCA产生弥漫性细胞浆染色，是针对PR3的抗体，一般见于wegener肉芽肿病(WG)，特别是肾和肺

26、受累的病人。pANCA产生核周染色，是针对MPO的抗体，主要见于系统性血管炎病人。在WG病人中，cANCA阳性率在活动期可达80，且有较高的抗体效价。在缓解期抗体阳性率低，且效价下降，或完全消失。,注意事项 ANCA 阳性也可见于 Good-Pastares 综合征和 SLE 病人。WG的诊断不能单纯依赖ANCA的结果，还要结合其他临床表现，试验室检查和组织病理学检查才能确定。ANCA 效价 不能完全反应疾病的活动以及对治疗的反应。pANCA 阳性不是特异性的抗 MPO抗体，也可以是抗粒细胞胞浆中其他酶的抗体，如弹性蛋白酶，组织蛋白酶 G 等。ANCA检测应注意排除其他自身抗体的交叉反应，如A

27、NA。因其可产生假阳性应注意鉴别，并进行ANA检测。,五.抗线粒体抗体（Antimitochondrial antibody,AMA)AMA是以细胞浆中的线粒体为抗原的一种自身抗体，无器官和种属特异性。一般采用大鼠肾及胃作为抗原基质，采用IFA检测，阳性可见大鼠肾和胃的细胞浆呈现细颗粒状荧光。采用免疫印迹法可将与线粒体抗原的反应分为从M1到M9九种类型，高效价的M2和M9型 自身抗原与原发性胆汁性肝硬变相关。目前已有检测M2的ELISA试剂盒供应。,参考值 阴性 1：10 为阳性临床意义 AMA是原发性胆汁性肝硬化的标记 抗体，阳性率达90%，并且50%患者 抗体效价达1：1280或更高。此外

28、，也可见于慢性活动性肝炎、隐匿性肝硬化。肝外阻塞性黄疸患者AMA常阴性，因此可作为鉴别诊断的一个指标。正常人中阳性率10%，且效价较低。,六.抗平滑肌抗体（Antismooth muscle antibody，ASMA)ASMA是抗肝细胞膜上一种肌动球蛋白的自身抗体。这种肌动球蛋白与平滑肌有交叉抗原性，因此与平滑肌有反应。一般采用IFA法，以大鼠胃作为抗原基质，阳性可见胃壁平滑肌呈现亮绿色荧光。,参考值 阴性，1：10为阳性临床意义 主要见于明显活动期的自身免疫性肝炎患者，阳性率在80%以上，效价 在1：80以上。急性病毒性肝炎早期ASMA也可阳性，且早于 HBsAg出现。其他疾病如传染性单核

29、细胞增多症、SS、RA、支原体肺炎、肿瘤和病毒感染者也有不同程度的阳性率。正常人中仅有2%阳性。,七.抗甲状腺球蛋白抗体（ATGA)和抗甲状腺微粒体抗体(ATMA)ATGA 是由甲状腺炎引起的自身抗体，抗原是一种糖蛋白。ATGA有器官特异性而无种属特异性。ATMA 的抗原是甲状腺滤泡上皮细胞胞浆内的脂蛋白。常用检测方法有：IFA、IHA、RIA、ELISA等。,参考值 IHA：血清效价 1：32，1：32为阳性，ATGA 和ATMA ELISA：正常为阴性，P/N 2.1 为阳性,ATGA 和 ATMA RIA：ATGA 30%；ATMA 15%,临床意义 主要见于桥本甲状腺炎、甲亢、甲低患者

30、，也可见于甲状腺瘤、恶性贫血、重症肌无力、Edison 病和肝脏疾病等。SLE及其他自身免疫病也有一定的阳性率。正常人也可检出这两种 抗体，并且随着年龄的增长，阳性率增加，特别是 40岁以上妇女，可达18%左右。应该注意到，有的患者ATGA阴性，但ATMA阳性，因此两种 抗体 同时检测可提高抗甲状腺自身抗体的检出水平。,八.HLAB27测定 HLAB27 抗原为人类MHC I类 抗原B位点的表达产物，可分为几种亚型。HLA B27的检测方法有多种，补体依赖性微量细胞毒法(CDMA)；流式细胞仪法；玫瑰花法；ELISA法；等电聚焦法等。近来应用PCR法检测HLAB27，敏感而特异，并且可进行B2

31、7亚型的分析。参考值 非洲美洲人：34%；高家索人：68%；亚洲人：1%。,临床意义 强直性脊柱炎(AS)患者HLAB27阳性率为9095%。大约42%的青年类风湿关节炎(JRA)存在HLAB27，Reiters 综合征患者阳性率大约79%。此外，肠病性关节炎、银屑病性关节炎也有一定的阳性率。RA病人阳性率不高。注意事项 在评价HLAB27阳性结果时应结合临床表现综合考虑，不能单纯依靠此结果作出诊断。,小结:总之，自身抗体的检测对诊断自身免疫病有着重要的意义。人 血清 中存在着多种自身抗体，有器官特异性的，也有非器官特异性的。因此，在选择自身抗体检测时应综合考虑，合理选用。,抗核抗体（ANA）

32、的检查最常用于筛查全身性风湿病和自身免疫病。ANA的检查可观察到能与细胞核内的核酸和蛋白抗原起反应的自身抗体。细胞内可能存在对多种抗原起反应的自身抗体。细胞内可能存在对多种抗原起反应的抗体。只有某种抗体的效价很高时，IFA才能加以鉴别。在大约1%的正常人的体内可测到低效价的非特异性抗核抗体，80岁以上老人的检出率可高达50%。高效价的ANA一般与活动期SLE密切相关。采用Hep-2细胞检测ANA，可见到不同的染色模型。,homogenous（均质型）又称弥散型，相应的抗原是双链DNA和组蛋白复合物。常见于SLE，特别是肾脏受累病人。也可见于其它结缔组织病，如：风湿性关节炎，MCTD，干燥综合征

33、，硬皮病，慢性活动性肝炎及原发性胆汁性肝硬变。Peripheral(周边型)相应的抗原为双链DNA，多见于活动性SLE病人。,Speckle(斑点型)主要是针对ENA的抗体，包括Sm，RNP，SSA，SSB，Scl-70。一般认为低效价的斑点型ANA不是结缔组织病特有的，实际上不代表临床异常。高效价的抗Sm抗体多与SLE有关。高效价的抗RNP自身抗体见于MCTD，但也见于SLE。抗SSA和抗SSB抗体，见于S.S，也可见于SLE。当病人有抗SSA抗体时，通常以皮肤表现和光过敏为主。，也存在于ANA阴性狼疮和新生儿狼疮。Scl-70抗体与硬皮病有关。,Nucleoli(核仁型)其靶抗原是与RNA

34、分子相关的核蛋白。见于硬皮病。Centromere(着丝点型)抗着丝点抗体CACA，多见于全身性硬皮病的CREST。,胞浆抗体 Hep-2细胞具有许多胞浆抗原。如有特异性胞浆抗体存在，可出现强阳性胞浆荧光。包括抗线粒体抗体（AMA）、抗核糖体抗体、抗肌动蛋白抗体即抗平滑肌抗体（ASMA）、抗高尔基体抗体、抗丝抗体（如Vimentin）。一般最有意义的是AMA和ASMA，可是荧光染色Hep2细胞却不能鉴定这两种抗体，可应用鼠肾和鼠胃切片作进一步分析。、,系统性风湿病活动期的评价自身抗体检测以诊断全身性疾病比监测该病活动更有意义。但抗dsDNA抗体效价却与活动性有关。应定期检测抗dsDNA抗体的效

35、价及C3、C4的含量。以及测定循环免疫复合物（CIC）的含量。ESR和CRP在炎症反应时常常升高。RA病情加重时，CRP明显增高。SLE活动期，CRP一般正常。,器官特异性免疫性疾病组织抗体 许多自身抗体可采用IFA测定，用鼠肾和胃的切片能测出抗线粒体、平滑肌、肝肾微粒体和胃壁细胞的抗体。甲状腺组织切片可测定抗甲状腺自身抗体。,自身免疫性肝病 在肝脏病变中，ANA阳性率可达40-80%。抗线粒体抗体（AMA）与原发性胆汁性肝硬变有关。特别是高效价的M2和M9线粒体抗原。约一半的自身免疫性肝炎的病人有较高效价的ASMA。此外，肝肾微粒体抗体（LKMAs），抗可溶性肝抗原（SLA）抗体，抗肝细胞膜

36、抗体等也可用于自身免疫性肝病诊断和监测。）,其他 肾脏疾病常测定的抗体有抗dsDNA抗体，抗肾小球基底膜抗体等，还可测定CIC，以及作肾组织活检进行荧光染色。韦格纳肉芽肿病是一种发生于上下呼吸道的坏死性血管炎，也累及肾脏，病人常死于肾和肺衰竭。检查抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAs）是诊断指标之一。也可通过ELISA测定抗髓过氧化物酶抗体，抗蛋白酶3抗体，有助于诊断和鉴别诊断。,胃肠道疾病中，恶性贫血与抗胃壁自身抗体有关，与抗内因子抗体的相关性达75%。抗胰岛细胞抗体（ICAs），抗谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）与I型糖尿病有一定关系。重症肌无力病人可出现抗骨骼肌抗体。多发性肌炎和皮肌炎可有抗Pm1和抗Jo-1抗体。抗心肌抗体常见于心肌梗死、心脏手术或心肌损伤后。,