血细胞化学染色.ppt

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1、第三章 血细胞化学染色,一、概述（一）研究对象 外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中的化学物质：酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等,（二）临床应用,1.鉴别各类血细胞 2.辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断 3.观察疾病疗效和判断预后,二、常用细胞化学染色方法,过氧化物酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应-醋酸萘酚酯酶染色 铁染色,过氧化物酶染色（peroxidase,POX）,POX,新生态氧 O,过氧化氢（基质中）,四甲基联苯胺（无色）,联苯胺蓝（蓝色）,亚硝基铁氰化钠,蓝色颗粒（浆内酶部位）,粒、单核细胞胞浆,【原理】,【结果判断】-、+、+、+、+弱阳性 颗粒小，分布稀疏阳性

2、颗粒稍粗，分布较密集强阳性 颗粒粗大，密布于整个胞浆,【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统 POX主要存在于粒系细胞中。分化差的原粒细胞阴性;分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成熟逐渐增强。,2.单核细胞系统 阴性或弱阳性 3.淋巴细胞系统 红细胞系统 巨核细胞系统 阴性 浆细胞 组织细胞,【临床评价】,急性髓细胞白血病 急性淋巴细胞白血病,鉴别,1.急性髓细胞白血病（1）急性粒细胞白血病 阳性反应（2）急性单核细胞白血病 弱阳性反应,2.急性淋巴细胞白血病 阴性反应或阳性率 3%(残留原粒细胞),中性粒细胞碱性磷酸酶染色（neutrophilic alkal

3、ine phosphatase，NAP）,磷酸萘酚钠（基质中）,中性粒细胞胞浆中NAP,磷酸钠,-萘酚,重氮盐（坚牢蓝盐RR）,紫黑色偶氮染料（胞浆中）,水解,【原理】Kaplow偶氮偶联法,【结果判断】胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+）,【正常血细胞染色反应】,1.中性成熟粒细胞阳性反应 其他细胞呈阴性反应,2.NAP积分值 计数100个成熟中性粒细胞（杆状和分叶）,分别记录其分级情况：,(-)0分(+)1分(+)2分(+)3分(+)4分 阳性率 全部阳性反应细胞之和 积分值 各种阳性程度细胞的分值之和,3.参考值 积分值 35-70分(各实验室参考值不同),【临床评价】（1）细菌性感染与病毒性

4、感染（尤其是化脓性感染）明显增加 无明显变化,(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病 明显增加 明显下降且常为零分，缓解时又上升到正常,过碘酸-雪夫反应(糖原染色)（periodic acid-Schiff reaction，PAS）,双醛基,过碘酸,雪夫试剂中的无色品红,紫红色化合物(附于含多糖类 的胞浆内),乙二醇基(多糖类物质含有),氧化,【原理】,【结果判断】,阳性 胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗 粒状或块状。阴性 胞浆内无色或无颗粒,核淡绿。,【正常血细胞染色反应】,1.粒细胞系统 分化差的原粒细胞为阴性；分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞 各阶段均呈阳性反 应，阳性程度随细 胞的成熟逐

5、渐增强。阳性物呈细颗粒、均匀红色。,2.红细胞系统 阴性 3.单核细胞系统 绝大多数阳性呈细颗粒，有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。,4.淋巴细胞系统 大多数淋巴细胞呈阴性；少于20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。5.巨核细胞系统 呈颗粒状或块状阳性（含血小板）。,【临床评价】,1.红血病或红白血病 幼红细胞阳性 巨幼细胞性贫血 幼红细胞阴性,3.鉴别急性白血病类型,（1）急性淋巴细胞白血病 阳性率20%-80%，呈红色粗颗粒状或块状。,（2）急性粒细胞白血病 少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。（3）急性单核细胞白血病 可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时胞质边缘处颗粒较粗大。,-醋酸萘酚酯酶染

6、色（-naphthol acetate esterase，-NAE）,-醋酸萘酚酯酶（细胞内）,-醋酸萘酚（基质液中）,-萘酚,重氮盐（坚牢蓝B）,胞浆不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀,水解,【原理】,【结果判断】胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀为阳性。,氟化钠抑制试验 在基质液中加入适量NaF,其余染色方法同上。两种方法染色后用油镜计数100或200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性积分。,氟化钠抑制率=,抑制前阳性率或阳性积分-抑制后阳性率或阳性积分,抑制前阳性率或阳性积分,100%,【正常血细胞染色反应】,1.单核细胞系统 原始单核细胞 分化差 阴性 分化好 阳性 幼稚及

7、成熟单核细胞 阳性,被氟化钠抑制,2.粒细胞系统 原粒细胞阴性或弱阳性 以下阶段为弱阳性 3.淋巴细胞系统 多数阴性，少数弱阳性,不被氟化钠抑制,【临床评价】,急单 急粒 急性早幼粒 急粒单 急淋-NAE+或-或+阳性-+弱+NaF 被抑制 不被 不被抑制 部分被抑制 抑制 部分未被抑制,主要用于鉴别急性白血病类型,铁 染 色（ferric stain）,亚铁氰化钾,亚铁氰化铁(蓝色沉淀在含Fe部位),铁,酸性环境,普鲁士蓝 反应,骨髓小粒中的含Fe血黄素（细胞外铁）骨髓中贮存铁 幼红细胞内的Fe（细胞内铁）,原理,【结果判断】幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝绿色。,细胞外铁 低倍镜观察涂片尾

8、部和骨髓小粒,细胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团块状。,再用油镜判断阳性程度，根据铁量多少分五级:（-）（+）（+）（+）（+）,细胞内铁 存在于中幼红细胞、晚幼红细胞及成熟红细胞中的铁。油镜下计数100个中幼红细胞和晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分率。,根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情况,将铁粒幼红细胞分为四型:型 型 型 型,细胞内铁,1.细胞外铁+，约2/3人为+，约1/3人为+。2.细胞内铁 阳性率19%44%型为主，少数为型（无环形铁粒幼红细胞和铁粒红细胞）,【参考值】,【临床评价】1.诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗细胞内、外铁明显减低甚至消失，经铁剂治疗有效后，其细胞外铁、内铁先后增多。,2.诊断铁粒幼细胞性贫血 铁粒幼红细胞、环形铁粒幼红细胞均增多，细胞外铁也常明显增多。,1掌握常用细胞化学染色方法的结果判断和临床意义。2熟悉常用细胞化学染色方法的原理。,本章目的要求,完,