血清总蛋白白蛋白测定SerumtotalproteinAlbum.ppt

《血清总蛋白白蛋白测定SerumtotalproteinAlbum.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血清总蛋白白蛋白测定SerumtotalproteinAlbum.ppt（42页珍藏版）》请在三一办公上搜索。

1、血清总蛋白、白蛋白测定（Serum total protein、Albumin test）,临床生物化学：是研究机体健康和疾病的生物化学过程。测定体液或组织中的成份以提供对疾病的诊断、治疗和预防。,所用样品：血液（血清/血浆）、尿液、脑脊液及体液,测定方法：凯氏定氮法、双缩脲法、酚 试剂法、紫外分光光度法、染料 结合法、比浊法等。,总蛋白测定（一）、凯氏定氮法 历史悠久，它是根据蛋白质平均 含氮量16%来计算蛋白质浓度的。结果准确，但方法复杂 标化血清 检验其他方法,（二）、双缩脲法 蛋白质中的肽键在碱性环境中能与铜离子作用产生紫红色络合物。此反应和2个尿素分子缩合后生成的双缩脲在碱性环境中与

2、铜离子作用产生紫红色络合物的反应相似，故称为双缩脲反应。,简单、精密、准确，为临床首选的常规方法，但灵敏度稍差。,（三）、酚试剂法 运用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基能还原磷钨酸-磷钼酸试剂生成钼蓝来测定蛋白质的浓度。改良法：在酚试剂中加入碱性铜离子。集中了双缩脲法和酚试剂法的优点,灵敏度高，但受许多还原物质的干扰，限制了它在临床上的应用。,（四）、紫外分光光度法 蛋白质分子中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处有一吸收峰，可用于蛋白质含量的测定。,准确性差，但因未加任何试剂和处理，可保留其生物活性且可回收全部蛋白质，故可用于较纯的酶和免疫球蛋白测定。,（五）染料结合法 在酸性环境下，蛋白质分子

3、带正电，可与带负电的染料结合产生颜色而测定之。重复性好、灵敏度高，BCG 法特异性不高。,（六）比浊法 某些酸（如三氯醋酸、磺基水杨酸）能与蛋白质结合产生微细沉淀，测定悬浮液的浊度即可求得蛋白质的含量。简单、试剂易得，但影响因素太多。,血清总蛋白双缩脲测定法一、原理：蛋白质中的肽键（-CONH-）在碱性环境中能与铜离子作用产生紫红色络合物。,此反应和2个尿素分子缩合后生成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性环境中与铜离子作用产生紫红色络合物的反应相似，故称为双缩脲反应。,颜色的深浅在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比，经与同样处理的蛋白标准液比较，即可求得蛋白质含量,郎伯-比耳定律

4、：溶液的吸光度与溶液浓度成正比 A1=lgI0/I=K1C1L1，A2=lgI0/I=K2C2L2,由于 分析物质相同，处理一样，比色皿也相同，故 A1/A2=C1/C2，则 C1=C2,A1,A2,二、主要试剂：双缩脲试剂（NaOH、硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾）蛋白标准（60 g/L）,三、操作步骤加入物（ml）B S2 U2血清/0.05标准液/0.05/双缩脲试剂 3.0 3.0 3.0 混匀，37，10分钟，540nm处比色，1cm光径比色杯，B管调零,注：1.非严重黄疸、脂血及高脂血 症血清不用做血清自身对照管。2.可以用蒸馏水调零，目的是检 验各个试剂的好坏,四、结果 Au 血清总

5、蛋白（g/L）=X 60 As 五、正常参考范围 60-80g/L,六、临床意义1、总蛋白浓度升高（1）蛋白质合成增加：大多见于多发性 骨髓瘤患者（2）血浆浓缩，如急性失水、外伤性休 克、慢性肾上腺皮质功能减退。,2、总蛋白浓度降低（1）蛋白质合成障碍：肝功能严重受 损蛋白质合成减少（2）蛋白质丢失增加：严重烧伤、大 出血、肾病综合征、溃疡性结肠炎（3）营养不良或消耗增加：营养失调、低蛋白饮食；患消耗性疾病（4）血浆稀释：如静脉注射过多低渗 溶液或各种原因引起的水钠潴留。,七、注意事项1、黄疸血清、严重溶血、某些试 剂（如葡萄糖、酚酞、溴磺酞 钠）对本法有明显干扰，可用 标本空白管来消除。2、

6、高脂血症混浊血清也会干扰比 色，先用丙酮抽脂后再做。,八、方法学评价 准确性高 重复性好 优点 干扰少 试剂稳定 操作简便、快速 缺点 灵敏度较低 手工和自动化都可，已被推荐 为测定血清总蛋白的参考方法。,白蛋白测定 白蛋白是血浆中含量最多的蛋白质。其测定方法主要有盐析法、电泳法、染料结合法、免疫法等。,（一）、盐析法 蛋白质分子表面因有水化膜的保护而稳定，如果加入大量中性盐则电荷被中和、水化膜被破坏，蛋白质分子因相互聚积而沉淀析出，此种现象称为盐析。,球蛋白分子量较白蛋白大，相等重量的表面积要小，电荷和水化膜也少，故先被沉淀下来，而白蛋白仍留在溶液中，可用测定总蛋白的方法测定之。,常用的中性

7、盐有半饱和硫酸铵、23%硫酸钠、双硫酸（20.8%硫酸钠和7.0%亚硫酸钠溶液）准确性差、操作烦琐，且不宜用自动生化分析，基本不用。,（二）电泳法 醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳。特异性高，准确性不够，操作烦琐费时，且不宜用自动生化分析,（三）染料结合法 根据白蛋白结合外源性染料的能力比球蛋白大，故在不分离白、球蛋白的条件下用染料直接测定白蛋白。有干扰，但灵敏度高、操作简便、重复性好，自动生化分析仪常用的方法。,（四）免疫学法 免疫扩散法、免疫比浊法（透射比浊法和散射比浊法）、放射免疫法。特异性好、灵敏度高，但成本较高，费时，一般用于尿液和脑脊液中微量白蛋白的测定。,溴甲酚紫测定血清白蛋白一

8、、原理：在pH5.2的缓冲液及表面活性剂存在下，溴甲酚紫（BCP）可与白蛋白结合形成绿色复合物，在603nm波长处有一吸收峰，与同样处理的白蛋白标准比较，便可计算血清中的白蛋白浓度。,二、主要试剂：BCP 乙酸钠 用乙酸调pH 乙醇 至5.20 Brij-35 白蛋白标准：40g/L,三、操作步骤加入物（ml）B S2 U2血清/0.02标准液/0.02/BCP试剂 3.0 3.0 3.0 混匀，1min后在603nm处比色，B管调零,四、结果 Au 血清白蛋白（g/L）=40 As 五、正常参考范围 成人36-46g/L,六、临床意义1、增高：见于严重脱水所致的血浆浓缩2、降低：(1)急性降

9、低：见于大出血和严重烧伤；(2)慢性降低：见于肾病蛋白尿、肝功能 受损、恶性肿瘤、结核病伴慢性出 血、营养不良等。（血清白蛋白低于20g/L，临床上出现 水肿）,七、注意事项1、严重脂肪浑浊血清对测定有干 扰，应做自身对照。2、严格控制pH5.20.03（球蛋白和球蛋白的等电点 接近5.20）3、不可用动物血清作质控血清,八、方法学评价 特异性高、反应简便、快速、完全，干扰少（相对于BCG法）,小结：凯氏定氮法是蛋白质测定的参考方法，用来标化血清和检验其他测定蛋白质的方法；双缩脲法也是测定血清蛋白质的参考方法，同时，也是临床上最常用的常规方法。,BCP法测血清白蛋白特异性高、反应简便、快速、完全，但不可用动物血清作质控血清；BCG法测血清白蛋白简便、快速、干扰少，是目前国内测血清白蛋白的最常用方法，但特异性不高（30S内对白蛋白特异）。,