实验设备及培养条件.ppt

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1、（1）掌握组培室的功能布局与设计要求（2）掌握组培常用的实验仪器设备及使用（3）掌握调控组培的主要环境条件,目的要求：,第二章 实验设备及培养条件,第一节 实验室第二节 设备和器材第三节 培养条件,第二章 实验设备及培养条件,配置室,洗涤室,接种室,培养室,观察室,组培实验室,驯化室,第一节 组培实验室,案例1：实验室平面设计,案例2：实验室构成,功能：用于玻璃器具的 清洗、干燥和贮 存；接种材料冲 洗。,配备：上下水；水槽；塑料筐；干燥箱；晾干架等。,1、洗涤室,面积：根据规模，可与配置室合并，一般20m2。,2.配置室,功能：用于培养基的配制、试管苗出瓶、清洗。,配备：药品柜，天平，工作台

2、，蒸馏水器，磁力搅拌器，冰箱，电炉或电饭锅，酸度计，培养箱,设计要求：明亮、通风、洁净。,药品柜,冰箱,天平,磁力搅拌器,恒温水浴锅,酸度计,电蒸馏水器,水处理中心,恒温培养箱,电饭锅,电炉,人工气候室,功能：完成培养基、接种工具等的高压灭菌过程。配备：高压灭菌器或微波炉，烘干箱。,3.灭菌室,4、接种室,功能：用于植物材料的无菌分离、接种和转移培养物。结构：缓冲间+接种室配备：超净台，工作台，搁架，医用平车，细菌过滤器、解剖镜、紫外灯等。面积：一般1020m2设计要求:地面平坦无缝、顶棚及墙壁密闭光滑，干爽安静，清洁明亮，配置横拉门，门窗严密。,超净工作台,电子灭菌器,臭氧灭菌机,5.培养室

3、,配备：培养架 边台 解剖镜 照明设备 定时器 空调器 干湿温度计 工作台 除湿机 换气扇 面积：根据规模定,功能：培养植物材料。,5.培养室,6.观察室,功能：观察并研究培养材料的生长分化情况及其形态发生规律；检查培养材料是否脱毒和发生变异。主要配备：生物显微镜，切片机，酶联免疫检测仪，PCR扩增仪等。,要求：室内清洁、明亮、安静，设备先进。,7.驯化棚室,要求：能够控温调湿、控光通风。面积：据规模来定。注：室内驯化与设施下驯化均可。,功能：提供组培苗炼苗的环境。,7.驯化棚室,第二节设备和器材,一、玻璃器皿,二、器械用具,三、仪器设备,（一）对玻璃器皿要求：1.耐腐蚀；耐高温、高压；2.透

4、明度好；3.便于接种。,三、玻璃器皿,三角瓶：50、100、250、500ml或用250ml罐头瓶代替。培养皿：6、9、12cm试管：18180mm或20200mm量筒：10、50、100、500、1000ml烧杯：50、100、200、500、1000ml容量瓶：100、200、500、1000ml试剂瓶（棕色）：50、100、250、500、1000ml移液管：0.2、0.5、1.0、2、5、10ml 微量移液器 玻璃棒、酒精灯,（二）玻璃器皿的规格：,1、镊子类：接种、转移材料或分离茎尖用，以100ml三角瓶为培养瓶，可用20cm长。,二、器械用具,二、器械用具,2、剪刀类：医用剪刀，剪

5、切割外植体或继代培养时分离材料。,3、解剖刀：切割芽、茎段、愈伤组织等，继代时分离材料，也可用于微小外植体的接种等。,4、解剖针：转移细胞或愈伤组织，微茎尖分离及接种等。,二、器械用具,5.其它：周转筐 搪瓷盘 移液管架、玻璃棒、酒精灯、试管架等。,一、仪器设备,1、恒温培养箱 2、烘箱 3、空调4、高压灭菌锅 5、冰箱 6、天平7、酸度计 8、显微镜 9、水浴锅10、蒸馏水器 11、磁力搅拌器12、人工气候室 13、摇床转床 14、干燥箱 15.细菌过滤器,第三节培养条件,1.一般控制在252C。2.植株种类及外植体的不同，其最适温度也是不同的。如百合20；月季2527；番茄28。,一、温度

6、,二、光照,1.光强影响外植体细胞的增殖、组织和器官的分化。,有的材料愈伤组织的诱导需光或需暗；光照强，幼苗生长健壮；光照弱，幼苗生长弱小，容易徒长。,不同波长的光对细胞的分裂和器官的 分化有影响。,2.光质,白光促进小花天竺葵愈伤组织 的生长，蓝光则无作用。,如：红光促进杨树愈伤组织的生长，蓝光阻碍其生长。,3.光照时间,根据植物生物学特性决定；光照长短对试管内花的形成有重要影响；在胡萝卜组织培养中随着日照长度的增加，而促进生长。,三、湿度,1.瓶内的湿度：主要受到培养基含水量和封口膜透性的影响。如培养基过硬，则不利于外植体接触和插入培养基，导致生长迟缓；封口膜过于透气，也会使瓶内湿度下降。

7、,2.环境湿度：过低会使培养基丧失大量水分，渗透势升高，影响材料对营养物质的吸收，也会阻碍外植体的生长。一般为7080%。,三、湿度,1.瓶内的湿度,1.培养基适宜PH值5-6.5，一般为5.8，调整用0.1M的NaOH和HCl溶液。,四、pH值,2.H影响培养基的硬度。H 6.5 培养基会变硬；H 5.0 培养基不易凝固。,3.灭菌之前，培养基的H要比标准提高0.20.3个单位。,五、气体(必要条件),1.培养瓶内氧气的充足与否与封口材料有关。可用棉塞或特制的封口塑料。通气最好的是棉塞，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。,2.培养基内氧气充足与否与培养基的种类和培养方式有关。固体培养基可加进活性炭来增加 通气度,以利于发根。液体培养时，可考虑采取振荡培 养的方式，以增加通气性。,五、气体(必要条件),2.个大气压以上就对生长有阻碍作用，5个大气压生长就完全停止，个大气压细胞就不能生存。,六、渗透压,1.1-2个大气压促进生长。,复习思考题：1.你认为组培实验室在规划布局上应考虑哪些问题？并尝试设计1个组培实验室。2.按类别列举组培实验室所需设备 3.如何理解温度、光照条件对组培的影响？,