液相色谱实验基础.ppt

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1、液相色谱基础,本章内容：液相色谱发展史液相色谱的基本概念影响峰形扩展的因素,历史回顾,高效液相色谱,(HPLC),进样口,检测器,色谱图,色谱柱,溶剂,泵,混合器,HPLC 结构框图,HPLC 结构框图,色谱参数,Detector Response,Time,A,B,W,W,A,B,Inject,t0,tR(A),tR(B),t=保留时间,t=死时间,R,W=峰底宽度,0,定性和定量,影响R值的因素,分离选择性,改用不同的流动相,改变流动相的组成,改变流动相pH值,改变柱温,应用特殊的化学效应,改变固定相,(),改变分离选择性的方法,柱效,Detector Response,Inject,Ti

2、me,高柱效,低柱效,A,A=涡流扩散多径扩散,仔细填充柱子,使用均一的载体,线 速 度,H,E,T,P,扩散,初始,带宽,最终,带宽,扩散,C,.,u,C=传质阻力,在低流速下可以降低传质阻力,使用小颗粒载体可以降低传质阻力,H,E,T,P,线速度,滞流的流动相,流动相,固定相,柱外效应,样品体积,I.,连接管路的体积,色谱柱进口设计,色谱柱出口设计,检测池体积(10 L),II.,III.,IV.,V.,降低输出回路响应时间,VI.,如何提高分离度,通过下述方法增加保留时间:,选择合适的分离参数增加色谱柱长度增加固定相浓度,通过下述方法降低谱带宽度:,使用均一的载体仔细填充柱子选择粒度小的

3、载体优化流速减小进样量降低系统死体积降低输出回路响应时间,HPLC 仪器简介,本章内容：流动相及贮液罐 高压输液泵及梯度洗脱装置进样装置色谱柱检测器色谱数据处理装置,优化流路减小死体积流路自上而下,堆积配置,每个部分有独立的电源1100各部件均由CAN线连接检测器与化学工作站之间用 LAN线连接(或用HP-IB连接)脱气机与泵之间用遥控线连接(错误信号输出)BCD板用于外设和读取样品瓶数量,连线,Agilent 1100 泵和在线脱气机,Agilent 1100系列泵,G1310A,G1311A,G1312A,G1354A和Agilent 1100 系列在线真空脱气装 置(G1322A),Ag

4、ilent 1100系列真空脱气机,在线真空脱气机工作原理,HP 1100 Series On-line Degasser:Influence on Detector Baseline,no degassing,helium degassing,HP on-line degassing,Absorbency,1,2,3,4,5,6,7,8,9,Time(min),Solvent:methanol;UV signal:210 nm,溶剂传输系统,往复活塞泵(单向阀),Gold Seal,Sapphire,Insert,Ruby Ball,Spring,Insert,泵头-单元/四元泵,Lock

5、Screw,Agilent 1100系列四元泵G1354A;真空脱气机为标准配置!,建议.使用2，4，8mm内径的柱子流量范围从 0.2 到 10 ml/min应用于研究和常规分析,特征/优点四通路/低压混合能灵活地进行恒梯度或梯度洗脱。无需消耗昂贵的He而能进行高性能真空脱气。自动冲程调节，混合非常均匀，降低基线噪音。对于高盐流动相，可选择Seal Wash清洗密封垫。,Agilent 1100系列四元泵G1354A包括真空脱气机,溶剂柜,真空脱气机 G1322A,四元泵 G1311A,四元泵工作原理,Authoring Division Name File NameSecurity Not

6、ice(if required),Vacuum Chamber,MCGV,AIV,OBV,Damper,Purge Valve,Waste,to injection device,from solventbottles,MCGV 比例阀AIV 主动阀OBV 单向阀,Authoring Division Name File NameSecurity Notice(if required),Vacuum Chamber,MCGV,AIV,OBV,Damper,Waste,from solventbottles,手动进样器六通阀,六通阀之扎针,泵,色谱柱,定量环,废液,排空,INJECT,六通阀之装

7、样,泵,色谱柱,定量环,废液,排空,INJECT,LOAD,泵,色谱柱,定量环,废液,排空,六通阀之进样,INJECT,LOAD,泵,色谱柱,定量环,废液,排空,六通阀之小刻度进样一,INJECT,LOAD,手动阀,手动进样器,前视图,后视图,样品定量管,固定相结构,本章内容：固定相载体结构正相色谱固定相键合相色谱固定相,正相 HPLC,极性固定相,有机流动相,传统,目前,硅胶,氧化铝,氰基,二醇基,氨基,吸附色谱,键合相,适用于:,同分异构体的分离.,在有机/水流动相中不溶化合物的分离.,适用于中等极性化合物分离.,硅胶柱和氧化铝柱的缺点,容易脱尾,样品被催化分解,不易梯度洗脱,含水量要控制

8、,Particles of Column,Packings,50m,Large Porous,Particles,30m,Pellicular,Beads,3-10m,Microparticulates,2m Active Surface,Agilent 1100 柱温箱,柱温箱的特征及优点,推荐.温度控制范围：低于室温1080保留时间的再现性需要稳定 的温度如果需要在高于或低于室温 进行分离操作时，需要使用 柱温箱,特征/优点大空间，可以容纳三根30cm长色谱柱更换柱子非常方便降温非常方便安装柱识别可以记录进样次数使用切换阀可以进行柱切换(可选)两个单独的加热区可以分别控制温度可以进行程序升

9、温内部死体积小(左侧3L，右侧6L),Agilent 1100 二极管阵列检测器,推荐.研究及方法开发 多波长检测 峰纯度检查 峰确认（定性）,性能/优点.灵敏度高(1x10-5AU)。两个灯，波长检测范围宽（190950 nm）。1024个二极管 和 1 nm 狭缝。可变狭缝。根据不同需要选择流动池。可以进行自动峰检索。利用紫外谱图进行峰确认,Front Elements-DAD,DAD光路,钨灯,耦合透镜,氘灯,光源透镜(消色差透镜),氧化钬滤光片,支撑透镜,Flow cell,光谱透镜,光栅,阵列,狭缝,检测器使用统计,定性分析-探索三维立体影像,DAD测试功能及诊断,DAD自检暗电流测

10、试灯强度测试钬玻璃测试流通池测试,滤光片测试波长校正模拟信号输出测试,色谱数据处理装置,1.计算机2.色谱工作站,溶剂准备：过滤,使用小于 0.5m过滤膜.,有机物-Teflon,水-Nylon 66,防止固体颗粒损伤仪器或柱头,日常维护,溶剂准备,溶剂脱气,目的排除溶解在流动相中的氧气和氮气脱气方法He脱气真空脱气回流加热脱气超声脱气,溶剂信息,避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。在有机溶剂中的有机酸溶液。含有强络合剂的溶液。四氯化碳和异丙醇或THF混合液。,初始化和平衡,预柱和保护柱,色谱柱保护,过滤所有的溶剂和样品使用保护柱仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液柱子在不使用时，两端密封保存在适当的溶剂中保存柱子注意色谱柱的pH值使用范围不要高压冲洗柱子不要高温下过长时间使用硅胶键合相,样品准备,The Good User,下列优良常规实验操作能够最大限度降低维修费用：,清洁的仪器、流动相和样品;进行必要的过滤。保证溶剂的相溶性。仪器使用完毕，冲洗整个系统，去掉盐份，防止污染。对仪器的维护和保养进行记录。,