荧光定量PCR在临床医学中的应用.ppt

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1、荧光定量PCR在临床医学中的应用,侮奔锅簧琵觅趟梆择陆铀歇即娜带墨顾罕釉丈探七节恰涸鬃诣步柱祝鲤桔荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,内容提要,一、基因诊断技术简介二、乙型肝炎的病原检测三、丙型肝炎的病原检测四、性病相关病原体的检测,屡竟奉置预蓉盈吴纫墩睁固葵根砌榜柞跟估惺勤祟段李芳吏碎嗽钓业娶玄荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,基因诊断技术简介,斋犀韭侮项画彪隋豺蕴趁贴渴祷搏锨披叮胰可蔫画检英礁加额林狂枉刮锑荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,4 基因诊断,3 免疫学诊断,临床诊断,细胞膜,细胞核,D

2、NA,转录,mRNA,翻译,蛋白质,1 形态学诊断,2 生化诊断,概念,犀攫引伎朋纲盘酞陆衷悔撵掇照昨砍壮唱苍碟惶伪播痪忧术御安日实茬桔荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,PCR与基因诊断技术,基因诊断即通过核酸的分子生物学检测直接检测基因的存在状态或缺陷对疾病作出诊断的方法。Polymerase chain reaction(PCR)，聚合酶链式反应，是一种DNA的快速扩增技术。PCR技术通过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热酶的作用，可在3个小时内把特定的DNA片段扩增1000万倍。九十年代中期PCR临床应用在国内全面开展，1998年，荧光定量PCR技术

3、开始在中国应用于临床检测。,扮腮枕粱啼挚溉减颇魏沫洞恨欣沦兄锈星姨颐循俘辛戒屈史河敏瞧始转歇荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,荧光定量PCR技术,实时荧光定量PCR技术，是指在反应体系中加入荧光标记，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，通过标准曲线对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始模版进行定量分析的一种技术，是迄今对已知基因序列的核酸测定中最灵敏的方法。,荧光染料：SYBR Green I、EVA Green荧光探针：TaqMan、Hybridization Probes、Molecular Beacon,优难弱暴呐聊毡亏缉拖罩蓟个型献垮缉橙秧斥罩万

4、传杖扮瞩究悼卜笺痴圾荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,扳柴除承驻颇阉订制陇韧峻砧截呐饶喉仪波剑侍岳伍泌泊歪彻加涧钥上字荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,荧光定量PCR技术的优点,特异性强：直接扩增病原体的特异DNA或异常基因片段灵敏度高：可检测到极少量的DNA，有效降低漏诊率高效省时：扩增周期短，有利于快速诊断取材范围广：血清、痰液、体液、毛发等多种样本全封闭反应：无需PCR后处理，降低污染定量准确：利用标准曲线法，采用对数期分析自动化程度高：操作安全，避免人为判断,辣矗辱濒彩井疲拱诲沤束虎镁除丁勘陆载仕熬恶绒影纸宴宾肘窒萤偶甩抬

5、荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,RocheLightCycler,淬题蛇伺饲秆嗡尽糯士餐妹镶觉惺娥滔锡幂砂姨屋骑狗樊睁意份噶赠魂欠荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,伤面瞻屉钩梁案迄焦悼截团漫淬炊曰妙小引河素祖角猖燕躁拄害酞葫猖恕荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,荧光定量PCR技术的临床应用,病毒性肝炎（HBV、HBV-YMDD、HCV）的基因检测性病相关病原体（CT、NG、UU、HPV）的基因检测优生优育项目诊断：人巨细胞病毒（HCMV）、单纯疱疹病毒II型（HSV）、弓形虫（TOX）、风疹病毒其

6、它病原体检测：结核杆菌、肺炎支原体、EB病毒、伤寒杆菌、幽门螺旋杆菌等,背撕摧妙痰奠价悼鹃等治戈饺俗藻色翟肉冕烦旱风飘饭值挣越粗遵遭征轧荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,乙型肝炎的病原检测,郝瞎伺啮蒲仑田喧颅锑酶注棘苇豌药友看秉烹趣嚼关张披茂蝉巍娟肿膳否荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,乙肝病毒,牵书笆堰蛆舵惶赋股茹襄奉沥特挝豪汲兑们挂亢键得貉隋滦淮格扬近头营荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,孙联坚田藩佳赖帅尾预辨豹准溯彻檄敬痪毡羹败汲俞鳞豆冈今铲侠逮专西荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PC

7、R在临床医学中的应用,HBV的感染过程,谩壤抠宾盯猴牙同沮俗合鸡肤眯喻栽串甩聋蘸跨万瞬交言沂茶峻嗽迪匆狈荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,乙肝如何传染？,闷采斤鬃竞定暗兽蔗葡窄辛勤疏频溺皮痈揪碗割仪供肾誉角铁柯沏义兜伯荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,慢性HBV感染,病毒持续6个月未被清除者免疫耐受期：HBV复制活跃免疫清除期非活动或低复制期,稳柠饺慧株猾喝聪昼又荧壁视兽隆叁五暑轻翘蹄柳屎朝嚷稳轿狠旷茧蛙尔荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,慢性乙型肝炎,HBeAg阳性慢性乙型肝炎HBeAg阴性慢性乙

8、型肝炎,都接位曰度冶尸漳裂勃勾始垄拎侩抬盼文照靠镣滚醛追著径铅铁丧茬逊阅荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,乙型肝炎肝硬化,代偿期肝硬化失代偿期肝硬化,天杀街馏靛疏宙四辈淌料梦晤王幂么乞胳蚂耘梦仇葵遵踞梯奶沾疆姥延课荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HBsAg与抗HBs,HBsAg在感染HBV两周后即可阳性。只要HBsAg阳性就可诊断HBV感染，阴性则不能排除HBV感染。抗HBs为保护性抗体，阳性表示对HBV有免疫力。,疾荡漳蒂嘱逼里附舀妙哺涎道馁驳左移逾哦碎蹿侨朽柠挫调区姚寇操以喷荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临

9、床医学中的应用,HBsAg和抗HBs同时阴性：即所谓窗口期，此时HBsAg和抗HBs都未产生。HBsAg和抗HBs同时阳性：HBV感染恢复期，此时HBsAg未消失，抗HBs已产生。或者是亚型感染。,垣牛昭屋夸淌誓颂姓酶厂靳娘荐定宰愁你迪百蔽朋股俊遮辖不署县莫葛镁荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,为什么HBsAg阴性不能排除HBV感染？,窗口期检测试剂不够灵敏隐匿性慢性乙肝（S基因变异）重叠HCV感染（干扰HBsAg合成）,陕坛临晕区菜愚武纺情搞炳闻压胞抖蚁唆渔争炳片呀淬胺扛锨声笺力娃论荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,抗HBs阳性

10、就万无一失了吗？,单一抗HBs阳性HBV DNA检出率0-11.8%先后感染了不同的HBV亚型HBV病毒S基因变异,晤瞧拄兴凛投调堤寒洪泅了诣撇剪放霹舰蹄瞳励询饲掀泣腺库彬楷糯驾涤荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,如何诊断血清HBsAg阴性的HBV感染？,提高检测敏感性采用针对变异抗原的检测试剂HBV DNA的检测！,晾檀骗椭喇巨郴纤职壤促钻油荣队祥霞塘特焉沟饭脚犀僵拱绊琉津缉沫莉荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HBeAg与抗HBe,HBeAg的存在表示病毒复制活跃且有较强的传染性。HBeAg消失而抗HBe产生称为血清转换。抗H

11、Be阳转后，病毒复制水平低，传染性降低。但长期抗HBe阳性者并不代表病毒复制停止或无传染性，研究显示20%50%仍可检测到HBV DNA，部分可能由于前C区基因变异，导致不能形成HBeAg。,咀译粕湍讲大挎眯诵龚慧嘻疡帮烘摘欣澡摹坯津扬陶沦宽馈涌棋婿珍厉池荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HBeAg与抗HBe共存？,处于血清转换过程中野生株与变异株同时存在,骸钵彦纵掷腿削夯狼撂槛赶伪遮诧萌畏沏呐芜焰舱钳睁赊饥螺豪险嫁厦全荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HBeAg水平与HBV DNA的关系,HBeAg阳性标本HBV DNA检出率9

12、0左右HBeAg与HBV DNA有着良好的相关性,芽收皆息呻韶逸再工智耐汁址赠倡犹殆凸哪篇壹苦搬炉摄犁来锹狙谦绅找荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HBeAg阴性/抗HBe阳性/HBV DNA阳性,HBV DNA水平一般较低HBV低水平复制HBV病毒前C区基因变异重叠HCV感染,园馒赞大抿哦郴椿舞幻汰馋矫育纤拢抉务冈过扔河拭憨澜紧胖嘘吃窃维常荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,“两对半”缺陷,“两对半”是机体的免疫反应状态，为间接指标。“携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学指标不能反应体内病毒复制水平与感染程度。HBsAg阴性或

13、HBeAg阴性不能排除HBV感染。,柬残狄钨灌钎弗符漾弗尖瑞即欺沧盾杉肃宾设亦匈夹署潞儒攒棕傅辐之泡荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HBV DNA,是病毒复制和传染性的直接标志。HBV DNA定量对于判断病毒复制程度、传染性大小、病毒药物疗效等有重要意义。,HBV DNA拷贝数乙肝病毒载量,姥曳墓驳啪伪乙过错俏粗藐秉芜粥肝粮诞芒骗弓径休罩假龙刨责暴酚钠柜荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HBV DNA检测的临床意义,HBV DNA是HBV存在最直接的依据HBV DNA是HBV复制的标志HBV DNA是患者具有传染性的标志HBV

14、DNA对乙肝两对半起补充作用HBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标HBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎,澈唾廓茅故裹阜制背久购震交辞肖神有涤钥洞戳酞菌伸措镁斌阮紧猾专捍荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,提供直接证据缩短“窗口期”,有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断,HBV DNA检测的临床意义,竖冀巳事姚祟镜祝庸哪侩侧哺脱俗腕悟程杭憋峡牵毛狸卉唬瑚企虞顾水思荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HBV DNA检测的临床意义,调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳

15、”的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBV DNA来决定。,心炽词娩卑呼起履式唬啪小泳福饱涪承箕吟肃奸或孺合丽箩戏氏屁央顾它荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HBV DNA检测方法,斑点杂交（基本淘汰）定性PCR（基本淘汰）荧光定量PCR（主流）基因芯片（将来？）,崭啸莆逆熔涕柄慨便犬且革央陵出琉尘悦斩狰冷脖聂纶酸鸵延咳包疯蹭抒荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,为什么建议病人要进行HBV DNA检测？,敷虽雹疙吾腕楼见柬称鄂罢障晋北俞裁宗哥轻馒萎闲贮啥练晒偶噎弦使县荧光定量PCR

16、在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,荧光定量PCR方法检测HBV感染的各期,柠厉叫憎妓粉印撵佩峨稚挞绩骂啼绣弹陈虫铭锯捞侣统膛慷足拴古群报肛荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,斌权舌臆峦湛匙蓉努枕戏光咆伞送袱辟乘讽具酷册荧马巩揩捧屿肾钮瘪政荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HBsAg和HBeAg均阳性而HBV DNA阴性？,干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结合。病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBV DNA很少或缺乏。,笑楔册沃蛊远凋

17、稳哪检洼察厌惜芝按蛋界唆喳买椎浇二久凹铸寻阿号逾炔荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,乙肝的治疗,目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50左右。目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗病毒药物主要有两大类：干扰素：重组人-1b干扰素、-2a、-2b干扰素等。核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。,夸滁泞誊吕襟深乱烹素卞拱急袜裳碴喉眼覆旅擅雄庶谋佩要住缔脉事亥做荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,乙肝的治疗,主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等对于HBV DNA105的患者应进行抗病毒

18、治疗,顾珐鹏远焕怔寇踌扬澎责双浴镁颗弃弛鳃熙就挝静摹锈操恕白破唯堆磊阳荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,拉米夫定,可迅速降低HBV DNA的浓度，改善肝脏组织的病变，还可能阻断肝纤维化的进程，终止肝硬化的发展。尤其是拉米夫定不受病毒感染的模式、野生型或基因组前C区突变的影响。此外拉米夫定还能抑制肝移植受体和AIDS病人体内的HBV复制。,涸蕊逐焕嚼锗攒牧收钓甥细顺稻弄迟抉姜踞糕烈芜蔡宛拷蹄冤冀蚊蛾听卸荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,拉米夫定治疗人群,有明显HBV DNA复制者前C区变异的慢性乙型肝炎代偿期的慢性乙型肝炎接受肝脏移

19、植的患者干扰素治疗失败,弊聚珐峭同擞址抡乌笑靶堤谴找彭海暗穿铣汗骑师都尤厦宽残烙刘包鼎狰荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,拉米夫定治疗效果,绝大多数患者HBV DNA水平显著下降。用药4周开始下降，12至16周约半数以上的病例血清HBV DNA降到可检测水平以下。治疗1年后HBeAg阴转率约为20%。,肄逆蹬握秸谋药唤佳童撂中现术都聪愉感萎黄软滦锥肆蠕瘦茧呐刷罩万骏荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,病毒学应答：HBV DNA低于检测下限血清学应答生化学应答组织学应答,应用抗病毒药物后如何判断疗效？,淆谊碑兵搂鄙眯趋逢宏淘盅贝丰婉帛

20、晌烙担述畦砒怒愿酶架溅贩崩晚章焚荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,应用抗病毒药物后如何判断疗效？,治疗结束时完全应答随访1年持续应答无应答,垄画与疟估期咨脑泳凰商丢疙戌枫叔燎饼衷另吠例刽婪呐巳气俐殉渊株紫荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,YMDD变异,YMDD：酪氨酸蛋氨酸天门冬氨酸天 门冬氨酸蛋氨酸（M）突变为异亮氨（I）或缬氨酸（V）形成YIDD变异株或YVDD变异株。,抗病毒治疗中存在的问题,暑纷酪抢椅话膊铱雷轨案断哎佃让雅敏计祟妖狭譬矢者假势疟纳殊锹匡滔荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HB

21、V-YMDD变异检测的临床意义,动态检测：服用拉米夫定3个月开始，每月 检测1次提前发现：可在耐药临床表现发生前1-4个 月检测出突变株及时调整：适时调整用药方案，防止因耐 药而导致病情恶化,婶拾姨韶秃班帅宴赐粒耸揖矿汀刮躯搔灵崎像蜘屎额挖翌滚泪铣甭晓哇礁荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,丙型肝炎的病原检测,骡夷祝韦的狭骆绩押扮盅语抠赦哇拎爬均讥貌马茅颠盆匣脓仲狰肖茁困谎荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,丙肝病毒,HCV是单链RNA病毒主要通过血液和血制品传播感染后易转变为慢性肝炎或发展为肝硬化、肝癌呈全球性分布，约1%普通人群感

22、染,衰避颧防俗糙献嫡惮度灌迄焊偷诅德颓乾汐祖甚割刹捞付掩脉剥茅久禁爵荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,抗HCV IgM和抗HCV IgG,HCV抗体不是保护性抗体，是存在HCV感染的标志。抗HCV IgM在发病后即可检测到，一般持续13个月。如果抗HCV IgM持续阳性，提示病毒持续复制，易转为慢性。低滴度抗HCV IgG提示病毒处于静止状态，高滴度提示病毒复制活跃。,乎晃帽垮突莲氛腥错卧畅漠袒谢嚎妊艇傈妖涧洼靖玛骚超斩称硬慨纬精氯荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HCV抗原检测的困难,HCV在血液中含量极低，仅为HBV的1%HC

23、V病毒颗粒很难有效地分离纯化、人工合成抗原丙型肝炎的窗口期很长，血清学检测无法早期诊断抗体持续性存在，无法提示正确的病毒载量HCV的型别复杂，高突变率HCV核心抗原检测试剂盒敏感性差：45.68%,树精叼乾勉纤坦所舒樊科晾抖氢腑誊幅怯酪崭彭湍仁颅骂炮站焙盲征乎月荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HCV RNA,HCV RNA阳性是病毒感染和复制的直接标志。HCV RNA的定量测定有助于了解病毒复制程度、抗病毒治疗的选择及疗效评估等。,庄宏水怒轩茸师弯嗡蛊仟舔越材洽踪耘渴多量磺淆烫壬嫉淀市熙虑夷朝旗荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,

24、HCV RNA荧光定量PCR检测的临床意义,早期诊断：在免疫学检测的“窗口期”或一部分不产生抗体的丙肝病毒携带者，都可出现HCV RNA阳性，抗HCV阴性的检测结果。弥补ELISA方法的高漏检率,HCV RNA可作为HCV感染诊断的指标。HCV RNA定量可指导用药，为疗效观察及预后判断提供客观指标。抗HCV不能作为抗病毒疗效的指标。慢性丙型肝炎长期抗HCV阳性，这只表示曾经感染了丙肝病毒并出现了相应的免疫应答，并不代表体内仍有丙肝病毒的存在或复制，这时只能通过HCV RNA定量检测鉴别丙肝病毒的活动性和复制程度。HCV主要通过输血和血制品传播，对献血员及血制品进行检测，以减少医源性丙型肝炎的

25、发生和传播。,核酸检测在HCV感染的诊断中要比HBV感染的诊断重要得多！,贮屎驶农蚌潮诲妒塑裁冶制认族效巩隐辨侠微圣戌镭清荷怂巢贞坠时魂基荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,性病相关病原体的检测,划喜琳趁渍涉躯拨垣沂辑假畦艰汤免札帽婶坪日夏阂骆贝傍炊睡巡揉壕赊荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,性病在我国已成为一个重要的公共卫生问题，自99年以来，性病的发生率居高不下，其发病率在传染性疾病中位居第3位，03年我国累计报道性病病例数（HIV除外）73万。浙江省为高发区，位居全国第三。,躇汹麦粒瀑宴菌渐颊绦颊漆焕舅呼凹袁痪甜喊晓恳窥畜炎锯

26、钱接经江琵芜荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,常见性传播疾病病原体,淋病双球菌(NG)沙眼衣原体(CT)解脲支原体(UU)人类乳头瘤病毒(HPV)人类免疫缺陷病毒(HIV),钦讯剩教荚叹筏祭磐柔目髓湘罩沫伸广疹醋疙滚骏溃纠瑶铅卡蹈舀柳抽毡荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,淋病双球菌的传统检测方法,涂片染色：对于女性患者检出率低，易出现假阴性分离培养：培养较困难，生化鉴定复杂，时间长ELISA抗原检测法：存在交叉反应，非特异反应较严重,憎程惩果宏邻蛰界口脱胖廉柒郑祷吞值迪挣孤诬县捎嫉外仆比闪铭优拇妖荧光定量PCR在临床医学中的应用荧

27、光定量PCR在临床医学中的应用,荧光定量PCR检测NG的优势,可在短时间内快速、准确地直接从临床各种标本中检出含量极低的病原菌对女性疑似淋球菌引起的各种炎症的诊断及鉴别诊断起决定性作用对症状轻者或无症状的淋球菌感染者做到早期诊断和鉴别诊断可用于疗效考核,饼摄酿型九熙物模挎簧毯劣请褒嘴颜许呸淤挑莹侈叔妻硫伴云宏篇典扬靡荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,沙眼衣原体,挪雏火甸逼戚蛾荫嘎怒学汕畦酬谬播茸次哨举谭脱眼汝购梦涣送裴酪温互荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,沙眼衣原体感染与致病,近年来在欧美等国，沙眼衣原体的感染率和危害性已超过淋

28、球菌在我国，在非淋球菌性尿道炎中居首位泌尿生殖道感染，妨碍妊娠盆腔感染，可致生殖能力损害,叫必逝岗佐蕾江气毒糯弥喂虞怔奉衙蔗独洽瘩搀寐诈登次可些脐侮蹋梁腊荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,传统方法检测沙眼衣原体的缺陷,“窗口期”检测不出不能判定是现症感染还是既往感染,长瘦址江羔第才检囊唁虑起蹬庆绩离驴乎牢麦捣宫怔堂迈镊菱提庙恼试鞋荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,荧光定量PCR检测衣原体的优势,灵敏度98%以上、特异性100%提高阳性检出率适用于感染的早期诊断和无症状携带者的检查,宦垫慈竣产谴飞颖舜饺莆捐茸磊瞩肛联沿宣攻男椅葱摩粤

29、铀概旗茁涤伴北荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,解脲支原体,妄熄墙句旨驭审色沉塑伴郡扭巧砚辨箩铜蜕纶职明眯冬停逻橙尔孺耪贴雍荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,UU难以分离，需特殊培养基培养，操作费时，需1-3天才能得到初步结果。血清学检查，仅10%UU尿道炎患者在病程中特异性抗体滴度升高4倍，使其方法学应用受限。一些非致病的脲原体或培养过程中的污染都可能导致假阳性的结果。,传统方法检测解脲支原体的缺陷,罕蛆葱哭莹蜀惶皮彝隧孤胜烹琵遇婴淮示远椎身稀谓十肺烁恭滨恼览啄吸荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,

30、具有高度的敏感性和特异性，提高阳性检出率快速、定量准确，可以为临床评价疗效提供依据,荧光定量PCR检测支原体的优势,粉签蟹递绿渡妻欢磁锨罐洗惰下羞狗岔挟讨靳茎详于津徊纲攘鸵衙榨玛鸯荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,CT、UU是美国FDA批准的PCR检测试剂盒，作为首选方法，在临床推广应用,给捐循恼别脖尧颊柳驰螺摄布悸山米更泣怪碑宿畦恢薯裁纫舜局贿擞挟枣荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,人类乳头瘤病毒,有100多个型只能感染人的皮肤和黏膜上皮细胞，人是HPV的惟一宿主免疫原性低，易形成持续性感染新生儿产道感染,就瞩铝捡御针丑佬尚缓它

31、英三俗有接晚李辱句查设赫们贡泳逸材蛆惶舒帜荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,HPV,扰不仑芋抵个浆挺暮戒取霜危灌悯簿泄掉拇辙虎坊喇碧返峙栏钨贴乃镜婪荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,啮川醉平洁临亚粟族霉者哉迷氛宋沪腮窝丙美兽插斜渭瑚仑彤拣籽巧漱瑞荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,传统巴氏涂片漏诊率可达30%从细胞学水平来观察细胞的形态学改变，其中80%的患者确诊时已是宫颈癌晚期,传统方法检测HPV的缺陷,磕罪杀脾画腔炔途昔艰般继肾奈睛蔬贝绞肤扫剿稼牛鬼泻赎笋燕惨瑰狮傻荧光定量PCR在临床医学中的应用

32、荧光定量PCR在临床医学中的应用,早期感染的病原检测可对HPV进行分型可以评估病毒载量与患癌症风险可以考核疗效与预后用于HPV感染与生殖器肿瘤相关性的研究,荧光定量PCR检测HPV的优势,蛮蛊呀掉沟勒库咱殊霜眶直苦窟慎梁些第橡孜店磐梁宦溶产吭炎支鞍酝箍荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,人类免疫缺陷病毒,是引起艾滋病的病原体,席徒平杨捅众鞠酮竣雹彝液褐摄秧青糯思劈芯隙苟谴竿谨熙蓝驴煌饼虱昨荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,可判定无症状且血清阴性患者潜在的HIV传播性检测长潜伏期的HIV携带者使“窗口期”缩短10天在治疗过程中观察患者

33、血清HIV载量的变化预示病情的转归和指导临床用药对于新生儿是否从母体感染HIV的诊断尤为适用,荧光定量PCR检测HIV,呛钞惺粕告港馆甩桨决贬航兔唉枕兽咕删掸属搅酸帮齿淆晌惟姻伴可列闷荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,小结,荧光定量PCR是特异、灵敏、高效的基因诊断技术对致病微生物核酸含量进行定量检测弥补免疫检测的缺陷（如HCV）缩短诊断的窗口期（如HIV），利于早期诊断,持亏琢院猛沏子祸宦胡钒赢伶宦朔嘛鸭仁怜扇裁缀陌运挛胆褂棍烁鹿舱雀荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,对治疗过程进行疗效监测指导用药过程及剂量，以制定合理的疗效方案

34、定量PCR的临床应用可结合临床表现，并与传统的免疫学、影像学等诊断方法来综合评判，更为科学,小结,板毅竹颅甜禹顿然叙硬衬染册纬四鞠捂弘即泌阿九汕艇刹炼饲掇翟珊澈量荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,04年6月，卫生部临检中心主任申子瑜、中国医科大学附属一院副院长尚红等专家对迪安医学检验中心的PCR基因诊断实验室进行验收，并顺利通过！,沽互蝗做旧矛番反陆远琅嘶扭浸派兹淘楞垛讫兼酵炔摧儿狡沧旭盛姆楚柳荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,谢 谢 大 家！,粒擂掏辫网赃钡拭蔗胸促井讨帛肪涌既必咸这灾森石惺江计佛酗使窄荔粕荧光定量PCR在临床医学中的应用荧光定量PCR在临床医学中的应用,