原核微生物的形态和构造.ppt
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1、第一章,原核微生物的结构与功能,原核细胞,第一节 细菌,本节提要:细菌的形态和染色细菌细胞的一般结构细菌细胞的特殊结构细菌的繁殖和培养,一、细菌的形态和染色,(一)细菌的正常形态:,细菌的形态和染色,球菌,杆菌,螺旋菌,细菌的形态和染色,1.球菌(coccus),单球菌,双球菌,八叠球菌,四联球菌,链球菌,葡萄球菌,2.杆菌(bacillus),细菌的形态和染色,梭状芽孢杆菌,短杆菌,长杆菌,3.螺旋菌(spirilla):螺旋状的细菌。螺旋不满一圈称为弧菌(vibrio),满26环称为螺旋菌(spirllum),旋转周数在6环以上的称为螺旋体(spirochaeta)。,细菌的形态和染色,螺
2、旋菌,弧菌,螺旋体,4.细菌的特殊形态:,细菌的形态和染色,柄细菌、肾形菌、臂微菌、网格硫细菌、贝日阿托氏菌(丝状)、具有子实体的粘细菌等是特殊形态的细菌。,(二)细菌的异常形态:,.畸形:理化刺激,细菌的形态和染色,结核杆菌的异常形态:,结核杆菌的正常形态:,.衰退型:,菌细胞衰老、养分缺乏,细菌的形态和染色,(三)细菌的大小:,细菌的形态和染色,(1)测量:测微尺,(2)长度单位:微米(m),(3)表示:球菌:直径 杆菌:宽长 螺菌:宽、长、螺距,(四)染色,细菌的形态和染色,细菌染色法,死菌,活菌:用美蓝或TTC(氯化三苯基四氮唑)等,正染色,负染色:荚膜染色法等,简单染色法,鉴别染色法
3、,革兰氏染色法,抗酸染色法,芽孢染色法,姬姆萨(Giemsa)染色法,最常用染色法,单染法复染法负染法革兰氏染色,细菌的形态和染色,用一种染料进行染色,较未染色的样本易于观察。,单染色:,细菌的形态和染色,背景着色,菌体不着色,多用于荚膜的观察。,二种以上染料进行染色,有鉴定价值。如革兰氏染色、抗酸染色等。,复染法:,负染法:,细菌的鉴别染色法革兰氏染色法,C.Gram 丹麦医生步骤:涂片固定;结晶紫初染1min;碘液媒染1min;95%乙醇脱色0.5min;番红复染1min。结果:阳性菌紫色;阴性菌红色。,细菌的形态和染色,一紫二碘三脱色四复染紫为阳,红为阴,抗酸染色法,步骤:涂片固定;酸性
4、复红初染;3%醋酸酒精脱色 美蓝复染。结果:抗酸菌红色;非抗酸菌蓝色。,细菌的形态和染色,二、细菌细胞的基本结构,细菌细胞的基本结构,细菌细胞的结构:,细菌细胞的基本结构包括:细胞壁、细胞质膜、间体、细胞质、核糖体、气泡、细胞核、质粒和储藏物。特殊结构包括:荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢和伴孢晶体。,细菌细胞的基本结构,1.概念:细胞壁是位于胞外紧贴胞膜的一层无色透明,坚韧而有弹性的结构。,(一)细胞壁(cell wall):,细菌细胞的基本结构,分离:超声波、机械破碎、溶菌消化、差速离心,观察:质壁分离、电子显微镜,2.细胞壁的分离与观察,细菌细胞的基本结构,重点提示:细胞壁的基本骨架肽聚糖革兰氏阳
5、性菌的细胞壁 革兰氏阴性菌的细胞壁革兰氏染色的机理 溶菌酶与青霉素的作用,3.细胞壁的化学组成与结构,细菌细胞的基本结构,革兰氏阳性菌肽聚糖单体,概念:肽聚糖是由 N乙酰胞壁酸(NAM)和N乙酰葡糖胺(NAG)以及少数氨基酸短肽链组成的亚单位聚合而成的大分子复合体,(1)细胞壁的基本骨架肽聚糖,G和M以b-1,4-糖苷键连接,肽聚糖单体,细菌细胞的基本结构,革兰氏阳性菌肽聚糖单体,革兰氏阴性菌肽聚糖单体,由NAG、NAM、肽尾、肽桥构成,肽聚糖网格状结构:,细菌细胞的基本结构,肽聚糖的特点:,1)为原核生物所特有(古细菌例外)2)D-Glu,D-Ala,M-DAP在自然界蛋白质中不存在3)个别
6、菌中DAP可为Lys代替4)个别菌中两肽尾可直接由肽键连接,细菌细胞的基本结构,肽聚糖分子中的四种主要肽桥类型,藤黄微球菌(溶壁微球菌),E.coli,C.poinsettiae,第I种和第IV种肽桥的比较,细菌细胞的基本结构,(2)革兰氏阳性菌的细胞壁:,占3070%,不同菌种中肽聚糖(肽链)组分不同,具重要分类意义。,肽聚糖:,由肽聚糖和磷壁酸组成,磷壁酸(teichoic acid):,细菌细胞的基本结构,占40%。G+菌所特有,其主链由数十个磷酸甘油或磷酸核糖醇组成,有的还有由DAla和还原糖组成的侧链。,磷壁酸的分类:,细菌细胞的基本结构,(1)按与壁的连接方式分:,壁磷壁酸:与肽聚
7、糖分子共 价结合,并延伸到肽 聚糖分子表面,带 有负电荷。膜磷壁酸:与原生质膜的脂 类共价结合。,(2)根据主链组成不同:,细菌细胞的基本结构,甘油型核糖醇型,一般一种菌含一种磷壁酸。,磷壁酸的功能:,细菌细胞的基本结构,使细胞壁形成负电荷环境,以利于吸附镁离子,维持酶活。贮藏磷元素增强致病菌对宿主的的粘连、避免被白细胞吞噬及抗补体作用赋予革兰氏阳性细菌以特异的表面抗原可作为噬菌体的特异性吸附受体能调节细胞内自溶素的活力,借以防止细胞因自溶死亡,(3)革兰氏阴性菌的细胞壁,细菌细胞的基本结构,革兰氏阴性菌的细胞壁结构较复杂,分内壁层和外壁层。,内壁层:,细菌细胞的基本结构,紧贴胞膜,仅由12层
8、肽聚糖分子构成,占细胞壁干重5 10%,无磷壁酸。,细菌细胞的基本结构,脂多糖 蛋白质层:脂蛋白、基质蛋白、外壁蛋白;磷脂,外壁层:,位于肽聚糖层的外部。包括:,细菌细胞的基本结构,埋嵌在外壁层中,如孔蛋白,三聚体构成的疏水孔道贯穿外壁层,使小于800-900D的分子可通过,起分子筛作用。,基质蛋白:,细菌细胞的基本结构,为特异性载体,可将Vit B12这类较大分子送入细胞内,外壁蛋白:,细菌细胞的基本结构,与肽聚糖层共价结合,并埋置在外壁层,使外壁层牢固的与内壁层连接。,脂蛋白:,细菌细胞的基本结构,脂质A:两个葡糖胺连接多 个脂肪酸,为内毒素 的中心。,核心多糖:与脂质A相连,由 糖及其衍
9、生物组成。,O-侧链:短多糖链,其顺序有 菌种特异性,具有诊断 细菌学意义。,脂多糖(LPS,lipopolysaccharide):,细菌细胞的基本结构,1.G-菌致病物质内毒素的物质基础。2.与磷壁酸相似,吸附二价阳离子以提 高这些离子在细胞表面的浓度。3.由于LPS的多样性,决定G菌表面抗 原决定簇的多样性。4.噬菌体吸附位点。5.控制某些物质进出细胞的选择性屏障,脂多糖(LPS)的功能:,细菌细胞的基本结构,(4)革兰氏染色的原理,G菌:细胞壁厚,肽聚糖网状分子形成一种透性屏障,当乙醇脱色时,肽聚糖脱水而孔障缩小,故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。,G菌:肽聚糖层薄,交联松散,
10、乙醇脱色不能使其结构收缩,其脂含量高,乙醇将脂溶解,缝隙加大,结晶紫-碘复合物溶出细胞壁,沙黄复染后呈红色。,细菌细胞的基本结构,G+和G-细胞壁的对比,4.溶菌酶与青霉素的作用,细菌细胞的基本结构,溶菌酶(lysozyme):,作用于NAM的G1和NAG的C1-C4之间的糖苷键,所以又称乙酰胞壁质酶。对G-菌,在EDTA存在下,受溶菌酶作用。溶菌酶处理后的菌细胞应保存在弱高渗(0.1 0.2 M)蔗糖液中。,溶菌酶的作用过程,细菌细胞的基本结构,青霉素(penicillium):,细菌细胞的基本结构,作用于肽聚糖肽桥的联结,即抑制肽聚糖的合成,故仅对生长着的菌有效,主要是G+菌。,青霉素作用
11、位点,在溶霉菌或青霉素作用下产生细胞壁缺陷或无细胞壁的细菌。,细菌细胞的基本结构,缺壁细菌,实验室或宿主体内形成,在自然界长期进化中形成-支原体,缺壁突变-L型细菌,人工去壁,基本去尽-原生质体G+,部分去尽-球状体G-,细菌除去细胞壁剩下由细胞膜包裹的部分。多为G+菌。,细菌细胞的基本结构,a.原生质体(protoplast):,原生质体的特点:,细菌细胞的基本结构,1)无细胞壁,为圆球形2)对环境敏感:渗透压,震荡,离心,易溶菌3)有鞭毛,而不能运动4)不被噬菌体感染(因为没有吸附位点)5)生物学特性依旧,原生质体的应用:,基础研究,作为新的子实体,培育新种,固定化。,细菌细胞的基本结构,
12、b.球状体(spheroplast):,还保留有部分细胞壁的菌体细胞,多见于G菌。,细菌细胞的基本结构,特点:除具原生质体特点外a)可有一定抗性,可培养b)可重新合成细胞壁,c.L型细菌(L-form of bacteria):,自发突变形成的细胞壁缺陷(部分或全部),具多形性。可以生长繁殖,在培养基上形成油煎蛋菌落。有些可重新合成细胞壁。严格的说,L型细菌专指那些在实验室或宿主体内通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷菌株,细菌细胞的基本结构,d.支原体(Mycoplasma):,自然进化长期进化而成,细胞膜有甾醇,耐机械压力,5.细胞壁的功能:,1)保护细胞,维持菌形2)具有抗原性致病
13、性对噬菌体的敏感性3)与胞膜一起完成细胞内外物质交换4)为正常细胞分裂所必需 5)鞭毛运动的支点,细菌细胞的基本结构,6.周质空间(periplasmic space;periplasm),(1)概念:位于细胞壁与细胞膜之间的狭窄空隙,细菌细胞的基本结构,(2)周质空间的特点:,a.充满松散的网状肽聚糖b.含水解酶类c.含与营养吸收有关的蛋白质,细菌细胞的基本结构,(3)提取周质蛋白的方法,原理:突然改变渗透压并使细胞发生物理性裂解,步骤:将细菌放在用Tris缓冲液配制含EDTA的20%蔗糖溶液中保温,使其发生质壁分离,接着快速地用4oC的0.005 mol/L MgCl2溶液稀释并降温,使细
14、胞外膜突然破裂并释放出周质蛋白,表3-2非常重要,渗透休克法或冷休克法,G+和G-细菌某些特性的比较,7.古生菌的细胞壁,蛋白质细胞壁 少数甲烷菌,假肽聚糖细胞壁 甲烷杆菌菌,独特多糖细胞壁 甲烷八叠球菌属,硫酸化多糖细胞壁 盐球菌属,糖蛋白细胞壁 盐杆菌属,N-乙酰葡糖胺和N-乙酰塔罗胺糖醛酸以1,3糖苷键形成;肽尾由L-Glu、L-Ala和L-Lys组成,肽桥由L-Glu组成,G+,多含半乳糖胺、葡糖醛酸、葡萄糖和乙酸,无磷酸和硫酸,含葡萄糖、甘露糖、半乳糖和它们的氨基糖及糖醛酸和乙酸CV,糖蛋白组成,包括葡萄糖、葡糖胺、甘露糖、核糖和阿拉伯糖;蛋白部分由酸性氨基酸组成如Asp,可平衡Na
15、+,不同蛋白质或同种蛋白的许多亚基组成,(二)细胞膜(cell membrane),细菌细胞的基本结构,1.概念:细胞膜是紧贴细胞壁内侧包围细胞质的一层柔软,富有弹性的半透明薄膜。,2.观察分离方法,细菌细胞的基本结构,(1)质壁分离(2)选择性染色(3)电镜技术(4)溶菌酶处理,3.细胞膜的化学组成,4.细胞膜的结构,细菌细胞的基本结构,1972年Singer和Nicolson提出的细胞膜液态镶嵌模型。,5.细胞膜的功能:,(1)细胞内外物质交换和运送(2)维持细胞内正常渗透压的屏障(3)在原核微生物中,参与生物氧化和 能量产生(3)与细胞壁及荚膜的合成有关(4)是鞭毛着生的位点,细菌细胞的
16、基本结构,6.内膜系统:膜内陷并延伸到细胞质内,在繁殖和代谢多种过程中起作用,细菌细胞的基本结构,间体(mesosome):细胞膜内褶形成的一种管状、层状或串状物,一般位于细胞分裂的部位或附近。多见于G+菌,间体的功能:,(1)参与隔膜形成(2)与核分裂有关(3)类线粒体功能,细菌细胞的基本结构,表层:与酶如青霉素的分泌有关深层:与DNA的复制、分配以及细胞分裂有关,载色体:,光合细菌光合作用部位,单层与细胞膜相连的内膜环绕,含色素、光合磷酸化所需酶系和电子递体。,细菌细胞的基本结构,(三)核质体(nuclear body;nucleoid),1.概念:由大型环状双DNA纤丝构成的无核膜核仁的
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- 微生物 形态 构造
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