硕士论文血浆OPN和TAT水平检测在非小细胞肺癌中的临床意义.doc
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1、宁夏医科大学硕士研究生学位论文血浆OPN和TAT水平检测在非小细胞肺癌中的临床意义研究生姓名: 指导教师: 研究方向: 学科专业:呼吸内科论文完成日期:二一年三月Ningxia Medical universityThesis for Application of Mas ter DegreePlasma levels of TAT and OPN in Non-small Cell Lung CancerStudent Name:Director:Specialty: lung cancerMajor:Respiratory MedicineFinish Date:Apr. 2010宁夏医科
2、大学硕士研究生学位论文 目录目录中文摘要Abstract符号说明前言血浆OPN和TAT水平检测在非小细胞肺癌中的临床意义材料与方法结果结论讨论参考文献发表论文和参加科研情况说明综述血浆OPN和TAT水平检测在非小细胞肺癌中的临床意义综述参考文献致谢壹宁夏医科大学硕士研究生学位论文 摘要血浆OPN和TAT水平检测在非小细胞肺癌中的临床意义摘要肺癌(Lung cancer)是全世界最常见的恶性肿瘤之一,其中以非小细胞肺癌(NSCLC Non-small Cell Lung Cancer )为主要病理类型,占到80%。患者常伴有凝血异常,分期是判断预后的主要指标之一,研究表明,OPN(骨桥蛋白)在多
3、种恶性肿瘤如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌等组织表达及血浆水平均有增高,并且对判断肿瘤的浸润、转移和预后,指导临床诊断和治疗有重要意义。 而被凝血酶裂解的OPN生物性能会有所改变,在肿瘤组织表达会更加明显。上述报道大多局限在对肿瘤组织的研究,而联合检测外周血中OPN、TAT含量与肿瘤的关系,尤其在肺癌诊治中的应用研究报道较少。而检测外周血中的OPN、TAT具有简单、快捷和无创的优点。本研究通过检测外周血中的OPN、TAT水平,探讨两者在非小细胞肺癌的诊断、治疗、预后判断中的作用。目的:通过检测骨桥蛋白(OPN)、凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)在非小细胞肺癌(NSCLC)血浆中水平的并将二者进行相
4、关性分析,探讨二者在非小细胞肺癌(NSCLC)临床意义。方法::收集临床确诊的46例NSCLC、22例肺部良性病变患者及20例健康体检者血浆,采用酶联免疫吸附测定法(ELASA)检测NSCLC患者及对照组的血浆OPN及TAT 水平,并应用 SPSS11.5统计学软件进行统计学分析,对各组数据进行差异性比较和相关性分析。结果:(1)OPN在NSCLC血浆水平明显高于肺部良性病变患者及健康体检者(p=0.017,t=7.376);TAT在NSCLC血浆水平明显高于肺部良性病变患者及健康体检者(p=0.000,t=15.885);(2)OPN、TAT血浆水平在肺部良性病变患者及健康体检者之间对比,差
5、异无统计学意义(P0.05);(3)OPN、 TAT血浆水平与肺癌分期、远处转移明显相关,而与性别、年龄、病理类型无关;(4) NSCLC患者 OPN、 TAT血浆水平呈正相关(r=0.502,p 0.05); (3) OPN, TAT plasma levels and lung cancer staging, distant metastasis significantly related, but not related with gender, age, pathological type ; (4) NSCLC patients with OPN, TAT plasma levels
6、 were positively correlated (r = 0.502, p 0.05). Conclusions: (1) in peripheral blood levels of OPN and the TAT to reflect the bodys tumor burden in patients with NSCLC state; (2) NSCLC patients with peripheral blood levels of OPN and the TAT and gastric cancer invasion, metastasis; (3) OPN, and TAT
7、 NSCLC may be the occurrence and development play a synergistic role in the process; (4) detection in peripheral blood OPN, TAT, in particular the joint detection of two pairs of NSCLC diagnosis, treatment and prognosis have some clinical significance. TAT, OPN can be used as indicators of NSCLC sta
8、ging and transfer. And the two may occur in the development of NSCLC has a synergistic effect.Key words thrombin-antithrombin complex (TAT); osteopontin (OPN); plasma; non-small cell lung cancer (NSCLC); enzyme-linked immunosorbent assay (ELASA)V宁夏医科大学硕士研究生学位论文 英文缩略词表英文缩略词表英文缩写 英文全称 中文全称TAT thrombin
9、-antithrombin complex 凝血酶抗凝血酶复合物OPN osteopontin 骨桥蛋白 NSCLC Non-small Cell Lung Cancer 非小细胞肺癌ELASA enzyme一linkedimmunosorbentassay 酶联免疫吸附测定4宁夏医科大学硕士研究生学位论文 前言前 言近半个世纪以来,肺癌在恶性肿瘤中已居首位,统计显示,目前肺癌的发病率和死亡率在全球范围内均居首位,每年世界范围内诊断的新病例超过了50万例,其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占所有肺癌的80%85%。患者5年生存率低于15%,早期发现难、恶性程度高、病程进展快。卫生部2008年4月
10、29日公布的第三次全国居民死亡原因调查结果显示,过去30年间,肺癌死亡率在中国上升了465%,肺癌已取代肝癌成为中国首位恶性肿瘤死亡原因。加强肺癌的基础和临床研究,将有助于肺癌的预防和治疗,对降低其发病率和死亡率,提高人们的生活质量有重要的意义。影响肺癌预后的因素多达百余种,在众多因素中有主要因素和次要因素,而肺癌的TNM分期其中一主要因素,近年来,对影响肺癌预后的单因素和多因素分析提示肺癌的TNM分期是影响预后的主要独立因素。大部分肺癌患者死亡的原因并不是原发灶本身,而是肿瘤的浸润、转移和复发所致,原发灶转移一直是影响肿瘤临床疗效的主要因素。近年来的分子生物学研究表明,肿瘤的侵袭、转移和复发
11、也是一个多基因参与、多阶段演进的极其复杂的生物学过程。这个过程包括癌组织在浸润转移前进行细胞自身的黏附解除,癌细胞黏附于基质,癌细胞释放蛋白水解酶降解基质,癌细胞移行,癌细胞浸入血管和淋巴管发生远处转移的步骤。近年来,恶性肿瘤与止血凝血功能和纤溶活性的相互关系日益受到重视。肿瘤细胞可直接或间接地影响血液凝固,导致血液凝固性增高或出血倾向,而止血凝血功能和纤溶活性的改变也可影响肿瘤细胞的表型和活性,从而使肿瘤细胞在局部增殖、浸润甚至向其他部位转移1。凝血酶(thrombin)最为人们熟知的是它是一种重要的凝血因子,在血栓形成、血管损伤、炎症、组织损伤修复方面起重要作用;它还能够引起血小板聚集、内
12、皮细胞分泌细胞因子、纤维母细胞和平滑肌细胞增殖等细胞反应。此外,凝血酶还能够激活正常及恶性细胞的致瘤潜能,并能导致转移表型的出现2。生理或病理情况下,凝血酶原裂解生成凝血酶,很快被抗凝血酶所中和,故很难直接检测凝血酶的含量,而凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)可作为凝血酶早期形成的分子标志物之一。骨桥蛋白(osteopotin,OPN),是一种分泌型磷酸化糖蛋白,它是细胞外基质(extracllullar matrix,ECM)中的一种非胶原蛋白,能促进细胞的粘附、趋化和迁移,因而在骨组织矿化、细胞粘附、信号转导、细胞免疫、血管再塑等方面具有多种生物功能。近年来的研究表明,多种类型的肿瘤细胞在体内
13、、外均产生OPN参与肿瘤发展的多个环节,在不同的恶性肿瘤转移形成过程中发挥重要作用3。OPN的受体家族包括整合素受体和CD44受体。整合素受体包括av3、av5、a91、a41等。正常情况下,OPN主要与CD44受体结合,通过与一些整合素受体和CD44受体结合,从而促进细胞的趋化、黏附和迁移,参与骨的吸收和形成4。近年研究发现,OPN在许多肿瘤组织中高表达,如肝癌、肺癌、乳腺癌及头颈部肿瘤中等,其在原发肿瘤及其转移瘤组织中的均有表达上调,提示OPN在肿瘤的发生发展、侵袭转移、肿瘤血管生成及抑制凋亡中具有一定作用5。研究发现 ,凝血酶与OPN的化学结构存在一定关系,不同OPN结构如全长OPN、被
14、凝血酶裂解后的OPN、磷酸化或非磷酸化形式等使OPN功能不同。经凝血酶裂解OPN N端片段与整合素结合能力比完整OPN强。我们以此为依据,通过ELASA法观察二者在非小细胞肺癌发生发展中的作用。宁夏医科大学硕士研究生学位论文 材料与方法材料与方法1 材料1.1资料来源1.1.1实验对象NSCLC组: 收集2008年11月-2009年9月宁医附属医院胸外科及呼吸科经病理确诊的非小细胞肺癌患者共46例,鳞癌21例,腺癌25例,年龄20-76岁,男28例,女18例。正常对照组: 来自宁医附属医院体检中心的健康查体者,共收集20例,其中男性5例,女性15例,平均年龄48士6(22一67)岁,且与NSC
15、LC组在年龄及性别上差异无统计学意义。良性肺部病变组22例良性肺部病变患者(4例结核球、4例支扩、4例错构瘤、3例肺囊肿、3例炎性假瘤、2例硬化性血管瘤、1例良性乳头瘤、1例平滑肌瘤),与NSCLC组在年龄及性别上差异无统计学意义。1.1.2 肺癌分期标准:1997年国际抗癌联盟TNM分期1.1.3病例纳入标准(1)临床病理诊断明确的非小细胞癌患者(2)良性病变组为外科手术病理学检查证实的患者(3)年龄在20-80岁之间1.1.4病例排除标准(1)有严重的心、肝、肾功能障碍或其他重要脏器功能衰竭者(2)血液系统疾病及血栓栓塞性疾病患者(3)肾结石患者(4)风湿性疾病及免疫性疾病(5)孕妇(6)
16、已接受手术及放化疗和输血的患者(7)不符合纳入标准,资料不全的患者1.2实验仪器SYNYO低温冰箱:日本SYNYO公司;L05-2A型离心机:北京产;WS2-261-73电热恒温隔水式培养箱:上海产;EL-800酶标仪:PE公司;打印机:惠普公司;高精度加样器及吸头(1000,100,50):若干;37恒温箱; 可调多道移液器(50一200pL);供可调多道移液器使用的试剂存放槽1.3实验试剂OPN ELASA试剂盒购于日本IBL公司,TAT ELASA试剂盒购于美国Assayproy公司。2实验方法2.1技术路线技术路线非小细胞肺癌组(46例)肺部良性病变组(22例)健康对照组(20例)抽取
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