动物营养博士考题汇总.doc

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1、蛋白质分子构象（conformation）：又称高级结构或空间结构，是指蛋白质分子中所有的原子在三维空间中的分布。Tm值：DNA熔解温度，指把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度。DNA损伤：是复制过程中发生的DNA核苷酸序列永久性改变，并导致遗传特征改变的现象。分为: substitutation (替换) deletion (删除) insertion (插入) exon skipping (外显子跳跃)。核酸杂交（nucleic acid hybridization）：相同或不同来源的二个DNA分子、或DNA和RNA分子，如果含有彼此互补的序列，混合在一起，通过变性和复性处理，DNA-RN

2、A同源序列间及DNA-RNA异源序列间都可形成DNA-RNA或DNA-RNA杂交体，称为核酸分子杂交。别构调节（allosteric regulation）：一些代谢分子，包括底物、中间产物和终产物，不直接作用于酶的活性中心，而以非共价键结合活性中心以外的别构部位（allosteric site），通过构象的变化而改变酶的活性，这种调节称为酶的别构调节。转录因子：结合在TATA盒子附近核苷酸序列上的蛋白因子转录调控因子：结合在上游特异核苷酸序列上的蛋白因子。DNA变性（DNA denaturation）：指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象分子伴侣（molecular ch

3、aperone）：一类在序列上没有相关性但有共同功能的蛋白质，它们在细胞内帮助其他含多肽的结构完成正确的组装，而且在组装完毕后与之分离，不构成这些蛋白质结构执行功能时的组份hnRNA（heterogeneous nuclear RNA）：不均一核RNA，存在于真核生物中的一类RNA，其分子大小很不均已，是真核mRNA前体。蛋白质结构层次：一级结构（primary structure）：多肽链中氨基酸的排列顺序，包括多肽链数目，每一条多肽链中末端氨基酸种类，每一条多肽链中氨基酸的数目、种类和排列顺序、链内和链间二硫键的位置和数目；二级结构(secondary structure)指多肽链主链骨架

4、全部或部分按一定规律排列形成的空间结构，它不涉及侧链构象，包括-螺旋、-折叠和转角等；超二级结构（super secondary structure）蛋白质中经常存在由若干相邻的二级结构单元按一定规律组合在一起，形成在空间上可彼此区别的结构单位；结构域（structure domain）是指在蛋白质结构中，一条多肽链上常常存在一些紧密的、相对独立的区域，是在二级或超二级结构基础上形成的特定区域；三级结构（tertiary structure）具有特定氨基酸序列的多肽链，在形成空间构象时，通常是先由相邻的氨基酸残基形成一些有规则的结构单元，并由相邻的二级结构聚集形成超二级结构，进而折叠成一些相对

5、独立的结构域，最有构建成完整的、具有生物活性的构象，其中每一个原子或基团都有特定的空间排布，这种构象称为蛋白质三级结构；亚基（subunit）相对分子质量较大的球状蛋白分子往往是由两条或多条肽链通过非共价键连接形成的，其中每一条独有独立的三级结构，称为亚基；四级结构（quaternary structure）各亚基间相互作用并组成具有生物活性的特定构象。SDS-PAGE的原理和特点：SDS是一种阴离子去污剂，能以一定的比例和蛋白质结合，形成一种SDS-蛋白质复合物。此复合物可用具有SDS的PAGE进行分离，统称称这种电泳为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。PAGE能有效地把不同类

6、型的蛋白质分开，主要依据是各种物质的电荷和相对分子质量的差异，而SDS-PAGE则是根据各种蛋白质相对分子质量的不同进行分离的。电泳前，在蛋白质溶液中加入SDS和巯基乙醇进行热变性，巯基乙醇即使蛋白质分子中的二硫键还原，SDS破坏蛋白质亚基间的非共价键，使含有亚基的蛋白质解离成各个亚基。由于SDS带有较强的负电荷，使SDS-蛋白质复合物大大超过天然蛋白原有的电荷，从而消除或掩盖了不同种类蛋白质分子原有电荷的差异。并且SDS与蛋白质结合后，引起蛋白质构象的变化，在水溶液中都变成长椭圆形，其短轴长度都为1.8nm左右，而长轴长度则与蛋白质相对分子质量成正比，故SDS-PAGE中泳动率不再受其原有电

7、荷和分子性状的影响，而只决定于相对分子质量。故该法测得的只是亚基或单条肽链的相对分子质量，而不是完整蛋白的相对分子质量，因此长被用来判定相对分子质量大小的均一性，检测有无杂蛋白、宿主细胞蛋白、聚合体污染以及亲核层析中生物分子配基脱落等。简述酶活性抑制的类型：主要有两种类型（不可逆抑制和可逆抑制），其中不可逆抑制包括：专一性（选择性）抑制和非选择性抑制，可逆抑制包括：竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制和混合型抑制。（知识点扩展 专非专一性的不可逆抑制作用 抑制剂作用于酶蛋白分子中一类或几类基团，对酶不表现专一性；专一性的不可逆抑制作用 抑制剂只对某类或某一个酶起作用，这类抑制剂叫做专一性的不

8、可逆抑制剂；竞争性抑制competitive inhibition：由于抑制剂I和底物S结构相似，因此可竞争性结合于酶活性中心同一结合部位，而且是非此即彼完全排斥的反应；非竞争性抑制noncompetitive inhibition：底物S和抑制剂I与酶结合互不相关，既无竞争性，也无先后次序，两者都可以与酶及相应中间复合物（EI或ES）结合，但形成的三元复合物（ESI或EIS相同）不能再分解；反竞争性抑制uncompetivive inhibition：抑制剂I只能与酶-底物复合物ES结合形成无活性的三元复合物ESI，而不能与游离酶E结合的一类反应；混合型抑制：一些介于竞争性和非竞争之间的抑制

9、作用通常称为混合性抑制作用，即E或ES结合I的亲和力，以及E或EI结合S的亲和力都不相当时，就是混合型抑制。）真核生物启动子特点：真核生物中有三种不同的RNA聚合酶，因此也有三种不同的启动子，其中以启动子最为复杂。具有如下特点：（1）有多种元件：TATA框、GC框、CAAT框等；（2）结构不恒定。有的有多种框盒如组蛋白H2B；有的只有TATA框和GC框，如SV40早期转录蛋白，（3）它们的位置、序列、距离和方向都不完全相同，（4）有的有远距离的调控元件存在，如增强子；（5）这些元件常常起到控制转录效率和选择起始位点的作用；（6）不直接和RNA pol结合。转录时先和其它转录激活因子相结合，再和

10、聚合酶结合。原核生物启动子特点：原核生物启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成，对mRNA的合成极为重要。启动子区域：（1）Pribnow盒，位于转录起始位点上游510bp，一般由68个碱基组成，富含A和T，故又称为TATA盒或10区。启动子来源不同，Pribnow盒的碱基顺序稍有变化。 （2）35区，位于转录起始位点上游35bp处，故称35区，一般由10个碱基组成。这是与真核生物中CAAT区相对应的序列。蛋白质超二级结构(super secondary structure)：蛋白质中经常存在由若干相邻的二级结构单元按一定规律组合在一起，形成空间上可彼此区别的结构单元。分子识别(m

11、olecular recognition)：指蛋白质与蛋白质、核酸、脂等分子之间特异性辨认。分子自装配(self-assembly)：把某些病毒（如烟草花叶病毒）或细胞器解离成蛋白质、核酸等组分后，这些组分在体外生理条件下能自动装备成具有功能的病毒或细胞器碎片的现象。二硫键（disulfide bond）：是由两个半胱氨酸借助两个硫原子形成的一种比较稳定的共价键，可存在于一条肽链的内部或两条肽链之间，对蛋白质构象起重要作用。透析（dialysis）：通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。盐析：一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低

12、而析出的过程。蛋白质分子盐析：向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析。酶的化学修饰（chemical modification）：酶蛋白肽链上某些残基，在另一种酶的催化下发生可逆共价修饰，从而引起酶活性的改变的过程。反竞争性抑制（uncompetivive inhibition）：抑制剂只与酶-底物复合物结合，而不与游离酶结合的一种酶促反应抑制作用。关键酶：代谢途径中决定反应的速度和方向的酶称为关键酶。它有三个特点：1、它催化的反应速度最慢，所以又称限速酶。其活性决定代谢的总速度。2、它常常催化单向反应，其活性能决定代谢的方向。3、它常常受多种

13、效应剂的调节。同工酶：广义是指生物体内催化相同反应而分子结构不同的酶。定向效应（orientation effect）：指底物的反应基团和催化基团之间或底物的反应基团之间正确地取向所产生的效应。临近效应（approximation effect）：指酶由于具有与底物较高的亲和力，从而使游离的底物集中于酶分子表面的活性中心区域，使活性中心的底物有效浓度得以极大地提高，并同时使反应基团之间互相靠近，增加亲核攻击机会，从而使自由碰撞机率增加，提高反应速度。负超螺旋：两股以右旋方向缠绕的螺旋在外力向松缠的方向捻转时，产生一个右旋的超螺旋以解除外力捻转造成的胁迫。这样形成的超螺旋为负超螺旋。点突变：由于

14、剪辑突变使某一氨基酸的密码子变成另一氨基酸的密码子的突变。移码突变：是由于基因中碱基数缺失或插入，造成这一位置以后的一系列或部分编码发生移位错误的突变。问答题：蛋白质高级结构维持：蛋白质特定构象主要是通过化学键维持，这些化学键主要为非共价键，包括：氢键、范德华力、疏水作用力、离子键、配位键和二硫键。它们在蛋白质构象中发挥的作用有所不同，键能高的化学键可保证肽链构象的稳定性，而弱的化学键可使肽链构象有一定的灵活性。球蛋白分子特征：（1）球状蛋白的多肽链往往借助各种结构单元、超二级结构等折叠成紧密的球状构象；（2）球状蛋白分子中的非极性侧链一般存在于分子内部的疏水区域，大多数极性侧链位于分子表面，

15、形成亲水区；（3）球状蛋白分子分子表面往往有内陷的、通常为疏水性的空穴，这类空穴可作为蛋白质与其他分子进行识别或结合的关键部位，参与蛋白质的多种功能；（4）同类球状蛋白质分子，具有基本相同的三级结构特征，不同种类的球状蛋白分子，具有完全不同的三级结构特征，这是球状蛋白分子结构的专一性。Km生物学意义：（1）鉴别酶的最适底物 Km值的大小，可以近似地表示酶和底物的亲和力。Km值大，意味着酶和底物的亲和力小，反之则大；（2）判断在细胞内酶的活性是否受底物抑制 如果测得离体酶Km值远低于细胞内的底物浓度，而反应速度没有明显变化，则表明改酶在细胞内长处于被底物所饱和的状态，底物浓度的稍许变化不会引起反

16、应速度有意义改变，反之，如果酶的Km值大于底物浓度，则反应速度对底物浓度变化就有十分敏感；（3）催化可逆反应的酶，当正反应和逆反应Km值不同时，Km值小的底物所示的反应方向，应是改酶的催化的优势方向；（4）多酶催化的连锁反应，如能确定各种酶Km及相应底物浓度，有助于寻找代谢过程的限速步骤。在各底物浓度相似时，Km值大的酶则为限速酶；（5）由于存在Km值不同而功能相同的酶，从而发现同工酶；（6）测定不同抑制剂对某个酶Km值及Vmax的影响，可以区别改抑制剂是竞争性抑制剂还是非竞争性抑制剂；（7）为了鉴定不同菌株来源的天冬酰胺酶对治疗白血病的疗效，可以测定不同菌株的天冬酰胺酶对天冬酰胺的Km值，从

17、中选用Km值较小的酶，这不仅是评价要用酶的理论基础之一，也是选用要用酶来源的依据。酶活性中心：在酶分子上，不是全部氨基酸，而只是少数氨基酸残基与酶的活性有直接关系，这些相关的氨基酸，一般较集中在酶分子的一个特定区域，这个区域即为酶的活性中心，是酶蛋白的催化结构域中与底物结合并发挥催化作用的部位，包括催化基团和底物结合基团。DNA结构层次：包括DNA一级、二级、三级结构，一级结构是：四种脱氧单核苷酸按照一定的方式、数量和排列顺序而形成的多核苷酸；二级结构：是指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成的双螺旋结构，包括左手螺旋、右手螺旋；三级结构：是指DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的构象，包括线性双链中

18、的扭结、超螺旋、多重螺旋、分子内部单链环和环状DNA中的超螺旋及连环等拓扑结构DNA和RNA结构和功能区别：mRNA特征：mRNA是蛋白质合成模板，其种类很多、含量少、寿命短，一级结构亦是多核苷酸链。原核生物mRNA特征：半衰期短、许多原核生物mRNA以多顺反子形成存在、5 端无帽子结构，3端没有或之忧较短的多聚（A）结构、常以AUG（有时GUG，甚至UUG）作为起始密码子；真核生物mRNA特征：单顺反子形式存在、5端存在“帽子”结构、具有多聚（A）尾巴。EF-TuTs循环：当完整的核糖体在起始密码子上形成以后，P位已被起始tRNA所充满，而A位仍空着。根据密码子与反密码子之间的相互作用，相应

19、的氨基酰-tRNA可以进入到A位。这一过程需要延伸因子EF-Tu和EF-Ts以及GTP的参与。EF-Tu首先与GTP结合，再与氨基酰-tRNA形成三元复合物。只有这样的复合物才能进入A位，一旦进入A位后，GTP立即水解成GDP，EF-TuGDP二元复合物解离下来。此时EF-Tu不能直接与GTP或氨基酰-tRNA结合，而是EF-Ts先置换EF-TuGDP复合物中的GDP，然后再形成EF-TuGTP，从而引入下一个氨基酰-tRNA，这一过程成为EF-TuTs循环。MicroRNA：减色效应（hypochromic effect）：DNA复性时，其紫外吸收值降低的现象。增色效应（hyperchrom

20、ic effect）：DNA变性后，其理化性质发生很大变化，如在260nm处紫外吸收值增高的现象成为增色效应RNA编辑（RNA editing）：是在RNA分子上出现的一种修饰现象，主要指mRNA在转录后因插入、缺失或核苷酸的替换，改变了DNA模板来源的遗传信息，从而翻译出氨基酸序列不同的多种蛋白质，编辑结果不仅扩大了遗传信息，也可能是生物适应的一种保护措施。端粒（Telomeres）：是染色体末端的DNA重复序列，在正常人体细胞中，可随着细胞分裂而逐渐缩短。端粒酶（telomerase）：是一只哦那个核糖核蛋白酶，是一种特殊的DNA聚合酶，属于一种反转录酶，它是由RNA和蛋白质组分构成，以脱

21、氧核糖核苷酸为产物，已酶分子中的RNA亚单位中的一段序列为模板，延伸染色体3端，解决通常DNA复制时引起的末端隐缩。蛋白质一级结构和功能关系：（1）一级结构是空间构象的基础 蛋白质一级结构决定空间构象，即一级结构是高级结构形成的基础。只有具有高级结构的蛋白质才能表现生物学功能，实际上很多蛋白质的一级结构并不是决定蛋白质空间构象的唯一因素，除一级结构、溶液环境外，大多数蛋白质的正确折叠还需要其他分子的帮助。这些参与新生肽折叠的分子，一类是分子伴侣，一类是折叠酶。（2）一级结构是功能的基础 一级结构像是的多肽或蛋白质，其空间构象和功能也相似。相似的一级结构具有相似的功能，不同的结构具有不同的功能，

22、即一级结构决定生物学功能；（3）蛋白质一级结构的种属差异与分子进化 从蛋白质氨基酸的序列可以了解到重要的生物进化信息。对不同生物体的同源蛋白质一级结构的比较研究，发现它们之间在氨基酸组成和顺序上有许多不同，即有种属差异。一级结构的种属差异可用以衡量生物进化历程。从不同种属的蛋白质一级结构的氨基酸变异系数和替换速度，可了解种属间的亲缘关系，亲缘关系愈近，氨基酸差异就愈少；（4）同源蛋白质一级结构与分子病 同种生物源的一种蛋白质，有时存在两种或两种以上的形式，它们的氨基酸序列差异往往很细微，通常之忧一二个氨基酸残基或其他基团的差别，着重微观差异在某些情况下可引起功能的明显变化，有时甚至可能引起疾病

23、的发生，如分子病，如血红蛋白病，异常的血红蛋白是由于基因突变的结果，基因突变引起血红的那白一级结构的改变，主要表现在血红蛋白多肽的某一氨基酸被取代等。蛋白质分离提纯后，有哪些检测其提纯质量的方法：主要有电泳法、免疫法、高效液相层析、分光光度法以及超速离心法等，其中电泳法包括：醋酸纤维薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳、印记转移电泳。聚丙烯酰胺凝胶等点聚焦、双向聚丙烯酰胺凝胶电泳及毛细管电泳；免疫法包括：免疫扩散、免疫电泳、酶联免疫吸附及免疫印记等。酶化学修饰调节的意义：（1）绝大多数修饰调节酶具有无活性（或低活性）与有活性（或高活性）的两种形式

24、。它们互变反应中正逆两个方向由不同的酶所催化（底物循环）。催化互变反应的酶受激素等调节因素的调控；（2）此种酶促反应常是级联反应。如果某激素或其他修饰因子使第一个酶发生酶促共价修饰后，被修饰的酶又可对话另一种酶分子发生共价修饰，每修饰一次，就可将调节因子的信号再放大一次，从而出现级联式的放大作用，故此种调节方式效率极高；（3）酶磷酸化是最常见的酶促共价修饰反应，1分子亚基发生一次磷酸化修饰，通常消耗1分子ATP，与酶蛋白合成相比，消耗ATP要少很多，且作用迅速，故是生物体调节酶活性经济而有效的方式；（4）化学修饰调节肠与别构调节相互协作，更增强了调节因子的作用。一些别构酶也是化学修饰酶，如磷酸

25、化没、糖原合成酶等均兼有中两类调节酶的特性，可以同时受这来那个钟调节方式的双重调节。这双重调节的意义还在于别构调节是细胞的基本调节机制，对于维持代谢物和能量的平衡是很重要的，但当别构调节效应剂浓度很低，而不能发挥足够的调节作用时，在应激等情况下，少量激素的释放，即可通过化学修饰反应，引起有效酶活性的迅速改变并引起相应的生理效应；（5）酶的化学修饰是体内快速调节的另一种方式，也是生物体内一种普遍的调节费那个是。就蛋白质（或酶）磷酸化/托磷酸化而言，几乎涉及所有的生理和病理过程。如糖代谢、细胞生长和发育、光合作用、基因表达、神经递质的合成与释放等，在细胞转导过程中占有极其重要的地位。就调节对象而言

26、，可以是酶类、功能蛋白、结构蛋白及各种受体等。DNA双螺旋结构特征及其多态性：(1)主链(backbone)：由脱氧核糖和磷酸基通过酯键交替连接而成。主链有二条,它们似麻花状绕一共同轴心以右手方向盘旋, 相互平行而走向相反形成双螺旋构型。主链处于螺旋的外则,这正好解释了由糖和磷酸构成的主链的亲水性。 所谓双螺旋就是针对二条主链的形状而言的。 (2)碱基对(base pair)：碱基位于螺旋的内则,它们以垂直于螺旋轴的取向通过糖苷键与主链糖基相连。同一平面的碱基在二条主链间形成碱基对。配对碱基总是A与T和G与C。碱基对以氢键维系，A与T 间形成两个氢键。 DNA结构中的碱基对与Chatgaff的

27、发现正好相符。从立体化学的角度看,只有嘌呤与嘧啶间配对才能满足螺旋对于碱基对空间的要求, 而这二种碱基对的几何大小又十分相近,具备了形成氢键的适宜键长和键角条件。每对碱基处于各自自身的平面上，但螺旋周期内的各碱基对平面的取向均不同。碱基对具有二次旋转对称性的特征，即碱基旋转180并不影响双螺旋的对称性。 也就是说双螺旋结构在满足二条链碱基互补的前提下，DNA的一级结构产并不受限制。这一特征能很好的阐明DNA作为遗传信息载体在生物界的普遍意义。 (3)大沟和小沟：大沟和小沟分别指双螺旋表面凹下去的较大沟槽和较小沟槽。小沟位于双螺旋的互补链之间,而大沟位于相毗邻的双股之间。这是由于连接于两条主链糖

28、基上的配对碱基并非直接相对, 从而使得在主链间沿螺旋形成空隙不等的大沟和小沟。 在大沟和小沟内的碱基对中的N 和O 原子朝向分子表面。 (4)结构参数：螺旋直径2nm；螺旋周期包含10对碱基；螺距3.4nm；相邻碱基对平面的间距0.34nm。除B-DNA外，人们还发现了在不同条件下存在不同双螺旋结构，如A、A、B、a-B、-B、C、C、C、D、E和Z-DNA等，显示DNA双螺旋基本结构的多态性。中心法则的内容？有哪些现象不能用中心法则来解释？：中心法则：是指遗传信息从DNA传递给RNA，再从RNA传递给蛋白质，即完成遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DNA传递给DNA，即完成DNA的复制过程

29、。这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。在某些病毒中的RNA自我复制（如烟草花叶病毒等）和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程（某些致癌病毒）是对中心法则的补充。RNA的自我复制和逆转录过程，在病毒单独存在时是不能进行的，只有寄生到寄主细胞中后才发生。选择性剪接（alternative splicing）：高等真核细胞中来自一个基因的mRNA前体分子中一般不止一个内含子，因此某个内含子5的供点又可以在特定条件下与另一个内含子的受点进行剪接，从而同时删除这两个内含子及其中间的全部外显子或内含子，这种按不同方式对mRNA进行的剪接车呢个为选择性剪接或可变剪接。限制性酶切图谱（restr

30、iction map）：又称DNA物理图谱，是指某种DNA分子的限制性酶切位点数目、片段长度和排列顺序的图谱。乳糖操纵子模型主要内容：（1）Z（-半乳糖苷酶）、Y（-半乳糖苷透性酶）、A（硫代半乳糖苷转乙酰基酶）基因的产物由一条多顺贩子的mRNA分子所编码、（2）该mRNA分子的启动子区（P）位于阻遏基因（I）与操纵区（O）之间，不能单独起始半乳糖苷酶和透性酶基因的高效表达；（3）操纵区是DNA上的一小段序列（仅为26bp），是阻遏物的结合位点；（4）当阻遏物与操纵区相结合，lacmRNA的转录起始受到抑制；（5）诱导物通过与阻遏物结合，改变它的三维构象，使之不能与操纵区相结合，从而激发lac

31、mRNA的合成，这就是说，有诱导物存在时，操纵区没有被阻遏物占据，所以启动子能够顺利起始mRNA的转录。（6）葡萄糖对乳糖操纵子的调控正调控系统，在含葡萄糖和乳糖的培养基中，大肠杆菌首先利用葡萄糖，用完了葡萄糖周，生长慢下来，激活乳糖操纵子，从而利用乳糖继续生长，这是一种转录激活过程，当葡萄糖水平降低时，通过细胞内cAMP来实现控制。cAMP水平受细菌葡萄糖代谢状态的影响。当细胞内葡萄糖含量高时，大肠杆菌细胞cAMP水平低。腺干算环化酶对细胞内葡萄糖分解代谢的某种中间产物的含量敏感；因此此调节过程的名称是分解代谢产物激活。当葡萄糖水平低时，cAMP水平升高，通过与一种蛋白质作用引发乳糖操纵子激

32、活，这中蛋白质是cAMP受体蛋白（cAMP receptor protein，CRP）。与cAMP结合时，其构象改变。这中改变就极大地增加了与特定DNA位点的亲和力。色氨酸操纵子模型主要内容：（1）色氨酸操纵子含5个连在一块的结构基因（trpE、trpD、trpC、trpB、trpA），这些基因的转录都由一共同的启动子（操纵基因调节区控制）；（2）trp阻抑蛋白含有螺旋-转角-螺旋基序，由不相连的基因trpR编码；（3）trp浓度低时，不与trp结合的阻抑蛋白无活性，因阻抑蛋白分子中两个识别螺旋彼此靠得近，不能很好地插入操纵区DNA螺旋大沟，此时trp操纵子处于活化状态，启动转录；（4）当tr

33、p浓度高是，trp与阻抑蛋白结合，这时trp称为辅阻抑物，引起蛋白质空间构像改变，两个识别螺旋恰好分别落入操纵区两个半位点相邻的DNA大沟中，阻断了trp操纵子的转录起始；（5）trp还存在一种调节机制即弱化作用，当trp含量很多时，它能使trp操纵子的转录提前，trp操纵子上还含一个162核苷酸的序列，称为trpL，是trp签到区，此序列的5的113个核苷酸称为弱化子a。当trp含量很高时，转录在此处终止。弱化作用发生的原因是由于位于trp前导区的4个寡聚核苷酸序列能经碱基配对形成茎-环结构。在最稳定的结构中，1区与2区配对，3区与4区配对形成两个茎-环结构。3区、4区结构紧接着8个U，是一

34、个有效的转录终止子，其结构与不依赖终止因子的终止子结构相似。当trp含量低时，3区、4区茎-环结构形成受到抑制，弱化位点的终止不能进行。原核翻译过程与转录同时进行，因此在mRNA的3端仍在合成时，核糖体就可翻译mRNA 5端的信息。由于trp操纵子前导区1区含2个色氨酸密码子，翻译到这2个色氨酸密码子时，由于没有足够的色氨酸-tRNA翻译它们，核糖体停止移动。由于核糖体位于1区，使1区不能与2区配对，自由的2区与3区配对。由于2区与3区的配对比3区与4区配对形成的茎-环结构更稳定，使得转录终止子不能形成，因而可合成完整的mRNA，相反。蛋白质一级结构测定方法：一级结构测定方法的基本策略是用两套

35、断链方法分别将纯化的蛋白质的肽链专一性地裂解成肽段；再将各个肽段分离纯化，并测定每个肽段的顺序；然后比较两套肽段氨基酸顺序以排定蛋白质一级结构。具体测定的主要内容包括：测定前准备、氨基酸组成的测定、肽链的拆离与纯化、末端氨基酸的测定、肽链的专一性裂解与肽段的分离纯化、肽段氨基酸顺序的测定、蛋白质一级结构的建立、蛋白质分子中二硫键位置的确定。（1）一级结构测定前准备包括蛋白质纯化、蛋白质分子质量的测定、蛋白质多肽链数目和大小的测定、封闭自由巯基及去除N端封闭的基团；（2）氨基酸组成的测定，包括蛋白质水解（酸水解、碱水解、酶水解）、氨基酸的组成（柱后分析法和株前分析法；（3）肽链的拆离与纯化，二硫

36、键的拆离（氧化法、还原法）、非共价键的拆开（pH的该笔爱你引起多肽链的解离、强变性剂导致多肽链解离、肽链纯化同一般蛋白质纯化；（4）末端氨基酸的测定，N末端的测定（二硝基氟苯法、二甲基氨基萘磺酰氯法，具体方法详见下文）、C末端的测定（肼解法、羧肽酶水解法）；（5）肽链的专一性裂解与肽段的分离纯化，肽链的专一性裂解，是测定氨基酸序列中的一个关键性步骤，裂解方法包括化学裂解、酶水解法；多肽链经专一性裂解后，降解成长短不易的较小的片段，这些片段可以应用层析和电泳法分离纯化；（6）肽段氨基酸排列顺序的测定，常用Edman降解法和酶解法，具体步骤详见下文；（7）蛋白质一级结构的建立，通常采用肽段重叠法和

37、接头肽法等；（8）二硫键位置的确定，确定二硫键位置工作主要包括：将完整的蛋白质分子不经任何处理，直接用酶或酸水解；用凝胶过滤或离子交换层析等方法，及二硫键鉴定的呈色反应，分离检出其中含有二硫键的肽段，将肽的二硫键拆开，分别测定两个肽段的顺序；将两个肽段的结构与已测定的蛋白质一级结构进行比较，找出相应的二硫键的位置。附：Edman降解法原理：包括：偶联、裂解、转化三步偶联反应：（1）偶联：在pH8-9条件下，多肽链N末端氨基酸的氨基与苯异硫氰酸酯试剂偶联，生成苯异硫甲氨酰基-多肽；（2）裂解：在无水、强酸条件下，靠近苯异硫甲氨酰基的氨基酸幻化、肽链断裂，形成苯氨基噻唑啉酮-氨基酸和一个失去末端氨

38、基酸的肽链。此肽链的N末端，可进一步反应；（3）转化：苯氨基噻唑啉酮-氨基酸不稳定，在三乙酸水溶液条件下可转化成稳定的乙内酰苯硫脲-氨基酸，即N末端第一个氨基酸。多肽链的第一个氨基酸分离后，其N末端的氨基仍是游离的，可以进一步与异硫氰酸苯酯反应，进行第二步降解，这样，反复地进行偶联-降解-偶联-降解反应，依次将N末端氨基酸分离。二硝基氟苯法测定N末端：在很温和的条件下（室温，pH8-9），能与多肽链或蛋白质中N末端的a-氨基作用，生成二硝基苯多肽或蛋白质（DNP-多肽或蛋白质），再将二硝基苯多肽或蛋白质水解，使肽键断开，但与N末端氨基酸结合的DNP基并不脱落，这样可把DNP氨基酸与其他氨基酸分

39、开。PrPsc：它是一种蛋白质侵染颗粒，这种蛋白也被称为PrPsc，人等哺乳动物的身体中存在有正常的PrP蛋白，称为PrPc蛋白，它和PrPsc蛋白是同分异构体，一级结构相同，但PrPsc比PrPc具有更多的折叠，从而使PrPsc溶解度降低，对蛋白酶抗性加强，从而致使大脑细胞代谢异常致病。侧翼序列（Flanking sequence）：基因起始密码子上游的序列和终止密码子下游的序列，它是基因的调控序列，对基因的有效表达起调控作用，包括启动子、增强子和终止子蛋白质结构转化（structural transformation/switch）：与构象变化不同，是指较大程度的结构变化，而后者仅为蛋白质

40、结构的扰动或柔性，包括同源肽段的结构转换，二级结构的转换和蛋白质淀粉样化。SOS修复（sos repair）：是指DNA受到严重损伤、细胞处于危急状态时所诱导的一种DNA修复方式，修复结果只是能维持基因组的完整性，提高细胞的生成率，但留下的错误较多，故又称为错误倾向修复（error-prone repair），使细胞有较高的突变率。硒代半胱氨酸插入序列（selenocysteine insertion sequence，SECIS）：硒代半胱氨酸Sec与终止密码子占用同一密码子，生物体如何将UGA识别Sec的关键在于mRNA3端有一个独特的茎-环结构，由于该茎-环结构在Sec-tRNA识别UG

41、A的过程中是必不可少的，因此称为SECIS。克隆载体（cloning vector）：通常采用病毒、质粒或高等生物中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质，将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。蛋白质分离与纯化：由于蛋白质性质各异，有效成分含量较低，离体后稳定性较差，加之所取的动物、微生物品种甚多，材料极其广泛，因此，分离纯化的方法多种多样，通用性差，只有大体相似的程序，1、其步骤一般为：（1） 选择一种目的蛋白含量丰富、稳定性好的样品材料；（2） 将蛋白质从样品中抽提出来；（为了提高蛋白质的提取率并防止其变性，在提取

42、过程中，应控制以下因素：包括溶剂的pH、溶剂的离子强度和极性、温度、抽提的体积以及保护剂的添加等）（3） 确定分离纯化的方法，使粗品的纯度达到预定要求；（4） 建立灵敏、特异、精确的检测手段，分布测定蛋白质的含量，检测蛋白质的纯度；（5） 在操作、分析过程中注意保护蛋白质的稳定性，防止变性。2、此外，一般程序的选择策略是：选择不同机制的分离单元组成一套工艺，将含量多的杂质先分离去除，以尽快缩小样本体积，提高产物浓度。尽早采用高效分离手段，将最昂贵、最费时的分离单元放在最后阶段。3、蛋白质分离纯化方法：（1）利用溶解度不同：盐析法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、聚乙二醇沉淀法；（2）利用分子大小

43、和形状不同：透析和超滤、密度梯度离心、凝胶层析（3）利用电离性质不同：离子交换层析、聚焦层析与制备电泳；（4）利用吸附能力不同：吸附层析；（5）利用生物功能专一性：亲和层析与生物专一性吸附。4、蛋白质纯度鉴定：主要有电泳法、免疫法、高效液相层析、分光光度法以及超速离心法等，其中电泳法包括：醋酸纤维薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳、印记转移电泳。聚丙烯酰胺凝胶等点聚焦、双向聚丙烯酰胺凝胶电泳及毛细管电泳；免疫法包括：免疫扩散、免疫电泳、酶联免疫吸附及免疫印记等酶活性调节中的别构机制：MWC模式要点：（1）别构酶是由两个以上亚基组成的寡聚酶，各亚

44、基占有相等的，物理位置相对称的排列，因此每个别构酶分子至少有一个对称轴；（2）每一个亚基对一种配体之忧一个结合位点；（3）每种亚基都能以松弛型和严紧型两种构象状态存在，保持平衡；（4）两种构象状态可以互变，这取决于外界条件，也取决于呀几件的相互作用，构象转变采取同步协同方式，或者采取齐变方式，如果一个亚基从T型转变为R型，则其他亚基也几乎同时转变为R型，不存在TR杂合型，故MWC模式又称协调模式；（5）别构酶构象状态转变时，分子的对称性不变。故这一模式又称对称性模式；（6）无论多少个配体结合到酶的特异结合部位上，各个配体与R型结合的位点都相等，即其内在解离常数KR是相等的，各个配体与T型结合的

45、位点都相等，即内在解离常数KT也是相等的。MWC模式能简单而又精确地反映别构酶大多数协同效应机制，但此模型也有缺点，主要是没有考虑到同促负协同效应，因为底物只和R型结合，是T、R型间的平衡有利于R型增多，故只能引起正协同效应而不能产生负协同效应。KNF模式要点：（1）当配体不存在时，别构酶之忧一种构象状态存在（T）型，而不处于R-T的平衡状态；之忧当配体与之结合后，才诱导T型向R型转变；（2）别构酶的构象是变序方式进行的，而不是齐变，特点是有各种TR杂合体。即当配体和第一个亚基结合引起该亚基构象变化，并使临近亚基易于发生同样的构象改变，当第二个配体结合后又可导致第三个亚基类似的变化，依此顺序传

46、递，直到最后所有亚基都处于同样的构象。因此该模式又称为序变模式；（3）呀几件的相互作用可能是正协同效应，也可能是负协同效应，前者导致下一亚基对配体有更大亲和力，K1K2K3K2K3K4。动物靠什么途径调节其组成酶的催化活性？以蛋白质的结构和功能关系为例说明酶的别构调节动物对酶的调节主要有两个方面：（1）是对已有酶活性的调节，包括酶的别构调节和可逆共价修饰；（2）是对酶的合成与降解的调节蛋白质的结构与功能酶活性调控的影响因素饲料原料分类：按营养价值分类：1、粗饲料 如秸秆、干草等；2、青绿多汁饲料 如紫云英、大白菜等；3、精饲料 如豆类子实、饼粕等；4、特殊饲料 凡不属于前三类的饲料都归入此类，

47、主要包括添加剂、矿物质、尿素等；按饲料来源分类：1、植物性饲料 包括植物子实、茎叶及加工副产品等；2、动物性饲料 利用动物性产品加工而成的饲料；3、矿物质饲料 包括天然和工业生产的矿物质；4、微生物饲料 利用微生物，包括酵母、细菌、藻类等生产的饲料等；5、人工合成饲料 利用微生物发酵、化学合成等方法生产的饲料原料。鱼粉营养特点：（1）鱼粉的能量水平主要受脂肪和粗灰分含量的影响，一般在粗脂肪含量合格的情况下，全鱼粉能量水平高，因而很容易搭配成高能量饲料；（2）鱼粉的粗蛋白质含量高，而且品质好，消化率高。必需氨基酸含量高，比例平衡，尤其是植物性蛋白饲料缺乏的赖氨酸、蛋氨酸和色氨酸含量很高，但精氨酸

48、相对较少；（3）粗脂肪那个含量高，尤其是海水鱼粉中的之分那个含来那个有大量高度不饱和脂肪酸，具有特殊营养生理作用，但脂肪含量高于9%会给贮存带来不便；（4）鱼粉灰分含量高，但粗灰分含量越高，表示鱼粉中鱼骨越多，鱼肉越少。鱼粉食盐含量高，钙、磷含量丰富，比例适宜，且磷主要已磷酸钙形式存在，；利用率高。微量元素中，铁的含量最高，其次是锌、硒；（5）B族维生素含量丰富，尤其以维生素B1、维生素B2含量高，还含有较丰富的维生素A、维生素D；（6）鱼粉中含有促生长的未知因子，可刺激动物生长发育；（7）鱼粉质量变异很大，常存在以下一些问题：掺假、盐分含来那个过高、变质以及维生素B1分解酶等。花生粕营养特点：花生品种较多，随脱油方法不同、脱壳程度不同，饼粕中营养成分含量及营养价值也不一样。脱壳花生饼粕的代谢能水平很高，可达12.26MJ/kg，是饼粕类饲料中可利用能量水平最高者。无氮浸出物中大多为淀粉和戊聚糖等。残留脂肪熔点低，所含脂肪酸以油酸为主，不饱和脂肪酸约占53%-78%；（2）粗蛋白质含量很高，所含蛋白质以不溶于水的球蛋白为主，占65%，可溶于水的白蛋白仅占7%，故蛋白质性状与大豆蛋白差异较大。氨基酸组成不佳，赖氨酸及蛋氨酸偏低，而精氨酸与组氨酸含量相当高，分别可达4.88%和0.88%；（3）矿物质中，钙少磷多，但磷多属植酸磷，其他矿物元素含量与大豆饼粕相近。维生素中除