蛋白质组学及其在肾脏病研究中的应用.ppt

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1、蛋白质组学及其在肾脏病研究中的应用,第一节 蛋白质组学的概念及其发展史 第二节 蛋白质组学研究方法概述 第三节 蛋白质组学在肾脏病研究中的应用,主要内容,第一节 蛋白质组学的概念及其发展史,蛋白质组是澳大利亚学者Williams和Wilkins于1994年首先提出，源于蛋白质（protein）与基因组（genome）两个词的杂合,意指proteins expressed by a genome，即“一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质”。,一、蛋白质组学的概念,对应于基因组的所有蛋白质构成的整体，不是局限于一个或几个蛋白质。同一基因组在不同细胞、不同组织中的表达情况各不相同。在空间和时间

2、上动态变化着的整体。,蛋白质组是：,蛋白质组学(proteomics),指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴科学，其目的是从整体的角度分析细胞内动态变化的蛋白质组成成份、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律。,蛋白质组学研究的内容,结构蛋白质组学 主要研究蛋白质的氨基酸序列、三维结构的解析、种类分析、数量确定等；蛋白质结构测定主要是应用X-光衍射技术，蛋白质种类和数量测定主要是应用双向电泳，蛋白质鉴定的手段是质谱法；功能蛋白质组学 研究蛋白质的功能，确定蛋白质在亚细胞结构中的位置，蛋白质-蛋白质的相互作用等。现在蛋白质组学比较注重研究蛋白质

3、类型与数量在不同种类、不同时间和条件下的动态本质。在功能蛋白质组学或蛋白质相互作用方面，较常用的有酵母双杂交系统（包括单杂交、三杂交、反向杂交的系统）、免疫共沉淀技术、表面等离子技术、荧光能量转移技术等。,二、蛋白质组学的产生与发展,1.20世纪中后期，生命科学研究进入了分子生物学时代。2.随着人类基因组全序列测定，生命科学跨入了后基因组时代。3.因mRNA的表达情况不能直接反应蛋白质的表达水平。基因产物是否以及什么时候被翻译表达、翻译产物的相对浓度、翻译后修饰的程度等现象并不能从研究基因组中得到回答。4.蛋白质有自身特有的活动规律，如动态修饰、加工、转运定位、结构形成、代谢等，均无法从基因组

4、水平上的研究获知。蛋白质构象病更难于只靠DNA序列来解释。5.蛋白质才能动态反映生物系统所处的状态，蛋白质作为生命活动的主要体现者。20世纪90年代中期，国际上萌发了蛋白质组学。,产生背景,进 展,各国政府支持，国际著名研究和商业机构加盟：1996年澳大利亚建立了世界上第一个蛋白质组研究中心（Australia Proteome Analysis Facility，APAF）1997年召开了第一次国际“蛋白质组学”会议我国也于1998年启动了蛋白质组学研究。,2001年的Science杂志已把蛋白质组学列为六大研究热点之一，其“热度”仅次于干细胞研究，名列第二。,2003成立了中国人类蛋白质组

5、组织（CHHUPO），并分别于2003年9月召开了中国蛋白质组学首届学术大会，2007年8月在广州召开了第五届学术大会，2004年10月在中国北京召开了第三届国际蛋白质组学会议。,蛋白质组学的前沿,蛋白质组学的前沿大致分为3大方向：针对已完成基因组或转录组研究的生物体或组织/细胞，建立其蛋白质组或亚蛋白质组（或蛋白质表达谱）及其蛋白质连锁群，即组成性蛋白质组学研究；以重要生命过程或人类重大疾病为对象，进行重要生理/病理体系或过程的比较蛋白质组学研究；蛋白质组学支撑技术平台和生物信息学的研究。,第二节 蛋白质组学研究方法概述,一、蛋白质组表达模式的 研究方法,研究蛋白质组的组成成分 支撑技术主要

6、有双向凝胶电泳、以质谱为代表的蛋白质鉴定技术及生物信息学分析。,蛋白质组表达模式（expression profile）：,生物学问题的提出,实验模型的设计,实验组和对照组样品的制备,蛋白样品的IEF和PAGE电泳分离,图像扫描和初步分析,感兴趣蛋白点的切取,胰酶对脱色后蛋白质的消化,质谱的多肽指纹图、微测序分析,质谱结果的生物信息学分析和比对,新蛋白质的发现,其它实验的进一步验证,蛋白信息的初步获得,研究流程,Functional analysis,State 1,State 2,2DE,PMF,MS/MS,LC-MS/MS,Database search,Differential anal

7、ysis,?,（一）蛋白质组研究中的样品制备,通常可采用细胞或组织中的全蛋白质组分进行蛋白质组分析。也可以进行样品预分级，即将细胞或组织中的全体蛋白质分成不同部分，分别进行研究。,样品预分级的主要方法,蛋白质溶解性：可溶性蛋白、非溶性蛋白等蛋白质定位：膜蛋白、核蛋白等蛋白质细胞器定位：线粒体、高尔基体、叶绿体等,样品预分级主要作用在于提高低丰度蛋白质的上样量和检测灵敏度。,组织水平上的蛋白质组样品制备,临床样本都是各种细胞或组织混杂，而且状态不一，如肿瘤中癌变的上皮类细胞总是与血管、基质细胞等混杂。,激光捕获显微切割(laser capture microdissection，LCM),可直接

8、在显微镜下从组织切片中精确分离特定的细胞或细胞群。,（二）蛋白质组研究中的样品分离,双向凝胶电泳two-dimensional electrophoresis，2-DE)：利用蛋白质的等电点和分子量，结合凝胶化学特性，分离各种蛋白质的方法。2-DE技术依然是大多数蛋白质组研究中分离复杂蛋白质混合物的首选技术。,原 理,第一向在高压电场下对蛋白质进行等电聚焦(IEF),再在第一向垂直方向上进行第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。1975年首先由OFarrell等创立。,特 点,可分离10100 kD分子量的蛋白质 高灵敏度和高分辨率便于计算机进行图像分析处理 与质谱分析匹配,第

9、一向IEF电泳,传统OFarrell系统双向电泳的缺陷。Bjellgvist等发展并完善了固相pH梯度等电聚焦技术，Grg等成功地将之应用于双向电泳。优点,固相pH梯度等电聚焦的优点,克服了载体两性电解质阴极漂移等缺点。稳定的可以随意精确设定的pH梯度。尤其可在较窄的pH范围内进行第二轮分析，大大提高了分辨率及重复性。,第二向SDS-PAGE电泳,垂直板电泳 水平超薄胶电泳,2-DE技术的缺点,极酸、极碱性蛋白质，疏水性蛋白质，极大蛋白质、极小蛋白质以及低丰度蛋白质用此种技术难于有效分离。胶内酶解过程费时、费力，难于与质谱联用实现自动化。,凝胶的图像处理分析及细胞蛋白谱的建立,典型流程凝胶图像

10、的扫描：图像加工：斑点检测和定量：凝胶配比：数据分析：数据呈递（report）2-DE数据库的建立：,无腔眼金鱼胚胎,正常眼金鱼胚胎,大鼠肝脏蛋白质双向凝胶电泳图谱，上样量300g，银染。,SHR组,肝阳上亢组,天麻钩藤饮高剂量组,pH5,pH8,pH5,pH8,pH8,pH5,大鼠肝脏差异蛋白质双向凝胶电泳局部图谱，上样量300g，银染。,SHR组,肝阳上亢组,天麻钩藤饮高剂量组,新型非凝胶技术,液相色谱法liquid chromatography，LC毛细管电泳capillary electrophoresis，CE,液质联用技术（LC-MS/MS）,蛋白质混合物直接通过液相色谱分离以代替

11、2-DE的分离，然后进入MS系统获得肽段分子量，再通过串联MS技术，得到部分序列信息，最后通过计算机联网查询、鉴定蛋白质。,根据蛋白质带电性及疏水性不同，用MS分离多肽复合物。,多维色谱技术（LC/LC-MS/MS）,多维蛋白质鉴定技术(multidimensional protein identification technology),CE对蛋白质的分离与2-DE比较，可以实现在线自动分析，并可用于分子量范围不适于2-DE的样品分析。此外，CE还具有灵敏度高、速度快、样品需求少、成本低、种类多、分离范围广等优点。缺点在于复杂样品的分离尚不完全。,（三）蛋白质组研究中的样品分析鉴定,传统方法

12、：蛋白质微量测序 氨基酸组成分析,新型蛋白质鉴定技术 质谱（MS）法,基本原理：样品分子离子化后，根据离子间质荷比（m/z）的差异来分离并确定样品的分子量。,“软电离”的特点,分子电离时保留整个分子的完整性，不会形成碎片离子。灵敏度高、快速、能同时提供样品的精确分子量和结构信息、既可定性又可定量、并能有效地与各种色谱联用来分析复杂体系。,基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS）电喷雾质谱（electrospray ion

13、ization mass spectrometry，ESI-MS）,主要质谱类型,MALDI-TOF/MS用一定波长的激光打在样品上，使样品离子化，然后在电场力作用下飞行，通过检测离子的飞行时问(Time Of Flying，TOF)计算出其质量电荷比，从而得到一系列酶解肽段的分子量或部分肽序列等数据，最后通过相应的数据库搜索来鉴定蛋白质。该技术精度高、分析时间短，可同时处理许多样品，是高通量鉴定的首选方法。,ESI-MS是在喷射过程中利用电场完成多肽样品的离子化，离子化的肽段转移进入质量分析仪，根据不同离子的质荷比差异分离，并确定分子质量。此法分析肽混合物、鉴定蛋白质时，可对每一肽段进行序列

14、分析，综合MS数据鉴定蛋白质，大大提高了鉴定的准确度。ESI-MSMS与HPLC相结合可对分子量较大的蛋白质酶解肽谱进行定性定量分析。,鉴定和注释蛋白质的路线,通过肽质谱指纹图（peptide mass fingerprinting，PMF）和数据库搜寻匹配 通过测出样品中部分肽段二级质谱信息或氨基酸序列标签和数据库搜寻匹配,质谱基础,串联质谱图,目 录,仪 器,MALDI-TOF质谱仪：灵敏度高（可达fmol），分析速度快，谱图简单易于解析以及受缓冲液、盐份的干扰小,肽质谱指纹图在数据库中匹配不成功的可能原因,样品量太少，PMF图信噪比太低，输入库中搜寻的数据质量不好。2-DE胶上所取的一个

15、蛋白质点并非单一蛋白质，所获PMF图实际上是两个以上蛋白质的混合图。,操作中角蛋白或其他蛋白质的污染蛋白质发生了较多的转译后修饰，数据库中未有记载所用胰蛋白酶质量不够好，蛋白酶自酶解片段多 未知的新蛋白质 数据库规模太小,续：,组织切片或印片原位质谱分析技术 两级飞行时间串联质谱（MALDI-TOF/TOF）傅里叶转换回旋共振质谱（FTMS）表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）,联合技术精确鉴定蛋白质,（四）蛋白质组学研究的生物信息学,生物信息学是蛋白质组学研究的一个不可缺少的部分。,构建和分析双向凝胶电泳图谱 数据库的搜索与构建,应 用,蛋白质组数据库是蛋白质组研究

16、水平的标志和基础,瑞士的SWISS-PROT拥有目前世界上最大、种类最多的蛋白质组数据库。目前应用最普遍的数据库是NRDB 和dbEST数据库。,dbEST数据库,由美国国家生物技术信息中心（NCBI）和欧洲生物信息学研究所（EBI）共同编辑，包括许多生物体的表达序列标签（EST）,肽序列标签(PST)或部分序列信息最适合查寻,概念：把一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂体系中所有的蛋白质进行精确的定量和鉴定。,（五）定量蛋白质组学研究,低丰度蛋白质检测困难 蛋白质表达量差异很小，如在50%以下时，精确定量成为瓶颈 蛋白质表达的瞬时变化,蛋白质定量的难点,1基于双向凝胶电泳的定量 蛋白质组研究

17、策略,双向凝胶电泳(2-DE)是目前唯一能分离展示大量蛋白质并进行蛋白质定量分析的一种方法。荧光差异显示双向电泳（F-2D-DIGE）,GE Health推出的荧光差异双向电泳(Ettan DIGE)系统可同时在一块2-DE胶上分析3种蛋白质样品，相应地用3种CyDye DIGE荧光染料分别标记3种样品，最后的2-DE胶用Typhoon光学系统将蛋白成像，多个样品间的差异便一目了然在分析型凝胶中，每块胶可掺入样品的内标，极大地提高了结果的准确性、可靠性和重复性。,2基于生物质谱的定量蛋白质组研究策略,原理：对于具有相同离子化能力的蛋白质或多肽，可以通过比较质谱峰的强度（或峰面积）得到待比较蛋白

18、质的相对量。,如果我们在样品肽段上加上一个内部标准，就可以对来自不同样品的蛋白质进行定量比较目前主要的标记方法有体内标记和体外标记。体内标记主要是采用同位素标记，让细胞在含有稳定同位素的介质中生长，同位素被结合到蛋白质中，从而充当了定量的内部标准体外标记主要有氨基标记、羧基标记和巯基标记其中巯基标记采用同位素标记的亲和标签(ICAT)定量策略,二、蛋白质组功能模式的研究方法,揭示蛋白质组成员间的相互作用、相互协调的关系，并深入了解蛋白质的结构与功能的相互关系，以及基因结构与蛋白质结构功能的关系。,主要研究目标,（一）蛋白质翻译后修饰的研究,翻译后修饰,糖基化,乙酰化,甲基化,羧基化,二硫键,修

19、饰肽的检测的高灵敏度方法 蛋白质翻译后修饰的定量分析 合适的修饰状态下处理和电离条件 测定工作量巨大,研究面临的困难：,（二）蛋白质相互作用研究技术,生命的基本过程是不同功能蛋白质在时空上有序和协同作用 新陈代谢以蛋白质复合体或多蛋白质网络协同作用实现 细胞信号转导及病原体感染和免疫反应,1989年Field 和Song等人在酵母细胞中设计的分析蛋白质相互作用的方法。以真核细胞转录激活因子的结构和活性特点为基础的。,1酵母双杂交系统（yeast two-hybrid system）,转录激活因子GAL4的特点,N端含NLS和与酵母GAL1基因启动子上游激活序列(UASG)结合的结构域C端含GA

20、L1转录激活结构域,功能上相互独立又互相依赖，只有通过某种方式结合在一起才具有完整的转录因子活性,系 统 构 建,分别构建含GAL4 BD 和AD 的两个酵母融合蛋白表达载体；建立含特殊基因型、适用于双杂交体分析的酵母菌株,主要特点和优势,使蛋白质表现型和基因型相联系筛选cDNA文库真实反应体内蛋白质间相互作用情况不需分离靶蛋白敏感性高,缺 点,1.假阳性结果 2.假阳性结果 3.限于核内表达的蛋白质的相互作用,2噬菌体表面显示技术(phage display),三个基本因素：在噬菌体p和p衣壳蛋白N端插入外源待筛基因编码的蛋白，形成的融合蛋白表达在噬菌体颗粒的表面；同时其保持的外源蛋白天然构

21、象能被相应的抗体或受体识别,利用固相支持物上的抗体或受体，采用亲和筛选法（panning），从噬菌体文库中筛选出能结合筛选分子的目的噬菌体。外源多肽或蛋白质表达在噬菌体的表面，其编码基因可通过分泌型噬菌体的单链DNA测序推导出来。,主 要 应 用,筛选与特异抗体或受体相互作用的蛋白质 研究抗体或受体的结合位点构建随机肽库、抗体库和蛋白文库 改造和提高蛋白质的生物学和免疫学特性 研究新型多肽药物、疫苗和抗体 研究涉及到蛋白质与核酸相互作用的生物学过程和新型的基因治疗导向系统,主要优点,在细菌外完成 高度的选择性 亲和纯化反应高效性 不需要了解筛选分子结构,缺 点,限制肽段大小外源蛋白质无法正确折

22、叠或修饰 融合蛋白可能会影响到蛋白质本身活性,3基于质谱的蛋白质相互作用研究方法,靶蛋白制备 蛋白质复合体的纯化 蛋白质复合体的质谱鉴定,基本步骤：,（1）亲和层析耦联质谱技术,基本原理：将某种蛋白质以共价键固定在基质（如琼脂糖）上，含有与之相互作用的蛋白质的细胞裂解液过柱，先用低盐溶液洗脱下未结合的蛋白质，然后用高盐溶液或SDS溶液洗脱结合在柱子上的蛋白质，最后用多维液相色谱耦联质谱技术（MDLC-ESI-MS/MS）鉴定靶蛋白的结合蛋白。,先决条件,得到足够多的保持生物活性的重组靶蛋白作为诱饵（bait）获得足够量、纯度高的与诱饵相互作用的蛋白质,利用含靶蛋白的融合蛋白获得相互作用蛋白质,

23、谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase，GST）融合蛋白蛋白A融合蛋白,主要优点,灵敏度高：高浓度靶蛋白 候选蛋白质与靶蛋白的结合机会均等 检测多亚基蛋白质之间的相互作用,（2）免疫共沉淀耦联质谱技术,原理：以细胞内源性靶蛋白为诱饵，用抗靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行免疫共沉淀（immuno-precipitation，IP）纯化靶蛋白免疫复合物，凝胶电泳分离后，质谱鉴定靶蛋白的结合蛋白。,研究鼻咽癌细胞系中的p53相互作用蛋白,抗p53抗体与HNE1和HNE2总蛋白进行免疫共沉淀SDS-PAGE分离免疫沉淀复合物切取p53结合蛋白条带，酶解后进行电喷雾串联质谱（LC

24、-ESI-MS/MS）分析，得到相应的肽序列标签 搜索数据库,特 点,生理条件下蛋白质之间的相互作用所有蛋白质与靶蛋白的相互作用可检测依赖于修饰的蛋白质相互作用,局 限 性,A.灵敏性不高 B.假阳性C.受免疫球蛋白的干扰较大,Biacore基于表面等离子共振（SPR）进行生物大分子相互作用分析(BIA)质谱（MALDI-TOF-MS或LC-ESI-MS/MS）鉴定Biacore芯片上配体所捕获的生物分子,（3）生物传感器耦联质谱技术,组 成,当生物大分子结合（如蛋白质相互作用）时会引起作用表面(芯片)折射率的变化，这种光信号可被光感受器接受并转换成电信号传送到计算机，再由计算机还原为模拟的生

25、物信号。,Biacore的基本工作原理,（4）串联亲和纯化耦联质谱技术,基本原理：在靶蛋白一端或中部嵌入蛋白质标记（TAP Tag），经过特异性的两步亲和纯化，在生理条件下与靶蛋白相互作用的蛋白质便可洗脱下来，然后用质谱技术对得到的蛋白质复合体进行鉴定。,主要流程,双重分子标签构建到靶蛋白 表达融合蛋白 制备细胞裂解液 IgG柱纯化 TEV蛋白酶的洗脱液洗脱蛋白质复合体,耦联钙调素的亲和柱纯化 洗脱 含EGTA的洗脱液洗脱 质谱鉴定结合蛋白质,续：,特 点,获得生理条件下与靶蛋白相互作用的蛋白质 鉴定出在空间上非直接物理相互作用的蛋白质适用于大规模蛋白质相互作用研究,基本原理：将高度密集排列的

26、蛋白分子作为探针点阵固定在固相支持物上，当与待测蛋白样品反应时，可捕获样品中的靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析。,（三）蛋白质芯片（protein chips，protein array）技术,依据的杂交反应原理:抗原-抗体反应配体-受体反应蛋白质-蛋白质相互作用,第三节 蛋白质组学在肾脏病 研究中的应用,疾病蛋白质组学研究是利用蛋白质组学技术，通过比较正常和病理状态下的细胞或组织中的蛋白质在表达数量、表达位置和修饰状态上的差异，可以发现与病理改变有关或疾病特异性蛋白质。这些蛋白质，不仅可为探索疾病发病机制提供线索，还可作为疾病诊断的分子标记，以及作为药物开发的作用靶点。,目前，

27、蛋白质组学在肾脏病学领域的应用主要在以下几方面：（一）应用于肾脏疾病发病机制的研究蛋白尿的发生机制研究糖尿病肾病的病理机制研究肾毒性损伤机制的研究构成尿毒症毒素的蛋白质（二）应用于肾脏疾病的诊断（三）应用于肾脏疾病的治疗及药理研究,蛋白尿的发生机制研究,Musante等利用2-DE技术从几百名FSGS患儿血清中分离并提纯了10种提高肾小球蛋白通透性的血浆因子。经MS鉴定出载脂蛋白J、玻璃体结合蛋白、白蛋白同形体、纤维蛋白原等6种蛋白质，这些蛋白质有助于提高肾小球白蛋白通透性，促进白蛋白从基底膜滤过，从而产生蛋白尿。-Musante et al.Proteomics,2002,2(2):197-

28、205,肾毒性损伤机制的研究,Charlwood等研究了接受庆大霉素注射的大鼠肾脏蛋白质表达变化，发现所有大鼠的肾皮质小管均发生变性、坏死。研究者用凝胶蛋白质组学技术将这些动物的肾皮质与正常对照动物进行比较，发现至少20种蛋白质在注射庆大霉素后发生了改变，这些蛋白质分别参与三羧酸循环、糖异生、脂肪酸合成、转运和细胞应激反应等，说明能量生成受损和线粒体失功可能与庆大霉素肾毒性反应有关。-Charlwood et al.J Proteome Res,2002,1:73,构成尿毒症毒素的蛋白质,Ward等使用2-D凝胶电泳和MALDI-TOF-MS技术比较了尿毒症患者透析超滤液和健康人血浆中的蛋白质

29、表达区别，发现在超滤液中有6种共21种形式的蛋白质表达出现异常，说明它们可能是尿毒症毒素。这些蛋白质包括2微球蛋白(已知的毒素)、1-抗胰岛素、白蛋白、肉豆寇酸及三碘苯酸的复合体、补体D因子、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(A链)及视黄醇结合蛋白。用免疫印迹技术还发现补体D因子具有多种单体形式，表达也有差别。研究者进一步证实使用不同的高通量滤器时，超滤液中的肽谱也有所不同。-Ward,Brinkley.Contrib Nephrol Basel Karger，2004,141:280,肾脏疾病的诊断,Cutillas等应用串联质谱技术分析范科尼综合征患者尿液，发现了一些正常人尿液中不应出现的生物活性肽

30、段，这些肽段可能成为诊断此综合征的标志物。与传统方法相比，能够显著提高诊断的特异性。-Cutillas,et al.Clin Sci(1ond),2003,l04(5)：483-490,Mosley等用SELDI-TOF-MS技术比较了活动性与非活动性狼疮性肾炎患者尿蛋白表达,发现m/z为3340和3980的蛋白在鉴别活动性和非活动性LN的敏感度和特异度均达到92%。Mosley K,Tam FW,Edwards RJ,et al.Urinary p roteomic p rofiles distinguish between active and inactive lupus nephrit

31、is J.Rheumatology(Oxford),2006,45(12):149721504.,预测治疗反应,IgA 肾病患者的尿液蛋白表达谱可能预测对ACEI的治疗反应。identified 3 proteins,kininogen（激肽原）,inter-alpha-trypsin-inhibitor heavy chain 4(35kDa fragment)and transthyretin（甲状腺素转运蛋白）Urine protein profile of IgA nephropathy patients may predict the response to ACE-inhibito

32、r therapy.-Rocchetti MT,et al.Proteomics.2008 Jan;8(1):206-16.,This study was aimed at the search of urinary biomarkers which might help to predict the clinical response of IgA nephropathy(IgAN)patients to angiotensin converting enzyme inhibitors(ACEi).,First,we studied the urinary proteome of 18 Ig

33、AN patients(toward 20 healthy controls)who had been chronically treated with ACEi by using 2-D PAGE coupled to nano-HPLC-ESI-MS/MS analysis.We identified 3 proteins,kininogen（激肽原）(p=0.02),inter-alpha-trypsin-inhibitor heavy chain 4(35kDa fragment)(p=0.02)and transthyretin（甲状腺素转运蛋白）(p50%and a stable

34、renal function over time were used to classify patients as responders.,Then,we adopted immunoblotting to confirm the predictive power of one of the above proteins,kininogen,in 20 patients with biopsy-proven IgAN,before starting any therapy.Thus,we confirmed that very low levels of kininogen urine ex

35、cretion were indeed predictive of an inadequate or absent clinical response to ACEi therapy of IgAN patients,after 6-month follow-up.,Concluding,the analysis of urine proteome of IgAN patients generated a set of proteins which distinguished subjects responsive to ACEi from those unresponsive to the

36、inhibition of renin-angiotensin system(RAS).,黄艳军等对儿童微小病变型激素耐药与激素敏感型肾病综合征的尿中差异蛋白质表达进行了研究。12个相关蛋白的鉴定将对激素耐药治疗靶位和耐药型肾病综合征诊断的分子标志物发现可能有所裨益。-黄艳军，黄松明，张爱华，等.微小病变型肾病综合征激素耐药和敏感的比较尿蛋白质组学研究.南方医科大学学报,2007；27(1 0),（四）中医药领域中的应用,证候学研究（整体性、复杂性、网络性）中药及复方药理学研究(多组分，多环节，多靶点)例：黄黎明,梁恒,邢建宇,等.山茱萸提取物对慢性肾炎小鼠的药理作用及蛋白质组学效应的实验研究.中国药理学通报,2004 Oct；20(10)：1 l4450.,THANK YOU,