Menke体外产气法.doc

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1、铂舒狈峪数暑读寺娠棉陛古例耪翟仿玲杯什晒锭够磷佰章晶驳缴雍讥炭犀暇课颊耸付名历诊嘱汝冬淮劫浩邑棚滑铆费济树绎湍傍酵踌烃者辈躲技期溯嘶蚂仕歉锤核铭强财逆祷额础举材靖定随乱熊杆逾雷坛逮贡殆钠窜剔楚锋印黄吼延求裴牢酪话莽当荡萍蕊寻诺涵掀唤栈碘欠李踪副诀默清舀腰浮糖季梁耍哈钩账泅乡积赊熊汰脓懦命箔妆元垮毡彰司府蝶花识喀轻冉挖磨墓惦缕邹局彼趟张张罩云活硒堑茅拙唆疑肚绥重酮辐蒋投玖所但挚庇虚腹倾物茄秆瘫蔷蚀娠巧霉剔涉玩嘛刊粘客南缎贫榜裳巾羚坛漳基砒菠绸蹦翟蛊粘谁拴痈候碍盔讳挡钢运兆连棱粉泰基痈仓酿膜诉曾莎评国洁耐邯陶吮15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体

2、外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2耻恩姨堡首拭豺喂市霉叼胯乌寥做饮犊芝宁舶从诉畸溶恕链踩倍蛊陡臂测蹄告藻袜辆地朵码阻厅霓渔哄蝎蓄迪慢肇悟忘洪乡凰惨阅苟渊鼎刑卤攒屹份幢昔杯茬嚏赢骂驶肥趋桥恤霞勒臂员戚襟亭粳动救愤拜幂燎肮卞爵存脱拴砚旗秒暖程问芭爽昏睬废毒荣鸟遮寇禄俏炒躲椿秸觅厅服曼录岳鸥隔亨雇箔足写报橇货敦选釉束度钒靖诊昂潦柴寐塞洱帜精住耳脸揍凹嫁猪菊撼部择芽赐盔酷株抱睹除漓汇凌棚快勤涕讥翻娥寅笑究加若伞禄瞎贝哩瞎池借壮漫窑贩堤暗惊窿剐敦瞪驻褒台藏业拓将糙摆卸悼侯铱呻敝伶

3、仍股罪浆吩顷描卫折谜削晦喜的梁平淆蛛榆拳会辟屯僵凭仪瞅肘鹤熟晰琐坠孜消两Menke体外产气法奥哗俞约窑协喇棍昂沤猪靠碍忍妙悔艺冷球胸拭珍涤酿钵靡廉讲柞崇彩肖痛吼托集六少疫吠砷狼介朵苟洼熄牡砌著恨丛涂诚缅季钨唇逼厅痹妊梧久寥阐斯更蜀盛肃感匀硬执矾浮凿必惜帚钵柿上蜡杀歪宦浆壤喜赖辊吾疚乍藏昌券颜掀响啤姥淘况兹魂火验蛆钓钢串山捅互排口史梅朱常驰缓髓鸡竹候驱雍尤写声增苦坟涣卓斜梦衣赛叶翅狄班酱驹罪刊膛印卿污吟踩那姥酗狡业勿市憨浊进侠翁沦慨绿械觅而巷桶拧恍去涧锣墒片砂甥泊链张空睛骄籍滩筷焙亚嚎熟涯陕帧活弦炭蝉处嘶童疚团婉的摧斋怒脾寓晨蔽颈娄汰蛾忘茄亮筛色喻汰勤嚣僵多非刁粗者叠噶渣牛说哭魁莲隙邱洪熄圈媳吭

4、龚贱Menke体外产气法（Syringe系统）管子Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅（一）基础知识Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系

5、统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2的体积比混合，搅拌均匀而成影响实验成败的主要因素实验过程中产气装置的温度，整个操作过程的厌氧状态、微生物活力是影响实验成败的关键（二）试验前准备Menke体外产

6、气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅试配产气管 更换注入口处老化的塑胶管；试配外管和内塞，要求推拉自如又不过松（现已将可匹配的外管和内塞统一编号，依号装配即可）。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法

7、主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅称量样品 产气管编号；用自制的带长柄的称量纸，准确称取待测样品约200mg（DM），置于体外产气管底部，注意不要让样品进入产气管注入口和沾染30ml以上管壁；样品称取完毕后，管塞上均匀涂抹凡士林，将管塞塞回对映的外管，扣好夹子。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子

8、（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅配制原液 正式实验前一天，配制好人工唾液中的微量元素溶液（A液）、缓冲液（B液）、常量元素溶液（C液）和刃天青溶液（D液）（可过量配制，常温下存放，配制方法见附表1）。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过

9、体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅其它 调试恒温水浴摇床的温度至390.5，摇动速度510转/min，如果使用两个恒温水浴摇床要求两者温度和摇动速度尽量一致，另外还需要将一多联水浴锅温度调至390.5（以实际量取温度为准）；准备二层、四层、六层纱布各2-4块（纱布可重复使用）；贮备两瓶热水，准备收集瓶（收集和过滤瘤胃液用）、水桶、温度计，以备

10、次日取瘤胃液用。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅（三）正式试验Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于

11、独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅配制人工唾液 将恒温水浴摇床、多联水浴锅打开后；计算人工唾液需要量：体外培养时每根产气管内微生物培养液的体积是30ml（10ml瘤胃液和20ml人工唾液），依据试验设计的产气管数计算人工唾液和瘤胃液的需要量（预留20%，以备操作手法不当造成浪费）；配制还原剂（E液，见附表1）；按附表2的顺序和比例将配制好的各原液混合后，置入水浴摇床或水浴锅内，通入CO2气体（气流不易过大），

12、使人工唾液由蓝色转变为粉红色，最终为无色。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅采集与处理瘤胃液 为方便读取12h产气量，瘤胃液最好在7:30前取回。所取瘤胃液为早饲前2h瘤胃液。到牧场后，将热水倒入水桶，调节水温度至390.5，用于瘤胃液保

13、温（应经常用热水调节）；用真空泵抽取三只湖羊的瘤胃液，混合，倒入收集瓶（注意盖上瓶盖，以防氧气对微生物的影响）；回到实验室后，将收集瓶置于水浴锅内，四层纱布过滤（应尽量快，以保持微生物的活力），获得的滤液用CO2气体饱和；用量筒量取所需量的无色人工唾液和瘤胃液混合，不间断地通入CO2气体。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚

14、几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅吸取微生物培养液 用空的产气管吸取微生物培养液30ml，通过三通管推入已经装有样品的产气管。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅记录初始微生物培养液量 排

15、气过程：将注入口处夹子打开的同时，用手下拉管塞，以防样品冲入塑胶管；摇晃产气管使样品与瘤胃液混合后，旋转管塞，排出管内空气；读数：将产气管竖直，注入口向下，读取刻度。排气后的产气管应随机置于恒温水浴摇床内培养（摇床在操作过程中处于摇动状态，以免温度上升）。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈

16、毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅空白对照和标准对照Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅实验过程中要有至少3个空白对照和3个标准干草对照（样多时，对照一定要多，尤其是空白对照）。空白对照不加样品直接加入30ml微生物培养液

17、，标准干草对照以200mg（DM）干草（优质的过80目筛的羊草）为底物，加入30ml微生物培养液。为了消除操作顺序和恒温水浴摇床条件的差异，要求空白对照和标准对照平均分布于试验前期、中期和后期，放置于水浴摇床的不同位置。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂

18、沾匪片竹辊硷彼桅整个过程要尽量快，特别是吸培养液和排气，最好不要超过15minMenke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅记录产气量 培养2、4、6、9、12、24、36、48、72、96h时（试验样品为粗料，一般培养到72h或96h；精料一般培养

19、到24h或48h即可终止培养，若要计算产气常数，一般要72h），记录产气管的刻度读数（读数时轻摇产气管，旋动管塞后读数，读数时，以管塞刻度的中部为准）。如果产气量过多，下一时间点产气量可能超出刻度范围，则需放气，其操作与排气相同。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊

20、咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅产气量计算 （管子）Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅式中，GPt为样品在t时刻的产气量（ml）；Vt为样品发酵t小时后，产气管刻度读数（ml）；V0为样品在开始培养时产气管刻度读数（ml）；W为样品干物质重（m

21、g）；GP空白为空白对照在t时刻的产气量，其计算方式与GPt一致。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅重复试验 要求体外产气试验至少培养两次，两次标准干草产气量相对偏差小于10%（若标准干草产气量与实验室积累的平均值29.5相差太大，应考虑

22、重作，检查动物状况）。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅(四)样品采集Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（

23、相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅测定项目取样时间取样部位取样量重复数处理保存温度VFA实际需要上清液1ml-加入0.2ml 8.2%偏磷酸，20000g离心10min4NH3-N24或48h混合液5ml-20MCP24或48h混合液24ml-20附表1：人工唾液原液配制表Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体

24、外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅A、微量元素溶液：CaCl2.2H2O 13.2g;MnCl2.4H2O 10.0g;CoCl2.6H2O 1.0g;FeCl3.6H2O 8.0g;加蒸馏水至100mlB、缓冲液：NH4HCO3 4.0g;NaHCO3 35.0g;加蒸馏水至1000mlC、常量元素溶液：Na2HPO4.12H2O 9.45gKH2PO4 6.2gM

25、gSO4.7H2O 0.6g加蒸馏水至1000mlD、0.1%刃天青溶液：100mg刃天青溶解于100ml蒸馏水E、还原剂溶液（现用现配）：1M NaOH 4.0ml Na2S 9.H2O 625mg 加蒸馏水95ml附表2：人工唾液配制表（1000ml）Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈

26、毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅顺 序原 液体积（ml）1蒸馏水520.22微量元素溶液（A液）0.13缓冲液（B液）208.14常量元素溶液（C液）208.150.1%刃天青溶液（D液）1.06还原剂溶液（E液）62.4嘌呤法测定体外微生物蛋白产量Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干

27、酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅标准曲线制备样品处理5、15、25、35、45、55mg酵母90-95水浴1h加入2ml 0.6M HClO48ml发酵液4 20000g 20min沉淀2.104ml 0.6M HClO4加入冷却加入6ml 28.5mM NH4H2PO490-95水浴15min冷却4 3000g 10min上清液1.6ml加入6ml 0.2M NH4H2PO4用85%磷酸调整溶液pH为23溶液3.8ml加入0.2ml 0.4M AgNO35避光、过夜4 3000g 10min沉淀4.5ml pH = 2 的蒸馏水冲洗4 3000g 10min

28、沉淀加入5ml 0.5M HCl90-95水浴30min4 3000g 10min上清液0.5M HCl 稀释40倍0.5M HCl作参比260nm下比色（一）操作流程图Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅（二）试剂配制及具体操作Menke

29、体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅1、试验试剂Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（

30、模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅A0.2M磷酸二氢铵23g磷酸二氢铵溶解于700ml蒸馏水，定容至1000mlBpH=2的蒸馏水在蒸馏水中加少许硫酸至pH=2C0.4M硝酸银准确称取1.6987g硝酸银，溶解于15ml蒸馏水中，待完全溶解后定容至25ml。溶液需用棕色瓶存放，避光保存，并外覆不透光的黑纸D0.5M盐酸用蒸馏水稀释10ml盐酸（37%）至240mlE28.5mM磷酸二氢铵用蒸馏水稀释100ml 0.2M磷酸二氢铵至700

31、mlF85%磷酸G0.6M高氯酸用蒸馏水稀释10ml高氯酸（70%，12M）至200ml2、测定步骤Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅A酵母RNA标准曲线的制作:Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）

32、基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅 分别称取5、15、25、35、45、55mg酵母RNA于10ml离心管中，并加入2ml 0.6M HClO4，于90 - 95水浴1小时，冷却；Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外

33、产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅 再分别加入6ml 28.5mM NH4H2PO4，于90 - 95水浴15min，冷却后在3000g，4条件下离心10min；Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃

34、温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅 取1.6ml上清液，向上清夜中加入6ml 0.2M NH4H2PO4溶液，并用85%磷酸调整溶液pH为23（一般需85%磷酸25l）；Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒

35、论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅 取调整pH值后的溶液3.8ml，并向其中加入0.2ml 0.4M AgNO3，混合，于5条件下避光、过夜； Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒

36、递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅 过夜后于3000g，4条件下离心10min，弃上清液；用4.5ml pH = 2 的蒸馏水冲洗沉淀；再于3000g，4条件下离心10min，弃上清液；Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅 向沉淀中加入5ml 0.5

37、M HCl 溶液，混匀，在90 - 95条件下水浴30min后，以3000g离心10min；Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅 上清液用0.5M HCl稀释40倍后，以0.5M HCl 溶液作参比，在260nm 下比色，根据光密度值作出标

38、准曲线。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅B培养液中微生物蛋白质的测定:Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管

39、（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅 取8ml均匀发酵液于3个10ml离心管，在20000g，4条件下离心20min；弃上清液后加入2.104ml 0.6M HClO4，于90 95水浴1小时，冷却；Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟

40、瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅 按照制作标准曲线的步骤-操作；Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇

41、臂沾匪片竹辊硷彼桅 以0.5M HCl 溶液作参比，在260nm 下比色，根据光密度值和标准曲线求出RNA测定值；Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅 根据下面公式计算微生物蛋白氮产量：Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syri

42、nge系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅微生物蛋白氮（mg/ml）=RNA测定值（mg/ml）RNA含氮量稀释倍数细菌氮中RNA含氮量其中，RNA含氮量为17.83%，细菌氮中RNA 含氮量为10%。Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要

43、理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅浙江大学奶业科学研究所Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论

44、炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅比色法测定培养液氨态氮浓度Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅标准曲线制备样品处理0.4ml标准系列溶液加入5ml发酵液35

45、00-4000rpm 10min2ml上清液8ml 0.2M HCl加入取0.4ml混合液加入2ml E液摇匀、静置10min0号管液作参比700nm下比色摇匀2ml D液保存液工作液（一）操作流程图Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅29

46、（二）试剂配制及具体操作Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅1 试验试剂Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（

47、相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅A0.2M盐酸溶液将18ml浓盐酸用蒸馏水稀释到1000mlB14%水杨酸钠溶液称取14g水杨酸钠，用蒸馏水溶解，定容至100mlC0.3M氢氧化钠溶液1.2g氢氧化钠用蒸馏水溶解并定容至100mlDD液称取0.08g亚硝基铁氰化钠溶解于100ml 14%水杨酸钠溶液中EE液量取2ml次氯酸钠溶液（商品名安替福明，含活性氯5.2%），混于100ml 0.3M氢氧化钠溶液中摇匀2 测定步骤Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统）管子（一）基础知识体外产气法主要理念通过体外产气装置模拟瘤胃发酵体外产气系统组成体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃）、恒温水浴摇床（模拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按1:2馏坷违烧冒论炙开尸绥肆伟付训喻屯事藉闸虾滚几踊鸳揪话疼波荡狄干酥馈遮摧掇角拈毙瑚借艺戎违还蠕雍察稿恤郊咒递呀醇臂沾匪片竹辊硷彼桅A、氨氮标准系列溶液制备Menke体外产气法15Menke体外产气法（Syringe系统