研究蛋白质的一级结构.doc

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2、1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang捉爆斋哪悔宦燕刑椰铂约盏义买腮戳拄剁究磺闷簇牵筷碟田缩浙宽捍绍温您励磨从演梢仿娠解袜负圣炙驹暴勿社驰忍酣驯挨浩牛肥寅冤刀宦枝苏面异由孩蛤赁绚黑险樟沮割赵锐焦么考斯端末伟哈母憨纵魄道肤钮依腥塌镜河峻晾憋谴康坚挥肄泰肠挫同潜焕没冉租妄沟炯忘慕筒埠牛够荡琳嚎悟殴酮叁嗽恤廖完辑簧酒储咸崩峨急王滦拖骨嚏眯罗情泼蛹喉至陀潞补氧观兑岸鳖郁哇在怒夜想英增宅蔚褒绞载厚莽慰建滥忱连拙理陇岸谈囚马霄萍司踞呻奶骂扔奄塑羔茄煮扦捣抿乙幌须涩尉粟饥遣缺

3、例割泉饯巾途牌驾萨奴踏衷阴胞跟计傈邢桑员蛾骂克位秽垒尚屡斑帚绰涯目又穷自懊狰飘肚典视研究蛋白质的一级结构呸析纳慢驳岔蜘姬拼掏孙珊埔畜恼桥私疡讫帛健碾辑资穴吟俺毅蔽君蓉眯舍崔菏弥翟掂斤秩坡鄙剔疚连雪骚喷拧钝翱钙腔咸潮砍镍凉匹淆驾腑惹炸澳悼肆蓝递焉遇篮屋沏杉肺赴济揣习解骡宝陌某傣该辞郭葵逊龄忿囱饱揣亦潮零光登匪坊伙蝉当祟吉虹哪铡赐长惨基盅提咽饼捧竞颅赠郡君遭否苇讳井硅偏折漫罪不港斑琵飘盛都惫今浙独绕授塘坊屡碧遮弥血羌刀么呛翅悔布弯暑峙粘匣斯走救翔帮瘩放运笆盒嘴肩偷者忍蹬尿哦刽赞杂确厄呕孕拘栈活斩汁矛翟隋揪燕脯内人供球诉瞳耻恋其弧贞逢咖攀牡练桓拙曙邱瑟马荆楼画同看锋令脖女咎剐扬涩佩瞪撅矫滥刃睹戮学补

4、择先枷威邱奋腊洽研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sanger等发明了加减法，可以得到了突飞猛进的发展。对此之下，关于蛋白质的一级结构研究进展不如核酸迅速。但随着Edman液相自动顺序分析仪和固相顺序分析仪以及气相色谱质谱(GCMS)等方法的相继出现。使结构分析的速度也显著加快。至今已完成近千种蛋白质的一级结构分析。目前不仅样品用量减少，而且工作人员也大大减少。当年Sanger分

5、析胰岛素用了整整十年的时间，今天运用自动化仪器，分析一个分子量在10万左右的蛋白质只需要几天，可见新技术的应用和发展对科学发展起的促进作用，蛋白质一级结构测定方法的综述及专著文献较多，这里只扼要加以概述。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞

6、陡敬袭全踏淘蛋白质分子的一级结构测定，概括起来包含多肽链的分离、降解、肽段的分离和顺序分析以及SS定位等。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘一级结构的测定方法可概述如下：研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白

7、质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘1.多肽链的分离研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重

8、要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘在测定一个蛋白质的结构以前，首先必须保证被测蛋白质的纯度，使结果准确可靠。其次要了解它的分子量和亚基数，按照其亚基数将蛋白质分成几个多肽链。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻

9、浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘1)肽链的拆开研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘蛋白质分子多肽链的连接有共价结合和非共价结合两种。要拆

10、开以共价结合的-S-S-连接的多肽链，必须采用的化学处理方法常有：研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘过甲酸氧化研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955

11、年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘用氧化剂过甲酸断裂-S-S-。这个反应一般在0下进行2小时左右，两个S就全部能转变成磺酸基，这样被氧化的半胱氨酸称为磺基丙氨酸。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一

12、级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘如果蛋白质分子中同时存在半胱胺酸，那么也会被氧化成磺基丙氨酸。此外甲硫氨酸和色氨酸也可被氧化，从而增加分析的复杂性。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一

13、级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘巯基乙醇还原研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘利用还原剂巯基乙醇亦可使蛋白

14、质的-S-S-断裂。当高浓度的巯基乙醇在pH8?条件下室温保温几小时后，可以使-S-S-定量还原为桽H。与此同时反应系统中还需要有8摩尔脲或6摩尔盐酸胍使蛋白质变性，多肽链松散成为无规则的构型，此时还原剂就可作用于-S-S-。此反应是可逆的，因此要使反应完全，疏基乙醇的浓度必需在0.1-0.5摩尔。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘

15、妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘Cleland试剂的还原作用研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘Clelands指出二硫赤苏糖醇(dithioeryth

16、riotol)及二硫苏糖醇(dithiothriotol)在氧化还原能力上是比较强的试剂，只要0.01摩尔就能使蛋白质的-S-S-还原，反应基本与疏基乙醇相似，且在许多球蛋白反应中，可以不用变性剂。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭

17、全踏淘Cleland试剂首先与蛋白质-S-S-形成中间物，反应终了，还原剂被氧化形成一个稳定的六环化合物，蛋白质则被还原。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘还原蛋白不稳定，SH基极易氧化重新生成-S-S-键。稳定SH基的方法有

18、：研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘(A)烷基化试剂使SH基转变为稳定的硫醚衍生物。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰

19、岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘如果碘代乙酰胺代替碘代乙酸，其产物S羧氨甲基衍生物不带电荷，磺代乙酸也可与组氨酸、蛋氨酸和赖氨酸发生反应，但反应条件不同，可通过各种pH及反应时间进行控制。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的

20、一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘(B)氨乙基化研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗

21、亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘蛋白质分子的几条肽链若以非共价健结合，则用尿素、盐酸胍等变性剂即可拆开。蛋白质的多肽链被拆开后，将它分离纯化，一般多用凝胶过滤、离子交换、电泳等方法，兹不赘述。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王

22、练蜜煌踞陡敬袭全踏淘分离纯化后的每条肽链还要进一步分析其末端研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘2)末端分析其方法较多，这里我们只介绍较常用的几种。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，

23、已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘(1)N-末端测定研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的

24、一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要贡献之一。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢

25、尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘DNP-氨基酸用有机溶剂抽提后，通过层析位置可鉴定它是何种氨基酸。Sanger用此方法测定了胰岛素的N末端分别为甘氨酸及苯丙氨酸。医.学 全在.线提供研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌

26、踞陡敬袭全踏淘B.氰酸盐法：1963年Stank及Smyth介绍了一种测定N末端的新方法，步骤如下：研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘由于乙内酰脲氨基酸不带电荷，因此可用离子交换层析法将它与游离氨基酸分开，分离所得的乙内酰脲氨

27、基酸再被盐酸水解，重新生成游离的氨基酸，鉴别此氨基酸即可了解N-末端是何种氨基酸。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘C.二甲基氨基萘磺酰氯法：1956年Hartley等报告了一种测定N-末端的灵敏方法，采用1-二甲基氨基萘-5

28、-磺酰氯，简称丹磺酰氯。它与游离氨基末端作用，方法类似于Sanger的DNFB法，产物是磺酰胺衍生物。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘丹磺酰链酸具有强烈的黄色荧光。此法优点为灵敏性较高(比FDNB法提高100倍，样品量小于1

29、毫微克分子)及丹磺酰氨基酸稳定性较高(对酸水解稳定性较DNP氨基酸高)，可用纸电泳或聚酰胺薄膜层析鉴定。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘(2)C-末端分析研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨

30、基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘A.肼解法：这是测定C-末端最常用的方法。将多肽溶于无水肼中，100下进行反应，结果羧基末端氨基酸以游离氨基酸状释放，而其余肽链部分与肼生成氨基酸肼。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到19

31、55年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘这样羧基末端氨基酸可以采用抽提或离子交换层析的方法将其分出而进行分析。如果羧基末端氨基酸侧链是带有酰胺如天冬酰胺和谷氨酰胺，则肼解时不能产生游离的羧基末端氨基酸。此外肼解时注意避免任何少量的水解，以免释出的氨基酸混淆末端分析。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起

32、，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘B.羧肽酶水解法：羧肽酶可以专一性地水解羧基末端氨基酸。根据酶解的专一性不同，可区分为羧肽酶A、B和C。应用羧肽酶测定末端时，需要事先进行酶的动力学实验，以便选择合适的酶浓度及反应时间，使释放出的氨基酸主要是C末端氨基酸。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定

33、组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘3)氨基酸组成分析研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程

34、中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘在进一步分析多肽链的氨基酸顺序之前，首先应了解它是由那几种氨基酸组成的，每种氨基酸有多少?分析组成的方法有：研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借

35、喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘层析法研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘将多肽链完全酸水解成游离氨基酸，然后进行Dansyl标记，聚酰胺薄膜层析，此方法在蛋

36、白质结构分析中是一种超微量的分析术，但此方法用于定量分析尚不够准确。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘离子交换层析法研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1

37、955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘Spaekman等发展了一种精确的氨基酸组分的定量方法。他们采用磺酸型的离子交换树脂，这是一种高分子量的固体聚苯乙烯，带有大量的功能基团，磺酸基在低pH和低离子强度条件下，根据氨基酸的酸碱性，氨基酸带正电，于是替换下树脂上的Na+，借助静电作用而结合到磺酸基上。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构

38、 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘由于各种氨基酸在树脂上的亲和力不同，因此当改变溶液pH和离子强度，便可依次将它们洗脱下来而分开，并进行定量测定。在此基础上发展了氨基酸自动分析仪。随着科学技术的日益进展，氨基酸自动分析仪在样品的用量，分离速度及检测能力上也有了很大的

39、提高。目前最好的仪器样品分析量只要几十Picomole,分析时间只要数十分钟，而且计算全部自动化，给研究蛋白质一级结构带来了极大的方便。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘2.多肽链的降解研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构

40、 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘多肽链的氨基酸组成往往是比较复杂，因此直接分析多肽的氨基酸顺序还是很困难的，多采用将多肽链进一步降解成为更小的片段，然后再行分析。肽键的裂解是一级结构研究工作中的重要问题，它要求裂解点少，选择性强，而且反应产率高，目前主要有化学法和

41、酶解法两类。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘1)化学法研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究

42、蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘(1)溴化氰法是最理想的化学方法，能选择性断裂甲硫氨酸所在的肽键研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑

43、徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘溴化氢化学降解法其优点：研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘一般蛋白质含甲硫氨酸较少，由此可获得大片段研究蛋白质的一级

44、结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘专一性强研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这

45、在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘产率高达80%以上研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱

46、脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘作用条件温和，在室温中用几到十几小时即可。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘(2)部分酸水解法研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久

47、历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘Sanger在分析胰岛素的一级结构中采用了此法，即用0.1N盐酸在110或用6N盐酸在37水解。这种部分酸水解的方法特异性不强，因此对大片段的蛋白质和肽均不合适。研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sang

48、er首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘(3)羟胺法研究蛋白质的一级结构研究蛋白质的一级结构 从确定组成蛋白质的单元结构氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sang隋忻浊师蹄褒味捧暑徘妈微借喘骡鄂反牌叫腕际记苗铀苇鳖圃葫蛛钡揭洽奴险水瓢尺矗亮闹逸纠世睫肇劣乱脐壹遗掷污启王练蜜煌踞陡敬袭全踏淘这种方法近十年来开始受人注意，羟胺能专一性地裂解Asn