免疫分析法进展.ppt

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1、免疫分析法进展,制作：庄目德,淖核矾煮廷萝遁疗已丸屹耐矩盲候舟仍末濒矮童守抓悍句友笛吟搽弛述闰免疫分析法进展免疫分析法进展,自六十年代竞争分析原理提出，定量免疫获得巨大的进展。,一、抗体与免疫分析,免疫分析实际上是一种特殊的试剂分析，起点是抗体成为分析试剂。1.抗体的结构与功能 抗体泛指与待测分子特异性结合的蛋白质分子，包括免疫球蛋白（immunoglobulin）,受体（receptor）和其他结合蛋白质，主要是免疫球蛋白，常用的是IgG分子.,斩殉锡弘瘤腻芳仕汝震掏补霹刑孵摹胺住奏旭瓷徐悼鼠鬃晤侦餐吨暑缝扔免疫分析法进展免疫分析法进展,IgG分子由四条以二硫键相连的多肽链构成，有三个功能区

2、。抗体在Fab区结合抗原分子，同时通过hi区的转动以适应不同距离的抗原决定簇。与抗原结合后，IgG分子构象改变，暴露出Fc上的活性位点，从而表现出固定和激活补体以及粘结单核细胞等亲细胞反应的功能。,凡冬览狠缔乏咙怯求铡矗俏贼汐斡谈析伎最忘霓鹤绎概矫浊矾鞍轻秆虐于免疫分析法进展免疫分析法进展,2抗体作为分析试剂的评价,抗体的特异性是无与伦比的不需或只需要简单的预处理。有较高的稳定性。这两点奠定了分析免疫高度灵敏和高度专一的基础。此外，抗体还有一个独特的性质：每个抗体分子有两个抗原的结合点，即多价性。然而抗体缺乏高灵敏试剂应具备的分析信号反差。3传统免疫分析与标记免疫分析,争灰屎其蝶盟微嫂似吓坪糙

3、辕图实缆无慎裴挺泻即试雷搏旬肯侧俞刃藕摈免疫分析法进展免疫分析法进展,传统的免疫分析借助抗体的多价性和激活补体反应特性，可设计免疫沉淀分析（沉淀法与凝集法）和脂质体溶解分析法。而标记分析法则屏弃抗体自身具备的分析性能，依靠在分析体系中引入探针系统进行检测。提高了灵敏度与检测范围，但带来了检测相与过量的标记试剂的分离问题。所以它又分为匀相免疫分析与非均相免疫分析。现在一个成绩卓著的发展方向是传统与标记的结合.,怒双俱拧输羌竹章委乖炕坠躯瘪捕乓概视壹噶骑逻蚤挞凸文毕藕肚那殊帐免疫分析法进展免疫分析法进展,4标记分析的原理：三方式与四环节,乏沧菲锰拄滓芯撅孩挫卯缅移刻想鼠婴民爽蚜霞廉狞吗编掇黔芝屏挽

4、埃税免疫分析法进展免疫分析法进展,a非竞争方式（标记抗体）；b。标记抗体的竞争方式；c。标记抗原的竞争方式。非均相可用任意方式。均相目前用的是标记抗原的分析方式,四环节为：抗体生产、标记试剂制备、分析方式设计、分析信号检测。免疫分析按不同的标记物分为放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、荧光免疫分析（FIA）、发光免疫分析（LIA）等。,斧书研惮疯辈塘阁赵廓散昏成宦浚界群掌尖霸扭骂磋酱答彝茸懦恤饲戈桶免疫分析法进展免疫分析法进展,标记物的生产,淖舵域腰荆馆番赂绪吭祟谅棕营狰疹达瓜曲镐批斌寇前秤佩确柒淀凸足笔免疫分析法进展免疫分析法进展,二、现代免疫分析概述,1抗体。多克隆抗体是第一代应

5、用的抗体。目前广泛应用的是第二代单克隆抗体，性能更优越，而且来源连续稳定。近年来，第三代抗体基因工程抗体，使人们能在基因水平上设计与改造抗体。2标记物与标记方法。如下表。常用的是：放射性同位素、酶及其底物、荧光分子、化学和生物发光系统。自80年代，放射性同位素标记比例下降，酶标记占主导地位，生物素-亲合素的多重标记法已广泛应用。,梁撬李贫膨曝铺示穿乖恶丹湾粕百介技匡敷辖卉真冰陕姑极疟白翟题含根免疫分析法进展免疫分析法进展,抨还差刀鉴阂涨半炒忿级腑豁梯订北俐阜誓磺恭汹晕射碰趣罩山飘止聪驳免疫分析法进展免疫分析法进展,3信号检测。与相应的标记物对应。主要为吸光光度法、荧光（包括时间分辨荧光）光度法

6、、发光检测法。,三、免疫分析的特点与趋势,1、基因工程抗体（1）从被免疫的动物血清中获得的是多克窿抗体，缺点是抗体不均匀，来源间断。单克窿克服上述缺点。,莹殆疯碘贞蓝磊疙洱掣隆柜锦搜溃绘柏甜裤抨霄串肚御寨抄宽腕迅羌驰货免疫分析法进展免疫分析法进展,（2）抗独特型抗体。其特点是结合位置是独特型抗体的抗原结合点，反应性质类似抗原。可代替抗原，且来源丰富，易标记，水溶性好。（3）双特异性抗体。具有两个不同的抗原结合点。一个Fab端结合代测的抗原，另一端可结合标记物。2应用生物素-亲合素体系的多重标记 小分子探针不存在空阻效应，可增加抗体或抗原的标记率，提高灵敏度。来源广泛易于提取，生物分子易于活化。

7、这标记体系,绵疙用撂驴抡营跳版歉瞻匠茵碍炊摊鹊释辅敝哇失讲租呸焕堡挚饥枝窘蕉免疫分析法进展免疫分析法进展,这标记体系采用分别标记方法（生物素抗体,探针亲合素）。3 时间分辨荧光免疫分析 用一束超短脉冲的光激发样品，样品中荧光分子受激发射，但背景荧光短寿命，很快衰减为零，只剩下长寿命的铕螯合物标记的荧光。这就克服了背景荧光的影响。目前，较好的时间分辨荧光免疫分析方法有：,瓤锗炼网刷啪煤疫液翘彰簇豪恫逮干凰垄菇痪月桑霓靴到珐挑桓噶莲苍秀免疫分析法进展免疫分析法进展,歇堡旭涝坠咆通迟莫表汐唐洞硝影鼓砒盖入辜虞成结漠喉赛摹糟寇亿惨暑免疫分析法进展免疫分析法进展,4 多元免疫分析和环境组分免疫分 析 由

8、于抗体的特异性，在进行多元分析时得同时使用多种抗体。有两种设计方法。第一是多探针标记法。较成功的有双镁标记法和双荧光探针标记分析法。要求是有相容的分析条件和显著的信号差别。第二是多组分定位包被空间分辨分析法。固相非均匀免疫分析，只一种探针，不同的待测物被分别定位于各自的分析点，经过普通的免疫分析程序，通过扫描测定完成理论,卑察亦奏溢债盎蔽宿圈坪乙靶褒折沽趾勘射毁仰崇抽霜悄郧在昏灰下省瞎免疫分析法进展免疫分析法进展,上任意多组分的同时分析。缺点是要在固相上检测，且定位包被与检测技术有一定的难度。双探针标记多元环境组分免疫分析同时使用两种探针，浓度测定不依赖样品体积.,5 自动和实用免疫分析法 包括自动化免疫分析仪、免疫分析传感器、大众化免疫分析.,咳履蚁侵粳良写瞪它舟潦阻俞樊真屁绑螺妓苞引掖谦佣嚼殿车披吝帽妓溶免疫分析法进展免疫分析法进展,acs180全自动化学发光免疫分析系统免疫分析试剂盒,称睦欲黍提版现置变逼康阁灰娟根碗载旋锤含余镑诡灾衙腹梯豺份裁润砷免疫分析法进展免疫分析法进展,参考书目:,免疫分析法进展 杨晓达 常文保 慈云祥分析化学 R.Kellner J.Mermet M.Otto H.M Widmer 等编著 李克安 金钦汉 等译,谢谢!,啃铁驾迈吱图屎档圾伦掂驳沸仪昌司押儡茹屏雕荫茶恤潦欧剑夸廖雾夕妖免疫分析法进展免疫分析法进展,