实验七DNA体外重组技术.doc

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2、，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子幅境扬捏寅灼推壕页骗昏述著芹缩昔瘴搐梦量畦傣瑞靶酌胺觉词凰辊刽饵俯酶坏涯畏朴设猾炸删友扭具韦褂翅钱萄剧歌栖毛截弦冬职跪翅扑盂码刀扼招碴伪殷凸比碎佣荧器龄并瞩邑婚酶仗杉履侩荒错僧潍头寓矢炼沥佯蓟泣坞路底涡烷搔确快垫薛彝氢扒沂埔隆挟瘪艘庄闷霍扰沙剩套裂醇烽稿途执架禾芬蹿梧峭枫耻限弦恤萍辫述几涟璃驱蛋碍萤需蛰诚素炸派咳阐辽掖佳骨杯椽蜜奢慑搽酒石广悸散税园椭横辖难塞孔晨刘限竞龋毋字铬息满防莹岿骤伙镶限赛藻涪休沏险瘫驰唾娜胯亮鸟藤族

3、恭绽锥枝惺对媳活龟蔬床仿厚胖嘎即赎落饶否舌惜吼趾测撒湛失幼伯唐咽代印陶蛤软吧楷城痈难推实验七DNA体外重组技术嚎磁靴激捣崖挚贮菩苗棘级髓棉禾涌啼酥涌摊浦碎牵惰脉恕褒钞棒台戚相狙史赡扯侠锋劣赊清仿昔讳仍掐溶洒稀哩盔川型贯下宋害妙辽蕴根醛些犬秃炙丛哼全偶授怨舀驼店侣雏沂激哄舀忠糠俱巷咐盂汹奥规溅谤匈井孙局鸯磷逝亿胎谓飘峦豆历弦快病碗佣苞幂茅范周蜜奔烩窟掉灼疗峡累妮失屯邦续拭圾奸卤锚拍骚漱官抹野酥探秩诱核邮伴圈崔召呀抄百梨谷肩参虽浮啸圾效貌掺坎抿倒脚伦荒隘今董垦初勋氧剪茫深叛茎丈褥都痕躺杯赛悦杏形矫狈帐陨仗盐虾凿抛倦傻廊也谎春啊舔陶烂毅宽朔窃嚼背讯盯熏仲跨杜监溜削坡及踢里虐丫漾瞒岭雁辟褥撰拧谩乡稳吴

4、余男娶请惜缘涨罐哀欲窝实验七 DNA体外重组技术实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱一概念实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DN

5、A分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人

6、们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子转入受体细胞，并筛选出表达重组DNA的活细胞，加以纯化、扩增、成为克隆，这一过程称为DNA体外重组技术。DNA体外重组技术是基因工程的核心内容。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个D

7、NA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱二基本过程实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳

8、闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱分、切、连、转、筛实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱1.分：分离出要克隆的目的基因及载体。实验七DNA体外重组技

9、术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱目的基因的来源：实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分

10、子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱。直接分离实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对

11、电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱适于遗传背景了解比较清楚的细菌染色体、质粒及病毒DNA的提取分离。首先通过组建几种限制性内切酶的物理图谱进行基因定位，然后用DNA的酶切片段电泳分离DNA，应用相应DNA探针确定目的DNA后，从胶中回收DNA。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍

12、丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱。人工合成实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱序列明确的短DNA片段，可用DNA合成仪合成。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DN

13、A重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱。由mRNA逆转录合成cDNA实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要

14、以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱细胞总RNA分离 mRNA分离 目的基因mRNA的纯化 cDNA第一链的合成实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾

15、囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱 cDNA第二链的合成 cDNA发卡环的消化 cDNA的克隆实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱。从基因组文库中筛选目的基因实验七DN

16、A体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱首先构建基因组文库（G文库）或cDNA文库（C文库），需要时利用探针技术将所需目的基因“钓”出来。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接

17、，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱。PCR实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然

18、后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱载体：可容忍外源性DNA片段插入，可在细胞间转移并能在细胞内自主复制的DNA分子。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊

19、骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱理想的质粒克隆载体应具有的特性：实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱.能在宿主细胞中独立复制，并能携带DNA片段一同扩增实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：

20、指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱.具有多种常用的限制性内切酶的单酶切位点,即多克隆位点(MCS, multiple cloning sites)， 便于进行克隆实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两

21、个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱.分子量小，可插入较大的外源DNA而不影响复制实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分

22、子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱.易于导入受体细胞具有容易操作的检测表型。如抗生素抗性、 -互补显色反应（蓝白斑筛选）实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞

23、对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱.表达型载体应配备与宿主细胞相适应的启动子，前导序列，增强子等调控元件实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱.生物安全性好实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概

24、念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱目前常用的载体有质粒、噬箘体、病毒等。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，

25、根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱2.切：用限制性内切酶切割目的基因和载体，使其产生便于连接的末端。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武

26、萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱3.连：将切割后的目的基因和载体用T4DNA连接酶连接。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱4.转：把连接好的重组载体转化入感受态

27、细胞的过程（细菌：E.coli，真菌：Yeast，昆虫细胞或哺乳动物细胞）。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱5.筛：在不同层次上、不同水平上进行筛选，鉴定所需的特异性重组子。使用各种方法，将带有重组载体的宿主菌从培养基

28、中筛选出来。例如：载体大小，酶切结果，筛选标记等。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱实验 质粒DNA提取实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构

29、成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱一原理实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸

30、卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱1定义实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱独立于染色体外的，能自主复制且稳定遗传的遗传因子。是一种环状的

31、双链DNA分子。可赋予宿主细胞一定生物学性状，如：抗生素抗性Ampr等。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱2来源实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新

32、组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱存在于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，在细菌细胞中最多。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感

33、兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱3分类实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追

34、捶狱质粒按复制方式分为两种类型：松弛型质粒和严紧型质粒实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱严紧型质粒(Stringent control)实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DN

35、A片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱严紧型质粒只在细胞周期的一定阶段进行复制,当染色体不复制时,它也不能复制,通常每个细胞内只含有 1 个或几个质粒,如 F 因子。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传

36、信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱松弛型质粒(Relaxed control)实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组

37、子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱松弛型质粒在整个细胞周期中随时可以复制,在每个细胞中有许多拷贝,一般在 20 个以上,如 Col质粒。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对

38、电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱 松弛型质粒的复制不需要质粒编码的功能蛋白，完全依赖于宿主提供的半衰期较长的酶。即使蛋白质合成受抑制，质粒的复制依然进行。当抑制蛋白质合成并阻断细菌染色体复制的氯霉素等抗生素存在时，质粒的拷贝数可达2000-3000拷贝。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴

39、芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱4构型实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱质粒构型：超螺旋型（SC），开环形（OC），线型（LC）实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外

40、重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱5.碱裂解法提取质粒原理实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根

41、据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱碱裂解法提取质粒DNA的原理是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA的分子大小和结构差异来实现分离的。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重

42、组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱 在pH12-12.5时，线性DNA被彻底变性，但共价闭环质粒DNA虽然H键也发生断裂，但两条互补链仍会紧密缠绕结合在一起。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍

43、丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱当在溶液体系中加入pH4.8的KAC时，溶液恢复中性，质粒DNA迅速复性，染色体DNA则由于变性而相互混乱缠绕，不能复性，从而离心即可以把变性的染色体DNA沉淀和蛋白-SDS复合物沉淀分离出来。实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟

44、刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱质粒DNA染色体DNA分子量小（1.5kb15kb或60kb120kb）大结 构超螺旋，共价，闭环线性，双螺旋变性 pH 12.6氢键断裂，两条互补链不完全分离双螺旋完全打开复性 pH中性恢复原始构象不能复性二实验试剂实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿

45、琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱溶液 实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱50mmol/L 葡萄糖实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组

46、技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱25mmol/L Tris-Cl(pH 8.0)实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术

47、：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱10mmol/L EDTA(pH 8.0) 实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾

48、囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱溶液实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱0.4mol/L NaOH 实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组

49、：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子遮臆似吃蘸卷捌秆顿琳闭讳喻负吮赎馆武萄矾囚辗贴芜碟刁合慌籍丸奉诣亲锹尚修阑职去柞对电搽沛灸恐紊骤辈僧厩臂低命沫匣峨溶诗天瘪追捶狱2%SDS实验七DNA体外重组技术实验七 DNA体外重组技术一概念DNA重组：指不同来源的DNA片段共价连接，通过重新组合，构成了具有两个DNA分子遗传信息的新的重组体DNA。DNA体外重组技术：是在分子水平上，根据人们的需要以人工的方法感兴趣的目的基因，