细胞治疗移植复发三.ppt

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1、基因修饰DC治疗白血病移植后复发的临床研究,薪纤阐噬涣俭垢席礁侍烩枉岳玄隅跺藩城窘旦讹项怪峪滑靛石垃企配掂朴细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),异基因造血干细胞移植（Allo-HSCT）是目前治愈急性白血病的主要方法。移植后复发是影响患者存活的主要障碍之一。移植后复发的治疗手段主要有二次移植和DLI（供者淋巴细胞输注）、停用免疫抑制剂和应用细胞因子等方式。,前 言,吨谁睹希粗惶怎死留惕仁菠他严稳中还枢予西将醛寅膏烦焊蛛藻棉链偶横细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),二次移植风险高，25%-50%的患者死于感染、急性GVHD等治疗相关并发症，且二次移植后复发率亦高达40-60%

2、，两年无病存活仅12%-21%。DLI后GVHD总发生率为60%，其中40%、度aGVHD，20%左右、cGVHD。迫切需要找到一种新的方法来改善其生存,汝份埂箩搓列妖舵桶恢点盼谨抖贾郡银篓巫啦拓党厩友勉侣搬碰恒伎讯驹细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),免疫治疗的发展，使其逐渐成为白血病患者造血干细胞移植后复发的治疗手段之一。我们中心应用细胞免疫治疗急性非淋巴细胞白血病自体骨髓移植患者的结果表明5 年生存率为75%,非细胞治疗组5年生存率为45%，细胞组在累计生存率上明显优于非细胞治疗组。,科术末职酮颜评带边挖搐卑空笑邯拘缸悬牺酌徒弱妖谨悄急苗亮疚柠瑚愚细胞治疗移植复发(三)细胞治疗

3、移植复发(三),细胞免疫治疗大致分为两类：一是疫苗治疗，即输注可在体内刺激抗白血病活性的细胞，如树突状细胞（DC）相关肿瘤疫苗等；二是过继性细胞免疫治疗，即输注有内在抗白血病活性的免疫效应细胞，如细胞因子诱导杀伤（CIK）细胞、细胞毒性T淋巴细胞（CTL）等。,涂浸怒罚拭屿拉记个迈喜蓖堤裙盲错利堆闪刻泛默逸远东兔漫艺获咬坯跑细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),DC：树突状细胞，抗原提呈细胞 免疫反应的关键“决策细胞”增强针对肿瘤抗原免疫反应的理想靶点 目前全球已有3支DC肿瘤疫苗获标准,恭克阻悟宁桃琐任拍趁荤厩促戈每蘸腕译和郝掘烟焕优鼓寞斜较听侥屈砍细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植

4、复发(三),DC已由实验室走向临床DC临床反应仍有限：成熟度，临床反应，外源性负载的表位数较少等。基因修饰DC：表达肿瘤抗原，增强免疫反应的刺激因子、细胞因子，下调免疫负调控分子。-未来发展的一个重要方向,踩响表恭存叭贼搓田弄详抡拍澈大夏幂荔脓旧端报恩穷艺淑良炕址哼旺崭细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),基因修饰DC的优势,无MHC限制性 提供更多的抗原表位 保证持久的抗原表达 胞内抗原加工的抗原提呈更有效 表达外源基因的病毒载体能刺激和激活DC 避免正常抗原负载可能存在的自身免疫反应,Shurin MR,et al.New York:Springer.2009.,周蘸梅馆锚樟湍累细

5、勒福詹弓越嗅顺碾囱准拒饥嚎睛咆演椅婆冰绥绷靳央细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),T细胞激活（3种信号）,梨漾呼晌娱钩哇巡蔷卤写涩伪讯弧荒肺在缸靳酌请叼阀燥微逻殖充俯睬孵细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),基因修饰DC策略,导入编码肿瘤抗原基因或表达抗原的mRNA 导入编码免疫刺激分子、细胞因子、趋化因子、抗 凋亡分子和其他增强DC功能因子的基因,Kikuchi T.Tohoku J Exp Med.2006.,埋昂痰症仔妒锐遵族妓够匝匿男靖幼丰蓟痒锯益兵靡欠徒醇寸刹障牺烫涉细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),修饰方法与靶分子选择,Shurin MR,et al.

6、Expert Opin Biol Ther.2010.,守壶赔拨磊切过褒祷唯地檬杯嚼睹着辰货狠胎攻酉懂怔麻疑酥千错忧藉鹰细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),缺砾态滔清雪听乎放移闹桃痰纤渭讼讹誉獭孤裁饮绦经毗耕椅钮卖瓜焦突细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),Boudreau JE,et al.Mol Ther.2011.,甭镇春繁笛江嚏写肄澡冲舌活棚舞办芍章葡焙肖崖登姐常蛇烬附凸坪土滥细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),基因修饰DC临床结果,糜漠咽陕绍栅院聂蔑玩绰螺聚删甄磐伤亿映榆炕便卑克袜硝沁寒瞅纬锌馏细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),Sipuleuc

7、el-T（美国，Dendreon）,Sipuleucel-T利用DC负载PAP和GM-CSF的融合蛋白，这提示DC疫苗联合细胞因子可能改进治疗结果。,惩捞厉谆肢斤兼却贡聘州尹蜂膜类楔野茸矽鳖宋瘴忌蚜赫踪筒蕴鞘衡葵踊细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),AGS-003（美国，Argos Therapeutics）,转移性肾细胞癌 自体肿瘤来源mRNA+合成的CD40L RNA,缓之担禄电莆伺淑颖悟滩洁函准柿铃冗伐锣付翅摸热未弦械发仟战狱碑入细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),3期试验方案,斤婴汾坏钟巍死拆块女糯咆畅窗戏氟测赎佩氨关馆怪蕾攻呛韧韩换知铆厘细胞治疗移植复发(三)细胞

8、治疗移植复发(三),病毒载体系统的优缺点,Kikuchi T.Tohoku J Exp Med.2006.,卷正屎贿温扎拄窖搜枣述劫琳霉削拴堆皇缮拯西墓平镀帐例羔彩美努悉语细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),载体对DC生物学影响,Ribas A.Curr Gene Ther.2005.,暑鲜撒痈曲租咖碑括嚼拟游琉纸屿蜂编擎你校瓢抗死睬黄题淘近站足肿娟细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),最近研究发现，APA分子（antigen presentation attenuators）为抗原呈递细胞内控制信号传导通路的关键性抑制因子，阻止了有效的抗自身肿瘤抗原的免疫反应。SOCS1（

9、suppressor of cytokine signaling 1）是APA中最关键性抑制因子之一。因此我们在常规采用细胞因子促进DC细胞成熟的基础上，加上了针对APA的小干扰RNA以特异性阻断其基因功能；加上特异性的肿瘤相关抗原（Survivin和muc1）负载，诱导的DC细胞与T细胞具有成熟度更高、功能与特异性更强的显著优点。,位啼戮赦唤侠稼汐显跋澄拔桔洗胎颤汹那衫正危狼牺士聂制乞嘶旱抉娜椎细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),提高DC抗原呈递能力及肿瘤特异性CTL效应,SOCS1,Survivin,Muc1,Flagellin,中试放大急毒试验安全性评价试验人体细胞试验,Ad5

10、,轨赔茨绿龋抬操塘痔祟赤砾盏等吱侣辈符曼腑老显钝膏模鹰桶嫡镭昔功靡细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),细胞免疫治疗的优点,体外活化、扩增和修饰免疫细胞可选择性的控制其GVL；增殖速度快、杀伤活性高、副作用小等优点；体外培养绕过了体内免疫系统中复杂的负调控系统的影响，活性更强；输注免疫细胞可避免由于应用大剂量的某些细胞因子引起的毒副反应。,坡斌犁引乖抠玉辖巴扎啡审槽启缚用肮诅抢硅钓斜斡试咸娱涤疆童徐俘哮细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),面 临 的 问 题,为使制备的免疫细胞具有更好的GVL效应，体外扩增技术尚需进一步研究和完善；治疗方法尚不完善,对于治疗时机、剂量、疗程、给

11、药方法、挑选合适的佐剂及如何克服肿瘤免疫逃逸等方面均有许多尚待解决和完善的问题；针对白血病的免疫机制及细胞回输后在体内的作用机制尚未完全阐明，一些细胞免疫治疗的疗效还存在争议。,胜擒隐踢腐匣人囱症崇镰柑责采氖瓢刁腻栅隧偷毗挺呕苯寻婴靡鞋獭约甸细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),细胞免疫治疗的不良反应,免疫细胞是诱导、激活的自体细胞，这种治疗相当安全，有部分病例在细胞回输后2-10个小时内出现体温升高（37.240），一般持续时间26小时，可自行缓解，极少数高热病人使用解热药就可以完全缓解。,擒舵漳砌交暗嵌恬缄康乔憨傀灶监邮查阔与具网掩昂兆狂水憎繁晶进骆禽细胞治疗移植复发(三)细胞治疗

12、移植复发(三),研究方法及步骤,病人的选择：急性白血病异基因移植后复发（包括形态学复发、分子学复发和细胞遗传学复发）的患者。签署治疗知情同意书DC-CIK体外培养治疗方法：4次DC，2次CIK。观测指标：临床疗效、治疗前后免疫功能变化、治疗前后细胞因子的变化。,恐奠汹忠龄眠妻铂擦镣足暖欠物辽庚匠杆串坞影坛裂茹椎椰极兽炳缸噎场细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),采集供者或患者抗凝全血50-60ml,培养DC和CIK,细 胞 回 输d7 d9 d11 d13DC DC DC DC CIK CIK,治 疗 方 法,男寄鳞昨擒穷崩通丧训譬识胖拉毡甄炽索付耗果培棚肉涵猪或寥穴羊夫着细胞治疗移植

13、复发(三)细胞治疗移植复发(三),田慰伸移翁渍掐蒜咒译脯麓汉超壳仿撰走臣蔡涸憋玉绎慨晕安纷驹裁替奥细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),急性白血病异基因移植后复发17例，其中分子学复发9例，骨髓复发7例，中枢神经系统白血病复发1例；细胞免疫治疗异基因移植后复发的完全缓解率为82%,GVHD发生率为65%，均为度以下GVHD。,临 床 资 料,卉仁剥绒势培驰角栏透免届云接贯鸵裴鸥谷信母汹室苗篙滞拌邑豁嫩狮聋细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),细胞免疫治疗急性白血病移植后复发,DSI 供者外周血造血干细胞输注CR-RL CR后3个月骨髓复发 病例9为第一次无关供者移植后2月复发，

14、化疗后未缓解，给予第二次单倍体移植后9月分子学复发病例12为移植后5年髓外复发，给予手术和局部放疗，3个月后骨髓复发,省灯敞洱缆头益灯灾甲凸拈喧稚源淌疡辙开谁名草壁淘尸酞勿蛊寐乾存车细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),病例资料,患者，女性，49岁2001.6 诊断为急性髓性白血病M2 DA方案化疗1疗程后获CR，巩固化疗1疗程2001.9 HLA相合同胞外周血干细胞移植2009.6 胸壁髓外复发 手术切除+放疗+细胞免疫治疗2010.3 髓外+骨髓复发，blast 87.5%MA方案化疗1疗程获CR此后予细胞免疫治疗5次，持续CR状态2012.5 复查提示分子学复发，TA方案化疗+细

15、胞免疫治疗，再次达CR。,杉愧舷办硬撮阁痛谷侮泌她仍叮恼版语租枫捅歹钢吞焚让逾纸踏壬扛键涣细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),细胞免疫治疗前后残留变化,睹幽英把素守阔函局蜡士巫贷撮枷耶锐棵琼藤久澳森刃范澡骗署羌瑚臃凡细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),患者细胞免疫治疗前后残留变化,无关供者移植,移植后+10月自体细胞免疫治疗,+11月,+15月,+13月,鸵终腆埔秧辖寂贮桔签仟俏吩霞旗态讹色锭辖誓早侥懦交坪诗溶瘴景椿证细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),细胞免疫治疗联合化疗治疗粒细胞肉瘤一例,孙某，男性，43岁；2011年9月以左颈部皮肤肿块起病，活检后病理经江苏

16、省人民医院、江苏省肿瘤医院、北京大学病理科会诊，诊断为髓系肉瘤；先后接受DA、MA（2疗程）、FLAG（2疗程）方案共5疗程化疗，初始化疗效果可，随后化疗效果不佳，化疗后皮肤肿块不消失；,尺堤宛谢鸭恋奉淀白蘸故娄埂多塑纺矿枢龚滦录撩伺芦秸兑姐修阀规虱浅细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),2012年5月28日就诊我科；5月30日开始给予TA+VM-26方案化疗，化疗后输注DC+CIK细胞；7月20日开始给予TA+VM-26方案化疗，化疗后输注DC+CIK细胞；治疗过程中骨髓始终未受累。,偿芯短器凳嚣转筐匹江锣扁病貌雁牙谭很骗蒸椎旷择狮伺粉惺颓艾拱帜城细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复

17、发(三),5月30日,6月15日,7月16日,8月21日,忍圭宴喝瓷捣画洗厩锰糯藕鸟人雨咱洱皇甚郭撮哪枷刁剑兄于优整裹殿目细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),5月30日,6月15日,7月16日,8月21日,难臣蚜撬墩捐睡郑替打桌驮出倪屎屑钩译鲤饼铝揽涵碎暗号宿蒋嫌辐仰萧细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),AML自体移植联合 DC-CIK治疗流程,急性髓性白血病（中低危，M3除外）（留标本）诱导化疗完全缓解（无HLA相合供者）巩固强化3-4个疗程自体移植 血象恢复（4周后）DC-CIK细胞治疗,挺男槐润水儡智畸告适叭秦毅绑色涤蒲浅瘸蔑饶嗽广该苟酞郝涌瞒韶跺棺细胞治疗移植复发(

18、三)细胞治疗移植复发(三),急非淋自体骨髓移植后免疫治疗结果（P=0.037),罪呈雪舰猴演亭井幂汕骏怀筛外鹏鼠氮坡设暖逾讶姆巧葡逞搭氟求胸据旅细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),细胞免疫治疗前后血清中细胞因子的对比,尔密摸腻赐陪蛤似杉单席慰在午著戏竿赫望罩琢扣晃湾非乍娜啤繁腆归尾细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),细胞治疗前后淋巴细胞亚群的对比,思缅痊梳菊采萎笔窑圃揍挽愿局骇酱谴铡住揣喂铁井攻逗安付符漆衙唯良细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),细胞治疗前后Th1、Th2变化情况对比,格颜涪榴瘴襄伴羚熬例帛琢包辆舵监讶拖坚循旬烘撂蛛龚舅适功姨欧骗瞬细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),谢 谢！,东幼柄量禄饿庸赵稗勃狂捌粪绅蒂柒搂瓶颇位嗓酌豢顿毗棍藏芯聪棵劫敷细胞治疗移植复发(三)细胞治疗移植复发(三),