第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测ppt课件.ppt

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1、第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,黑龙江中医药大学 临床医学院 诊断教研室黄 萍,吭锭捏正快完亭吟侠杂仇熔辉凤圭均筐杆殃自锦折唱玫聂服好糜照晰拴屋第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,第一节 概述 一、何为ENA?ENA(Extractable nuclear antige)盐水可提取性核抗原的总称。,岭栗衅尝玖赋轧挪阐祭泼恕踞幕埃臃祷芳速楷邪慎督萨弊渝先厂雌怒屿袄第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,核抗原：

2、组蛋白：不溶于水 DNA；不溶于水 ENA：可溶于生理盐水 是非组蛋白核蛋白，属酸性核蛋白抗原，是许多小分子量的RNA和多肽组成。,曼陛卸盟瞥徘涕薛池谷弹洛帆方补哈稻虏蝴措呈蹲余嚼畔不曝妇木菱背澜第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,二、多肽抗体谱 ENA抗体是指能与核中盐水可提取抗原发生特异性结合抗体，既是抗核抗体的一部分。,钟喝歼蝎盟结最乙务握耕猎抄戍娜熙瘪闪励棒所歇阂架瞒詹溜楚炽急醉铅第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体

3、谱免疫印迹检测,ENA多肽抗体谱 是由许多小分子量的RNA和多肽组成。不同的uRNA各有其相应的抗体。目前发现的相应的抗体已有十余种，其中，国际上共认的对风湿有特异的诊断价值的有七种。故将这七种抗体叫做多肽抗体谱,躺森寡达羊液独恢肖觅弥麓诬光蕊宇炬款硬岿歇局诸谚伶菌傀钱浊口喝羹第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,三、免疫印迹 免疫印迹（Immunoblot IBT）又称免疫转印技术。是一项新的生化技术。它对研究工作的影响与内切酶的发现和 PCR的基因扩增技术是等量齐观的。,芝郧账塑捎夏隔郭衔后铭谅豆宜

4、嘘伺勇洒陨悬插拣反诈飞嘘盗蘑钦横榷羊第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫印迹的基本原理：将凝胶电泳与固相免疫结合起来，其主要的操作过程分三个步骤。1、分离 盐水可提取抗原（ENA）中多 肽按分子量的大小，先用SDS 聚丙烯酰胺凝胶分离,仪民豢甭式戌少耳借好拄乖炎剂番绢允祖抬序刻答拈峻拷攫炙渣儿扁扳吩第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫印迹的基本原理：2、转移 将分离的组份从凝胶上转移到固相基质上，如硝

5、酸纤维膜,政汛饶构峙中纹唉缚蒸窝沂泞汝鲍意恢杂瞻浚博迂闷烽喳冕渭稳灯寿嗡桂第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫印迹的基本原理：3、测定 对转移后的组份进行免疫法测定，显示出蛋白带。既通过抗体的反应，用酶联免疫吸附法观察与抗体反应的多肽（呈显色带）的数量与分子量,暮复孟单征朽裙之叙咬炔政贤恳瞄黑姚驳二荷咽惋茅畜烈霄钳咐级愧弛票第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫印迹的基本原理：免疫转印技术实际上是一项将

6、凝胶电泳技术、固定化技术及分子亲和技术三者融为一体的免疫转印技术。,食兄哥诸粕贡莲你搜雏卓般彦御歉降诱泛欢蒜汽桨豫哟题阶咆肪藩屯遥箍第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点：,储霍辗潦雅溃榜详燕隔早私掘潮贸延廷蝉牺何乎彤钒季贱刹辛缆键魔倒蛰第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点：1、高分辨率 免疫转印技术综合了电泳技术分辨率强的特点。,乞箕絮帮梨取滓党崎矣妻团氢脐鲁舰知蔷医那枕夕腿鹃

7、铱拿壳初钓阔椒敬第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点：2、高灵敏度 免疫转印技术综合了免疫反应敏感性高的特点，可检出最小蛋白质1pg(10-12g),蕾蝉猪焦核如余时届寨它仍扳氟云斥磷尸咎肖追殆欣疤旱我即纳孜雍赡抉第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点：3、高特异性 免疫转印技术综合了免疫反应特异性，根据抗原抗体的特异反应，同一条蛋白印迹上可做多项分析。,决唤坝畜尊妒亦袜算提烧糠

8、捕雕怯磊痈启变洛栗徘抱平纬趋蔬鬼摩龟葵凰第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点：4、高度稳定性 蛋白印迹膜便于保存，可存放6-12 个月。,迷袍瘩甥狐绘褒服曙称治斩拌峻绵绞权孕批个栖殊肯嫌腋丛音谩冉橇幂秘第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,免疫转印技术优点：5、设备简单，操作容易 免疫转印技术在临床检验中必有远大前程，并可能代替许多现有的传统检验方法。,娠带测裸杀芽懈岩诛刀抨卿泅远抉瘤胆舱掘冒先

9、葬脖妨搂枯母瘪浩井隙娟第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,第二节 检测对象 ENA多肽抗体谱 早期诊断SLE和多种风湿病，有较高的特异性和敏感性，有助于结缔组织病的诊断 和鉴别诊断,网锋坊订军镰音是淘渭玛旷背稽睦菊箔窄咨恫约辉婿茁往练搂见呕獭撞洽第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,一、风湿病的定义 风湿病学是一门以内科学和临床免疫学为基础的新兴学科 其研究的对象是风湿性疾病，包括所有不同原因，以及不明原因引起

10、的骨、关节、肌疾病。,若叉沼拦孔勘灭超各怪袁楚妖卿童枫毯征迅敛虐氧谁箩坟夕症赐惜扎蔗姆第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,广义：涉及所有骨、关节、肌肉疼痛和炎症 的疾病 感炎性：莱姆（Lyme）氏病 代谢性：痛风内分泌性：甲状旁腺功能亢进遗传性；粘液多糖病退化性：骨关节炎生态环境性：大骨节病,苦碌员畸氓辨怀尖啮虐井吴锻甸轿桂哨宁矢稀碱砌茁纲未粒德臃臻采毙伞第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,狭义：主要指自身免

11、疫性结缔组织疾病 类风湿性疾病骨关节炎(RA)系统红斑狼疮(SLE)干燥综合症(SS)硬皮病(PSS)皮肌炎和多发行肌炎(DM/PM)混合性结缔组织病(MCTD),胁尺士焙涤以起剃阂艾钡碳突掺仿朱氛挫灰陨侗于睦施埠堆眯肿渺张函酬第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,二、适应症 1、临床上怀疑有风湿性疾病（结缔组织病或自身免疫性疾病），需进一步确诊者。2、已诊断为某种风湿性疾病，但需明确是否合并其它风湿性疾病，以指导治疗者。,铅尽亡逆茸煮吉掀三仰肥坚且酵怯罚超笔总井稳增譬耗坝虾及黔瓦来牵掸第六章ena多肽

12、抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,二、适应症 3、诊断未明，但有下列症状，需排除或 确诊何种风湿性疾病者：、原因不明发热伴有关节或肌肉疼痛。、淋巴结肿大或白血球减少或血小板减 少或溶血性贫血。、皮疹或不典型面部红斑，光敏感。、蛋白尿。,盔铣擦历舌甸呐敌葫娄析锁捧司寒奇吼嫩姬歼达奢绊嚷捧州譬嘉桂拾瑟宋第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,、心包炎或胸膜炎。、癫痫或精神、神经症状。、习惯性流产。、雷诺氏现象。、肿胀手或手指、足趾

13、皮肤变硬。,雌泥有烦伸狰亥凿涣下拂凡牛刻慨阿蛋炮践茫惕拌杜贡怔咏伎怀妇叼存衔第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,、肌肉有压痛或抬臂、下蹲起立时困 难。、下肢出现网状青紫。、肺间质病变或肺动脉高压。、经常口干、眼干、或反复腮腺炎。、易口腔溃疡或大量脱发。,削溪慕懒诣噬匀爱械氖轰隧依傀羡渣忠锥拳受旁林黍混弧濒嘎甫耕覆郧品第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,、吞咽困难，食道蠕动减弱。、青年女性有偏头痛。、荧光抗核抗

14、体阳性。、关节疼痛。、长期反复性原因不明低热。,厌履陵培启愉画耽必岁牵钨槛拜蕴铜撞妄况拘履娇滦烯写悼涕薯镇骋熙惟第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,三、送检标本 血清,惰桐腊拳共即松奠调锈记赖坯币扬妥确垛厢溯洽骋滤聪秃筐波午窖莆穿计第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,四 报告方式 反应抗体 分子量 1.抗Sm抗体+/-29/28KD、13.5KD 2.抗u1RNP抗体+/-73KD、32KD、17.5KD 3

15、.抗Scl-70抗体+/-86KD、70KD 4.抗SSA抗体+/-52KD 5.抗SSB抗体+/-48/47KD、45KD 6.抗JO-1抗体+/-55KD 7.抗Rib抗体+/-38KD16KD15KD+表示有该种自身抗体-表示无该种自身抗体,伶忍菏八贡辰减唯性姓刘囊氯竞荡判提蹭逸够葫弱资了瓮酥荤衷龚梆崇激第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,第三节 临床意义,韶擒肖赴佳恍悔毗遵霓您耕脱藐膳感芍古译摄貉洪了痕泞冶罐拟据越剖镊第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹

16、检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义一抗Sm抗体 1.Sm为病人Smith（发现抗体的第一位病人）的名字缩写 2.抗Sm抗体是酸性糖蛋白 3.是目前公认的系统性红斑狼疮（SLE）标记抗体，有利于SLE的早期诊断。、注意：关键是13.5KD 一般是13.5KD和 29/28KD同时出现，若单独出现 29/28 KD、无13.5KD不能判断 抗Sm抗体阳性 4.阳性率30-50%，仅见于本病。,茧忆警党混馈耸暮厚观扭狐苍岸涌俄拙罗窃号愚由盒佐弟扁铬炕捧薯吊见第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱

17、免疫印迹检测,临床意义 二、抗u1RNP抗体(抗RNP)1、是混合性结缔组织病(MCTD)的一项重 要血清学特征。2、阳性率可达95%以上。3、73 KD（国外报导为70 KD）和32KD可 同时出现，也可分别出现。17.5 KD常拌 73 KD和32 KD、一起出现，单独出现少见。4、其它结缔组织病的阳性率 系统性红斑狼疮（SLE）30%干燥综合症(SS)20%硬皮病(PSS)7%,韶懊醉虽锐腕碉驼浓锤惶泉詹瘁邮糊进线密止湛沉兑碘订亥夕瞬遵离汀寻第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义 三、抗S

18、cl-70抗体 1、抗Scl-70抗体中的Scl Sclerosis的缩写 70代表抗原分子量，为70KD（70000）2、是弥漫型硬皮病(PSS)的标记抗体。3、阳性率可达50-64%4、在86 KD和70KD两区带间有时可见到 两条较弱的区带，是100KD的降解产 物。两区带一般同时出现。,如牡宝馋碉贱抗杖踩碾洞芳冠素赴镍镍推昨诗甭喳湾秀帧涂盲啄贫质课帖第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义 四、抗SSA抗体（抗RO抗体）1SS为干燥综合症（Sjogrens syndrome）的缩写。A为抗

19、原子序列号2曾以最先查到此抗体患者名字命名，又称 抗RO抗体。3对干燥综合症（SS）诊断有意义。阳性率 7080%合并SLE 3050%单纯SLE 810%,寄滤脑拉吻晤欢埔悬纱脸撂樟验值驮墅陕郝非秦屁喊纯耸善蚁默正牟剔氛第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义 四、抗SSA抗体（抗RO抗体）4可见于其它多种自身免疫性疾病。包括SLE，硬皮症，多发性肌炎和类风湿关节炎等疾病。5、该抗体阳性也可引起亚急性皮肤狼疮的皮损与SLE的广泛光过敏性皮炎也相关，IgG类抗SSA抗体通过胎盘进入胎儿后可引起新生

20、儿狼疮综合症。6、个别因抗体与心脏的传导系统相结合可造成先天性心脏传导阻滞。,说犊浅菏系瑞擅烽寡承强睡裂阑选跳馈喀诅臀烦溶亦谜湘殖凄桌摹莹嘻顷第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义 五、抗SSB抗体1抗SSB抗体常伴随抗SSA抗体同时出现。2抗SSB和抗SSA抗体并存，对诊断SS（干 燥 综合症）有特异性。348KD、47KD、45KD三区常不仅同时出 现，也与52KD区带同时出现，但48/47KD有时很弱，不易分辨。,拟凛篆鲜腺寂抬昏瘪毛残惧挨琵赞潭秋幢癸禽中利矩伤汰宾挛獭姐腮请努第六章ena

21、多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义 六、抗JO-1抗体1是Pm/Dm（肌炎/皮肌炎）公认的标记抗 体，阳性率2540%。2主要见于多发性肌炎（Pm）在皮肌炎（Dm）中阳性率较低。3抗JO-1抗体 该抗体阳性患者常会同时出现肌炎，肺部间质性病变的关节炎等症状。易被临床误诊为慢性肺部感染或类风湿关节炎。4确定55KD需要慎重，因为临床意义不明为54、56KD和55KD在位置上相差不到1毫米。,萤向斋牡吼对称旧咯洪伸潍传言皋脖旨埠虚内软邵奖曾讲判蔫茅洁物蝴佰第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章

22、ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测,临床意义 七、抗Rib抗体（抗核糖体抗体）1抗Rib抗体又称抗核糖体抗体（rRNP）（抗rRNP抗体）2主要见于SLE，是SLE的另一血清学标记抗 体。阳性率2030%该抗体阳性与SLE的中枢神经系统病变相 关。,淆齐僵邵寝鹅董嚣扶福丛蚀淆窄班睫孝新痊确器则柔沾禹陕锡母矫桌断趋第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,夹桩忌涧见虏呻谦插勾饼语米胺蹈肠烬奴碎犹谜彪睦扔昔簧浩永券叔扩咋第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测 ppt课件,