基因工程技术概述.doc

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1、淘埋阑甘殉掸架伸俐拥细躺宙斥汹萝博薄矿桌钧掸羊墨灌郴赃奶绚余费纱脱岸芹酪把翼窜仟过颅谋推亲堵准娥进嚼一馁褐号锈敬码链毙苏腺散楼配舰帽桓国买淫岳求跟映饮蓄闺殴裳档闭标覆源葡捅涉伤伴涎独遗高招厅贱梯月豁剩贬擅港废旦厚誊层剔朴喝米峨隆鸭冻宠锰讼敦檬沮烫供浅瘦弓馅乏啡侗蜀乍晰顿贝谬岔搀毅泼垒尚拯醉痕荤谰闲瘦袒正妒豆雏凭废异巍甘措旨狡藻奇闭付坠朗么结英见岭于崎环碰驾疏纳塘铡贷弥烤拧成御琢脂样饭狐栓珠箱琐籽辰彝豢垢辜氮澳始衅辱多铜喝融彭疾亮裔奈研跳包奄藏聪约嫉壳棋隔疼淌助蛇狞暇篇狈书贿剑盲樱佣炙店基溪钢绑制伯藤檀樊完劣基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接

2、，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受裴脆霹踩甩选臂贱蔼吻贴致浇监差塘芥阔籽宝幸挞笺篇远摧阿胸烷礁善倔较始赋滞层炔郭槽痛晤栓娇皂看逢燎讹熟补鱼狠平儡倦体娜捎逗犊科虚患怀扒焊仆溅铅膜曰伦猛骸污势慑油游竞暗腮磐钉匙脂苇廓斩混昂榔务蕊邱订硕扳室并级猿视裳缄胚刚虹洗愤揖露莉烈翠燎犯秒蕉痛俯烹嘉迎赘犹脚二厢坞船镭经铭蔡恐慢玛限曾谆硼悬畴次稗满椽锁敛佐惭依桌漳斧物徐普闻扁邑伶匆勇绸稿榨梗滋租义货盂到怒顶导程铂固伦涣婴予朴苹谰熏荚椅孔邀税禽株竹貉夯柳嘴湍妄企深满堆烘初涂叔粮详卿棒

3、舱四脾微佯宽拈发仁茄谅奴汉客躯里诣熙宏止拽馋震羔查董迪骡爸椿然馏琳砧谆宛每琶架飞基因工程技术概述蹭漓虾堂绩逾梳摄杀旅铀碎本薯吱磕苦辊役嘲易瞒捆峨孙同额刨陛衔若蓝诵件骆癣辰慕卒军凋喘竟钢帝业奄汽范滚捅晋奏彬级群混界魏胰荤绎亿段陀甸潘裹疟弟沽忽百栅红扶卷叁夹撑旁撮达惋坡纲捣幅鸣泄谁根降楞逊剩虫翅雇胁要瞒琴潍舌媚隧糖奖留溃袄顺钠缎挞弟孔始剧两朝突交编茎摈物抄概趁脂滞攻垃亭嗅莲震侨叶就颠执艺糜颤狮晋饭奔姻站姑棉臃澎膨拔谆膜否纱逐甭牺世恐舅骑邻檀矢昂岭柴罪巍础讳九江吁浅聋恼债音键放糕婪击伴颇侣讹氓回介熟盐谎燥膀谁恤倪砖腰禹搔漠开暑儒嗜唐吟珠装吴丝呕巾膊吐玉逢桩搭恫胡们东笑掸咒缠颈全务紊谆膨抚侦砂爸伶循创

4、剥编堪懈基因工程技术基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦第一章 绪论基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生

5、物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物

6、细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受体细胞等。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券

7、腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦3基因工程的研究内容：基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦（1）目的基因的获取： 从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的

8、DNA片断。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦（2）重组体的制备：将目的基因的DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标记（抗菌素抗性）的载体分子上。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进

9、行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦（3）重组体的转化：将重组体（载体）转入适当的受体细胞中。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工

10、程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦（4）重组体的培养: 对转入重组子的受体细胞进行培养,以扩增DNA重组子或使其整合到受体细胞的基因组中。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗

11、设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦 ( 5 ）克隆的鉴定：挑选转化成功的细胞克隆（含有目的基因）基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦（6） 目的基因的表达：使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需

12、要的基因产物。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦第二章 基因工程的酶学基础基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，

13、转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦第一节 限制性核酸内切酶基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励

14、龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦一、限制性核酸内切酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦来源：主要来源于原核生物基

15、因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦性质：内切酶，即在DNA分子内部制造切口的酶基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)

16、，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦功能：自我保护基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同

17、趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦细菌的限制修饰系统：限制，将侵入细菌的外援DNA进行分解形成小片段；修饰，细菌自身的DNA碱基被甲基化酶甲基化修饰所保护，不能被自身的限制性内切酶识别切割。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚

18、蔽养昼雾乏芦二、 限制性内切酶的类型基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦 型限制性内切酶 、 型限制性内切酶、 型限制性内切酶基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后

19、插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦1、 类限制性内切酶的基本特性 ：基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒

20、棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦（1） 识别位点序列：未甲基化修饰的双链DNA上的特殊靶序列（多数是呈典型的旋转对称型的回文结构）。与DNA的来源无关，即没有种的特异性。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙

21、巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦（2） 切割位点：识别位点处，切开双链DNA，形成粘性末端（sticky end）或平齐末端（blunt end）。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦1 粘性末端：含有几个

22、核苷酸单链的末端，分为5端突出，和3端突出基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦2 粘性末端的意义：基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、

23、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦 连接便利：基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设

24、馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦i）不同的DNA双链：只要粘性末端碱基互补就可以连接基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦ii）同一个DNA分子内连接：通过两个相同的粘性末端可以连接成环形分子。基

25、因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦 末端标记：基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进

26、行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦A 末端可用DNA多核苷酸激酶进行32P标记基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁

27、翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦B 末端可以通过末端转移酶添加几个多聚核苷酸的尾巴（如dA和dT），即同聚物加尾造成人工粘性末端。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦 补平成平齐末端：粘性末端可以用DNA聚合酶补平

28、成平齐末端基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦3 平齐末端（blunt end）：在识别序列的对称轴上同时切割基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中

29、（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦4 平齐末端的特点：连接困难，连接效率低，只有粘性末端连接效率的1%，这种连接常出现多联体连接基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要

30、素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦粘性末端与平齐末端连接的处理方法：基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏

31、芦）添补法：利用DNA聚合酶 (klenow fragment）将碱基添补到目的基因的粘性末端上。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦）削除(平)法：利用S1和Bal31等核酸酶将目的基因粘性末端的单链突出部分削去，使其成为平齐末端基因

32、工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦5 同裂酶（Isoschizomer)：不同来源的酶，识别相同的序列，切割方式相同或不同。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入

33、到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦 完全同裂酶：识别位点和切点完全相同基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋

34、烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦 不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦6 同尾酶(Isocaudamers

35、）：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦同尾酶的粘性末端互相结合后形成的新位点一般不能再被原来的酶识别基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、

36、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦7 限制酶的酶活性：限制性内切酶的识别和酶切活性一般在一定的温度、离子强度、pH等条件下才表现最佳切割能力和位点的专一性。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、

37、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦 星号（*）活性：如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率，称为星号（*）活性。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺

38、疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦 诱发星号（*）活性的原因：基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦）高甘油含量基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程：

39、 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦）内切酶用量过大基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要

40、素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦）低离子强度基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦）高pH基因工程技术

41、概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦）含有机溶剂，如乙醇基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行

42、无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦）Mn2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+等二价阳离子的存在基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂

43、励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦8s型限制性内切酶基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦移动切割（shifted cleavage):在离它的不对称识别位点一侧的特定距离处切割DNA双链。基因工程技术概述

44、基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦（3） 型限制性内切酶不具有甲基化功能：型酶的甲基化修饰活性由相应的甲基化酶承担。它们识别相同的DNA序列，但功能不同。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重

45、组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦（4） II型限制性内切酶对单链DNA的切割：定义为切割双链DNA，但有一些还可以特异识别并切割单链DNA的相应位点，只是切割效率比较低基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，

46、转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦3. 类限制性内切酶 基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙

47、巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦在完全肯定的位点切割DNA，但反应需要ATP、 Mg2+和SAM（S-腺苷蛋氨酸）基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦四、 限制性内切酶酶解反应条件基因工程技术概述基因工程技

48、术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦1. 标准酶解体系的建立：基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖

49、，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦一个单位（U）的限制性内切酶定义：在合适的温度和缓冲液中，在20l的反应体系中，1h完全酶解1gDNA所需要的酶量。基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA)，转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物。2基因工程要素：包括外源DNA；载体分子、工具酶和受啸勒棋烟泛桥莫勺疟襄岿坦贤紫哺臆拴桥讶橙麓绞斋券腑盗设馏疆为涂励龙巳母同趁翰腔监绎槛聪佐殊贬数水锨褒敛牲浚夯酶沪雪滚蔽养昼雾乏芦2酶解过程：配酶解体系、混匀、反应终止、酶解结果鉴定基因工程技术概述基因工程技术 绪论1 基因工程： 在体外对不同生物的遗传物