体细胞杂交文档资料.ppt

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1、遗传育种学Genetic thremmatology遗传育种学Genetic thremmatologyPEG法对海藻种间原生质体的融合也有效。近几年，PEG法已使三组种间海藻原生质体融合成功，它们是：双星藻和纤细水绵、长石莼和囊礁膜、条斑紫菜和肠浒苔。张大力用PEG诱导长石莼和囊礁膜原生质体的融合研究中观察到，原生质体的质且好坏直接影响融合率的高低，甚至决定融合的成败，只有用幼嫩新鲜的藻体制备的原生质体进行融合才能成功。遗传育种学Genetic thremmatology,遗传育种学Genetic thremmatology遗传育种学Genetic thremmatology聚乙二醇化学融合

2、法特点 聚乙二醇具有广泛的适应性、简便、快速、高效的优点。缺点：PEG诱导细胞融合的有效浓度范围很窄，最适浓度为50-55%，此时对细胞毒性很大PEG诱导悬浮细胞的融合率远远低于诱导同样细胞单层培养时的融合率。PEG诱导产生的杂交细胞频率仍在10-5较这一很低水平。容易形成多细胞融合体，不容易在显微镜下观察细胞融合的过程。遗传育种学Genetic thremmatology,1.3 物理融合优点：,1.3.1 电融合法自从Zimmermann（1978）等和Senda（1979）等报道应用脉冲电流诱导植物原生质体融合取得成功以来，为电融合技术发展奠定了基础。,诱导率较高：是PEG的100倍操作

3、简单、快速，不存在细胞毒性问题可以显微镜观察融合过程缺点：采用高压电脉冲，使细胞内部某些低电离电位分子可能发生离解而造成“电损伤”，影响融合细胞的存活,2,遗传育种学Genetic thremmatology电融合实例刘沛霖以大鳞副泥鳅的囊胚细胞为材料，在915室温下，电场液用0.02mol/L甘露醇加1mmol/L氯化钙配成，细胞密度为（2.5 3）X104，细胞膜紧密接触2 5min，脉冲处理13次，时间常数10 50us，融合率为46.72%，细胞存活率达88.6%遗传育种学Genetic thremmatology,遗传育种学Genetic thremmatology电融合装置电路方框

4、原理图遗传育种学Genetic thremmatology,1.3.2 激光融合优点：无毒，融合体成活率高，能保证只有所选择的细胞或原生质体得到融合。缺点：每次只能产生一个融合体，激光微束系统的设备昂贵。,遗传育种学Genetic thremmatology三、细胞融合过程1.点接触：2个细胞表面结合在一起的凝集状态。2.面接触：加入PEG等融合物质，则进入面融,遗传育种学Genetic thremmatology 异核体 同核体,合状态，细胞呈斜球形。3.融合：双方的细胞质和细胞膜完全合并，结果形成一个圆球形或卵圆形融合细胞，即异核体。3,遗传育种学Genetic thremmatology

5、,遗传育种学Genetic thremmatology,四、体细胞杂交应用4.2、植物育种,4.1 微生物育种我国的邢孔昭等(1988)将巴龙霉素产生菌与新霉家产生菌的高产变异株进行了种间原生质体融合，获得了比区龙霉素产生菌原始菌株单依产量(300ugmL)高5-6倍的重组体菌株。遗传育种学Genetic thremmatology4.3 水产生物方面的应用张大力等将长石莼与囊礁膜原生质体融合，并将其融合体培养了20天，形成自养细胞团。Fujita将淡红紫色的野生型条斑紫菜与绿色突变型的条斑紫菜的原生质体融合，培育出长达60cm左右的嵌合叶状体。,马铃薯与番茄、拟南芥菜与本油菜等是些属间有性不亲和的组合，经细胞融合技术和组织培养技术，已培养出前所未有的再生植株遗传育种学Genetic thremmatology在鱼类，易泳兰等把大鳞副泥瞅鳗尾泥鳅杂交囊胚细胞与大鳞副泥鳅卵融合，培育了15.7(6尾)的融合鱼。将鲤鱼囊胚细胞与红鲫鱼卵融合，培育了3.5%融合鱼苗，工作还表明，鱼类囊胚细胞与末受精卵的电融合可以简化细胞核移植操作过程，一次可以处理卵数相当于一次核移植卵数的2-3倍。,4,