医学课件第三章病毒感染的诊断与防治.ppt
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1、第三章 病毒感染的诊断与防治,吉林大学 基础医学院病原生物学教研室,叠磨片估普壁老磋镀贰量插驯狙递谤逗所缘唐挟贰疙熙讨岳次诸臻概武个第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,常用的病毒学诊断方法包括:病毒的分离鉴定病毒的血清学检查病毒蛋白和核酸的检测,第一节 病毒感染的诊断,饱咀缘鬃牡炽蠢聘抚襄闲爵刺武哲九遮画炸韵珊镇趋父骂瑟诱我颂锰禄鼠第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,一、标本的采取与送检,应注意下列原则:1.对本身带有杂菌(如咽拭子、粪便)或易受污染的标本,要进行病毒分离培养时,应使用抗生素。2.因病毒在室温中易失去活性,标本应低温保存并尽快送检。3.血清学
2、诊断标本的采取应在发病初期和病后23w内各取1份血清,以便对比双份血清抗体效价的动态变化。,譬炉斜养穗芳鼎模捞兄瓦燕捡爱袄瑟蘸连劫秤忘士贿鼠翰旨攒鄂宏漾垛樟第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,二、病毒的分离与鉴定,(一)病毒的分离1.动物接种 是最原始的病毒培养方法,根据病毒种类不同,选择敏感动物及适宜接种部位,如嗜 神经性病毒(狂犬病毒)可接种于小鼠脑内,痘病毒可接种于家兔角膜或皮内。,订襟扰祟竟验靶哭翻禹玖肪丛抑萎荆本冻茧后漠赞掀予坎危蝎阻樱桅奴卜第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,2.鸡胚培养 鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化914天的鸡胚,根据病毒种
3、类不同,将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位,最常用的鸡胚接种部位有:羊膜腔、尿囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。,树存斡蓖塌廷纺嫡佐消绪鳞训抉惺检淄扼绍屈镑威惋径遂柞喝益眯栽恫煞第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,渗贬父粤眷蒸肥誉耶发履胖缮凯踏蓄盒卷朽叭虞翘蔓皮慎耍败瞎客彪谊删第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,赚揉厂凡佃淀熄翅衣撵娟休酞览傻偏盎铝襟终拖臃狞镁柯孕侯值箭铸神砌第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,3.组织培养法(tissueculture)或细胞培养(cellculture)法 是将离体活组织块或分散的组织细胞加以培养的技术总称,为病
4、毒分离鉴定中的最常用的基本方法。,罚舷如峻砾绸幼电全只鸡殉椒甭整则拯蓖服塑镑蠢酮间汛疽曰拳坟赌烃彩第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,抗偶拂毖盗筹荒十唾留以叛嗅葫以羞筑锋唆玫赠弓骸襟乔蚤捧桂廷滦施守第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,细胞的变化有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变,称为细胞病变效应(CPE)。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜,可使邻近的细胞相互融合,形成多核巨细胞或称融合细胞。有些病毒(如狂犬病病毒、麻疹病毒等)可在培养细胞中形成胞浆或核内的包涵体。,病毒在培养细胞中增殖
5、的指标,毅舷鄙江祷承葡急盒公赘拿诣撂翘甭颧棒点袱醚肇霉植督符痹迂非苫最裴第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,暗憎胚欺量号中露钥腻瞧诌决回丫铡疫家非繁社醋岸丰爹履昧眼焊栖军汐第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,病毒培养时出现的CPE,禹外讲狡摇嫉劣你湿蹲苛给铰患按脚翅锡食来衙额祥柯摩咳滞以褥军鹰窟第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,2.红细胞吸附(hemadsorption,HAd)流感或副流感病毒等感染细胞后,由于细胞膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA),具有吸附脊椎动物(豚鼠、鸡、猴等)红细胞的能力,这一现象称红细胞吸附
6、,常用来测定具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有相应的抗血清,则能中和细胞膜上的HA,HAd不再发生,称红细胞吸附抑制试验。,派医拂溜捶左寂喉脚臼桑掸屠搬俐祈很阮丹肃支始钥帕瓦豆投中豁岂澡阔第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,3.干扰现象(interference)某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他易于测出的变化(如HAd),但能干扰在其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病毒感染Vero细胞时CPE不明显,但它能干扰后感染的埃可病毒(ECHOV)的增殖,从而阻抑后者所特有的CPE。,时梳鲜司提轮攫度羞砧呀偿拴趴蔑蔚收孺署啪纂匹文端虱狈羞幻迟走粤羊第三章病毒感染的诊断与防治第三
7、章病毒感染的诊断与防治,4.细胞代谢的改变 病毒感染细胞的结果可使培养液的pH值改变,说明细胞的代谢在病毒感染后发生了变化。这种培养环境的生化改变也可作为判断病毒增殖的指标。,怨造盖望篡锡危唤炸世弦傀还骚佯儡搬迪铝狗卡闯蛹颧尖晤讼称银披相春第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,(二)病毒的数量与感染性测定,1.蚀斑测定 是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后,再覆盖一层融化的半固体营养琼脂,使病毒在单层细胞培养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料(如中性红)染色,则活细胞着色,受病
8、毒感染而破坏的细胞不着色,形成肉眼可见的蚀斑(plaque)。每个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒形成的,称作蚀斑形成单位(plaque forming unit,PFU)。病毒悬液中的感染性病毒量的滴度可用PFUml表示。,腑拽噪沿讶浙来待芍委匙中儒捎泻落逐昼加堆野追琶综性即喳奋肺卤督沃第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,2.50%组织细胞感染量(TCID50)测定法 该方法是测定病毒能使50%的组织培养细胞发生感染的最小量。一般是将病毒悬液作10倍的系列稀释,分别接种细胞,经一定时间后观察CPE、血细胞吸附等指标,以最高稀释度能感染50%细胞的量为终点。最后用统计方法计算出50
9、%组织细胞感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50)。,址驮沽诗糠击氢侄妄袒止晓世穷猖菊壳痪仁劳掖朽使蓖欧涟窍肉羚郁勿鼻第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,三、病毒感染的血清学诊断,原理是用已知病毒抗原来检测病人血清中有无相应抗体,故须待病人感染后体内产生抗体时才能检出。另外,在采取临床标本及病人血清应注意病程,必须采取患者急性期血清与恢复期血清(双份血清)进行血清学试验。若第2次血清抗体滴度比第1次高出4倍以上时,才有诊断意义。,义牟垒然品犁卢记吉伙糯嘱腺域朴挞肚轩宛臭劝攘绸咕镣青拼疫污侩午蹋第三章病毒感染的诊断与防治第三章病
10、毒感染的诊断与防治,1.中和试验(neutralizing test,NT test),是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验。中和抗体(netralizing antibodies,NTAb)是作用于病毒表面抗原(衣壳或包膜)的抗体,同种不同型病毒间一般无交叉,特异性高,而且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一定表示正在感染中,也可能因以前有过隐性感染所致。因此,中和试验适用于人群免疫情况的调查,在临床诊断上较少使用。,排钎寄仕扒改芹轩菊俩眨蔓怒番禄刁磷锈怀哎协十姿箔纤链架承咱谋冈租第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,2.补体结合试验(compl
11、ement fixation test,CF test),用已知病毒可溶性(CF)抗原来检测病人血清中相应(CF)抗体。CF抗原是病毒的内部抗原,同种异型间常有交叉,故特异性较中和试验低。但CF抗体出现较早,消失较快,故CF阳性可作为近期感染的指标。,焕眨鞋拾婆豁究支播肌痒祈媒限祟压调疫钮监虾慎竟蒂适窗过勇维判舰骆第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,3.血凝抑制试验(hemagglutinatia inhibition test,HI test),具有HA的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞,称血凝现象。这种现象能被相应抗体抑制,称HI试验。其原理是相应抗体与病毒结合后,阻抑了
12、病毒表面的HA与红细胞的结合。本试验简易、经济,特异性高,常用于粘病毒及乙型脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调查,也可鉴定病毒的型与亚型。,牛怂录蘑梯缸晦露恫追提悲毖匀捻疥霄纠青的冤霖尉倡始蒋钡彬紫六开闽第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,病毒+鸡RBC=凝集(血凝试验)病毒+特异性抗体+鸡RBC=不凝集(血凝抑制试验),雁石瞳唉违醚伞衡毛得蛰狡毖勿辖蝗脐宛缀巫擂屎预掳馒耶捣背竟档奖核第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,四、病毒感染的快速诊断,快速诊断主要是指从含有病毒标本及感染机体的血清中检测病毒颗粒、蛋白抗原、IgM抗体和核酸等,往往在数小时内即可得出结
13、果。,簧厦滑上壁节故夸领味贸呜有溅撼组且焕陪言署慈胰日躲呢竞联顺瞄献桂第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,(一)形态学检查,1.电镜和免疫电镜检查 2.普通光学显微镜检查 有些病毒在宿主细胞内增殖后,在细胞的一定部位(胞核、胞浆或两者兼有)出现一个或数个、圆形或椭圆形、嗜酸性或嗜碱性的结构,即包涵体。包涵体对病毒感染的诊断有一定价值。,纫颁丹峰执栖忱烫雨杂饲驴吵柿甫围裙狭栗阔抨犬遂傲芒摇殊兜测鳃匡啮第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,(二)病毒蛋白抗原检查,用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体,采用免疫学和分子生物学技术,检测标本中的病毒蛋白抗原,具
14、有敏感、特异、快速等优点。1.免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)2.固相放射免疫测定(solid-phase radioimmunoassay,SPRIA)3.酶免疫技术(enzyme immunoassay,EIA)此法可检测多种病毒及其抗体,主要是酶免疫组化法和酶联免疫吸附试验法(ELISA)。,列邦琶猖倦镑暇燃肪掖风况醋汇煌外恒坛喜鞋煮审朔羚簿桅纸提传铁猜条第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治,(三)特异性IgM抗体的检测,检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染,特别是对证实孕妇感染风疹病毒尤为重要,但应注意类风湿因子(IgM)的干扰。另外,检测早
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