最新第六章 细菌的遗传变异PPT文档.ppt
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1、微生物是研究现代遗传学和其它许多主要的生物学基本理论问题中最热衷的研究对象。对微生物遗传规律的深入研究,不仅促进了现代分子生物学和生物工程学的发展,而且为育种工作提供了丰富的理论基础,促使育种工作从不自觉到自觉、从低效到高效、从随机到定向、从近缘杂交到远缘杂交的方向发展。,研究微生物遗传学的意义,一、遗传与变异的概念,遗传和变异是生物体的最本质的属性之一。遗传(heredity):亲代生物的性状在子代得到表现;亲代生物传递给子代一套实现与其相同形状的遗传信息。特点:具稳定性。遗传型(genotype):又称基因型,指某一生物个体所含有的全部基因的总和;-是一种内在可能性或潜力。遗传型+环境条件
2、 表型表型(phenotype):指生物体所具有的一切外表特征和内在特性的总和;-是一种现实存在,是具一定遗传型的生物在一定条件下所表现出的具体性状。,概述,变异(variation):生物体在外因或内因的作用下,遗传物质的结构或数量发生改变。变异的特点:a.在群体中以极低的几率出现,(一般为10-610-10);b.形状变化的幅度大;c.变化后形成的新性状是稳定的,可遗传的。,例如:粘质沙雷氏菌:在25下培养,产生深红色的灵杆菌素;在37下培养,不产生色素;如果重新将温度降到25,又恢复产色素的能力。,细菌在培养基上的生长表现,粘质沙雷氏菌的菌落特征,二、遗传变异的物质基础,种质连续理论:1
3、883-1889年间Weissmann提出。认为遗传物质是一种具有特定分子结构的化合物。基因学说:1933年摩尔根(Thomas Hunt Morgan)发现了染色体,并证明基因在染色体上呈直线排列,提出了基因学说,使得遗传物质基础的范围缩小到染色体上。DNA是遗传变异的物质基础的证明:利用微生物为实验对象进行的三个著名实验的论证(肺炎球菌的转化试验、噬菌体感染试验、病毒的拆开与重建试验),才使人们普遍接受核酸才是真正的遗传物质。,经典试验1.肺炎链球菌的转化试验,格里菲斯,加S菌DNA加S菌DNA及DNA酶以外的酶加S菌的DNA和DNA酶加S菌的RNA加S菌的蛋白质加S菌的荚膜多糖,活R菌,
4、长出S菌,只有R菌,1944年O.T.Avery、C.M.MacLeod和M。McCarty从热死S型S.pneumoniae中提纯了可能作为转化因子的各种成分,并在离体条件下进行了转化试验:,只有S型细菌的DNA才能将S.pneumoniae的R型转化为S型。且DNA纯度越高,转化效率也越高。说明S型菌株转移给R型菌株的,是遗传因子。,分离后的S型细胞物质对R型细胞的转化,结论,细胞生物的遗传物质是双链DNA病毒的遗传物质可以是单链的或双链的DNA或RNA,即:ssDNA,dsDNA,ssRNA或dsRNA。,遗传物质的复制-双链DNA的复制(半保留复制),原核生物的染色体,核外DNA的种类
5、,核外染色体,真核生物的“质粒”原核生物的质粒,线粒体细胞质基因叶绿体(质体)中心体动 体共生生物:卡巴颗粒酵母菌的2m质粒,F因子R因子Col质粒Ti质粒巨大质粒降解性质粒,质 粒 质粒是细菌染色体外的遗传物质,多为环状双螺旋DNA分子。质粒可以自身复制,随宿主菌分裂传到子代菌体。在一定条件下,质粒可以转移,也可丢失。质粒是自行复制单位,有的需与核质染色体的复制同步,称为严紧型复制。,质粒编码细菌各种重要的生物学性状.致育质粒或F质粒;编码性菌毛 毒力质粒或Vi质粒:毒力因子 R质粒:对抗菌药物或重金属盐类的抗性.一种质粒可同时具有几种编码功能.,质粒示意图,细菌的质粒,几种代表性质粒:,1
6、.F因子(fertility factor):又称致育因子或性因子。存在于肠细菌属、假单胞菌属、嗜血杆菌、奈瑟氏球菌、链球菌等细菌中,决定性别。,最初发现于痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae),后来发现还存在于Salmonella、Vibrio、Bacillus、Pseudomonas和Staphylococcus中。“耐药性”,2.R因子(resistence factor),R100质粒(89kb)可使宿主对下列药物及重金属具有抗性:汞(mercuric ion,mer)四环素(tetracycline,tet)链霉素(Streptomycin,Str)、磺胺(Sulf
7、onamide,Su)、氯霉素(Chlorampenicol,Cm)、夫西地酸(fusidic acid,fus)并且负责这些抗性的基因是成簇地存在于抗性质粒上。,产大肠杆菌素因子。大肠杆菌素是由E.coli的某些菌株所分泌的细菌素,能通过抑制复制、转录、转译或能量代谢等而专一地杀死其它肠道细菌。其分子量约41048104Dalton。大肠杆菌素都是由Col因子编码的。凡带Col因子的菌株,由于质粒本身编码一种免疫蛋白,从而对大肠杆菌素有免疫作用,不受其伤害。,3.Col因子(colicinogenic factor),降解性质粒只在假单胞菌属中发现。它们的降解性质粒可为一系列能降解复杂物质的
8、酶编码,从而能利用一般细菌所难以分解的物质做碳源。这些质粒以其所分解的底物命名,例如有分解CAM(樟脑)质粒,XYL(二甲苯)质粒,SAL(水杨酸)质粒,MDL(扁桃酸)质粒,NAP(奈)质粒和TOL(甲苯)质粒等。,4.降解性质粒,即诱癌质粒。Ti质粒长200kb,是一个大型质粒。当前,Ti质粒已成为植物遗传工程研究中的重要载体。一些具有重要性状的外源基因可借DNA重组技术设法插入到Ti质粒中,并进一步使之整合到植物染色体上,以改变该植物的遗传性,达到培育植物优良品种的目的。,5.Ti质粒(tumor inducing plasmid),是近年来在Rhizobium(根瘤菌属)中发现的一种质
9、粒,分子量为200300106 Dalton,比一般质粒大几十倍到几百倍,故称巨大质粒,其上有一系列固氮基因。,6.巨大质粒(mega质粒),第一节常见的细菌变异现象,形态、结构变异毒力变异耐药性变异菌落变异生化特性变异,1.形态结构变异,3-6%食盐鼠疫杆菌多形态性(衰残型)。琼脂培基,形态结构变异,青霉素、溶菌酶正常形态细菌 L型变异 抗体或补体(部分或完全失去胞壁),正常霍乱弧菌,霍乱弧菌L型,形态结构变异,特殊结构的变异 42-43炭疽杆菌失去形成芽胞能力,毒性降低 10-20天 变形杆菌(H)0.1%石炭酸(O)迁徙生长 单个菌落,连续通过易感动物和其他微生物共生或被温和噬菌体感染。
10、例如魏氏梭菌与八叠球菌共生时毒力变强,无毒的白喉棒状杆菌被温和-噬菌体感染后产生白喉毒素,成为有毒细菌。,增强毒力的方法,2.毒力变异,毒力变异,棒状噬菌体白喉棒状杆菌 获得白喉毒素,减弱毒力的方法,通过非易感动物例如:马尔他强毒布氏杆菌连续通过鸡育成弱毒株;猪丹毒苗GC42系将强毒株通过豚鼠传370代后又通过鸡传42代育成弱毒。在较高温度下培养。强毒炭疽 42.5下培养弱毒 在含有某些特殊化学物质的培养基中培养。著名的 卡介苗BCG,在含有抗血清,噬菌体或抗生素的培养基中培养。长期的人工培养。在特殊气体条件下培养。如无荚膜炭疽芽胞苗是半强毒株在含50%血清的培养基上,在50%CO2的条件下选
11、育的。通过基因工程的方法。去除毒力基因可获得无毒力株。,3.耐药性变异,细菌对某种抗菌药物由敏感变成耐药的变异称为耐药性变异。金黄色葡萄球菌耐青霉素的菌株已从1946年的14%上升至目前的80%。有些细菌还表现为同时耐受多种抗菌药物,即多重耐药性,甚至产生药物依赖性。含链霉素培基痢疾杆菌依链株(耐药菌株)长期培养,4.菌落变异,光滑型粗糙型变异 S型(smooth)菌落:光滑,湿润,边缘整齐。R型(rough)菌落:菌落表面粗糙,枯干,边缘不整齐。一般来说,SR毒力由强变弱,但炭疽杆菌,结核分支杆菌,正常菌落为R型S型,毒力减弱,R菌落,S菌落,D菌落的变异,当细菌接触某些化学物质时如CuSO
12、4,LiCl形成细小菌落叫D菌落。(dwarf clone,侏儒菌落),5.生化特性变异,糖代谢能力的 变异营养成份的合成能力改变,第二节 细菌变异的机制,一、基因突变(mutation)指生物体的表型突然发生的可遗传的变化。染色体畸变点突变突变体(mutant)发生了突变的微生物细胞或菌株野生型(wild type)从自然界分离到的任何微生物在其发生突变前的 原始菌株,(一)突变的特点,不对应性:突变的性状与突变原因之间无直接的对应关系。自发性:突变可以在没有人为诱变因素处理下自发地产生。稀有性:突变率低且稳定。独立性:各种突变独立发生,不会互相影响。可诱发性:诱变剂可提高突变率。稳定性:变
13、异性状稳定可遗传。可逆性:从原始的野生型基因到变异株的突变称为正向突变(forward mutation),从突变株回到野生型的过程则称为回复突变或回变(back mutation或reverse mutation)。,(二)突变机制,诱变剂(mutagen):凡能提高突变率的任何理化因子,就称为诱变剂.种类:诱变剂的种类很多,作用方式多样。即使是同一种诱变剂,也常有几种作用方式。,诱发突变的机制,碱基置换(substitution),定义:对DNA来说,碱基的置换属于一种染色体的微小损伤(microlesion),它只涉及一对碱基被另一对碱基所置换。分类:转换(transition),即DN
14、A链中的一个嘌呤被另一个嘌呤或是一个嘧啶被另一个嘧啶所置换;颠换(transversion),即一个嘌呤被一个嘧啶,或是一个嘧啶被一个嘌呤所置换。,对某一具体诱变剂来说,即可同时引起转换与颠换,也可只具其中的一种功能。,1.点突变(point mutation),亚硝酸可以使碱基发生氧化脱氨作用 HNO2胞嘧啶(C)尿嘧啶(U)HNO2腺嘌呤(A)次黄嘌呤(H)HNO2鸟嘌呤(G)黄嘌呤(X)这些反应及形成物均可在DNA复制中产生影响,主要是使碱基对发生转换。,碱基转换的分子机制以亚硝酸为例,若干诱变剂的作用机制及诱变功能,移码突变(frame-shift mutation),指诱变剂使DNA
15、分子中增加(插入)或缺失一个或少数几个核苷酸,从而使该部位后面的全部遗传密码发生转录和转译错误的一类突变。由移码突变所产生的突变株,称为移码突变株(frame-shift mutant)。与染色体畸变相比,移码突变也只能算是DNA分子的微小损伤。,能诱发移码突变的几种代表性化合物,引起移码突变的诱变剂:主要是吖啶类染料,如吖啶黄、吖啶橙等等。这类化合物都是平面型的三环分子,它们的结构与一个嘌呤嘧啶对十分相似。,丫啶类化合物诱发的移码突变及其回复突变图示,2.染色体畸变(chromosomal aberration),某些理化因子,如X射线等的辐射及烷化剂、亚硝酸等,除了能引起点突变外,还可引起
16、DNA的大损伤(macrolesion)包括:染色体结构上的变化:缺失(deletion)重复(duplication)易位(translocation)倒位(inversion)染色体数目的变化,染色体结构上的变化,分为染色体内畸变和染色体间畸变两类。染色体内畸变:只涉及一条染色体上的变化,如发生染色体的部分缺失或重复时,其结果可造成基因的减少或增加;如发生倒位或易位时,则可造成基因排列顺序的改变,但数目却不改变。倒位-是指断裂下来的一段染色体旋转180后,重新插入到原来染色体的原位置上,从而使其基因顺序与其它的基因顺序相反;易位-是指断裂下来的一小段染色体再顺向或逆向地插入到同一条染色体的
17、其它部位上。染色体间畸变:指非同源染色体间的易位。,自发突变机制,自发突变是指在没有人工参与下生物体自然发生的突变。几种自发突变的可能机制微生物自身有害代谢产物的诱变效应过氧化氢是普遍存在于微生物体内的一种代谢产物。它对Neurospora(脉孢菌)有诱变作用,这种作用可因同时加入过氧化氢酶而降低,如果在加入该酶的同时又加入酶抑制剂KCN,则又可提高突变率。这就说明,过氧化氢很可能是“自发突变”中一种内源性诱变剂。在许多微生物的陈旧培养物中易出现自发突变株,可能也是同样的原因。,环出效应,即环状突出效应。有人提出,在DNA的复制过程中,如果其中某一单链上偶然产生一个小环,则会因其上的基因越过复
18、制而发生遗传缺失,从而造成自发突变。,二、基因重组,定义:凡把两个不同性状个体内的遗传基因转移到一起,经过遗传分子间的重新组合,形成新遗传型个体的方式,称为基因重组(gene recombination)或遗传重组。作用:重组可使生物体在未发生突变的情况下,也能产生新遗传型的个体。,生长快、产量低,生长慢、产量高,基因重组,生长快、产量高,细菌的基因重组,基因重组的方式转化转导接合原生质体融合,定义:受体菌自然或在人工技术作用下直接摄取来自供体菌的游离DNA片段,并把它整合到自己的基因组中,而获得部分新的遗传性状的基因转移过程,称为转化。转化后的的受体菌称为转化子(transformant)。
19、有关名词:受体菌:recipient/receptor,转化基因的接受者供体菌:donor,转化基因的提供者转化因子:来自供体菌的DNA片段转化子:transformant,将转化基因重组进入自身染色体组的重组子,(一)、转化(transformation),1、转化及其发现,转化,受体细胞要处于感受态.感受态:competence,受体细胞能从环境吸取外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态供体DNA片段(转化因子)大小适宜,分子量一般为1 107 D 左右 菌株间的亲缘关系密切,2、转化发生的条件,3、转化的类型,根据感受态建立的方式,可以分为:自然遗传转化natural genetic
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