流式细胞术讲义PPT文档.ppt

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1、流式细胞术的概念,流式细胞术（Flow cytometry；FCM）是集计算机技术、激光技术、电子技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学等多门高新技术与方法为一体的现代细胞分析技术，它以流式细胞仪（Flow cytometer）为工具，在单细胞水平上对大量细胞进行高速（每秒计数可达100010000个细胞）、准确、多参数的定量分析或分选（纯度可达99%以上），已成为现代骨髓血细胞学研究中最先进的分析技术。,流式细胞术与PNH的诊断,原 理,阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种获得性基因突变所致的克隆性疾病，其异常的血细胞膜糖化肌醇磷脂锚（GPIanchor）连接蛋白如CD59,CD55等表达

2、明显减低或缺乏，导致对补体的敏感性增强而产生溶血性贫血。,样本要求：,EDTA抗凝血或骨髓3ml每天上午送检收费：CD55/CD59 280元 CD59 140元,临 床 诊 断 值,CD59阳性的红细胞大于等于95%CD59阳性的中性粒细胞大于90%,流式细胞术与白血病免疫分型,免疫分型原理,流式细胞术（FCM）白血病免疫分型是利用荧光染料标记的单克隆抗体（McAb）检测相应抗原，经过多参数分析，测定白血病细胞的细胞膜、细胞浆和细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。FCM分析白血病免疫表型时测量细胞数量一般是在1000050000个细胞之间，而且快速、特异、准确、

3、重复性好，能区分细胞的系列，划分其分化、发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机制研究等有重要价值。,样本要求：,肝素抗凝骨髓3ml(或外周血)每天上午送检收费：70元/每个单抗(临床常规检测12个单抗),干/祖细胞标志：CD34、CA133髓系标志：CD33、CD13、CD11b、CD15、MPOB细胞相关标志：CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD79a、CyIg、SmIgT细胞相关标志：CD2、CD3、CD5、CD7、CD4、CD8,常用白血病免疫分型荧光素标记单克隆抗体组合及其意义,AML 免疫分型,T-ALL免疫分型,B-ALL免疫分型,FCM

4、-IM诊断混合型白血病,流式细胞术测定发现的双系列或多系列表达的结果较多，但双表型白血病不一定就是混合型，理由如下：混合型白血病诊断：应根据形态、免疫、遗传、分子生物学等综合判断，属双系列（双克隆）？双表型（单克隆）？系列转换型？需考虑到抗原/单抗的多向性：CD4、CD7、CD10、CD38、CD56正常血细胞随分化成熟，各系列血细胞的免疫标志特性逐步规律化：白血病细胞的分化发育却丧失严格的规律性（lineage infidelity）与免疫表型的阶段性（differentiation asynchrony），因而出现异常抗原表达，或过高或过低或不表达或交叉系列表达。,设门方案,采用CD45/

5、SSC设门法（优于FSC/SSC设门法）CD45其表达程度在不同细胞各异。淋巴细胞单核细胞成熟粒细胞原/幼细胞，而红细胞不表达。SSC在成熟粒细胞单核细胞原/幼细胞淋巴细胞红细胞。,临床原/幼细胞群定量,按照新的WHO分型标准，对初发病者，原/幼细胞占总细胞数20%以上即可判为白血病。对于临床原/幼细胞群定量应以原/幼细胞群的细胞数为分母。对于临床原/幼细胞群定性比定量更重要。,白血病免疫分型病例分析,病例1梁丽琴 女性 24岁异常表型中:CD10+.CD34+.CD22+.CD38+.CD19+.HLA-DR+结论：表型符合Pre-B-ALL,白血病免疫分型病例分析,病例2王丙午 男性 68

6、岁异常表型中:CD33+.CD13+.CD15+.CD11b+.HLA-DR+.CD34+.CD19+结论：表型符合AML-M2,白血病免疫分型病例分析,病例3冯亮 男性 33岁异常表型中:CD34+.CD10+.CD22+.CD19+.CD33+.CD13+.CD15+.HLA-DR+结论：表型符合双表型白血病,流式细胞术与造血干/祖细胞计数,原 理,造血干/祖细胞存在于骨髓和外周血中，形态与淋巴细胞相似，用普通形态学方法难于识别。但根据造血干/祖细胞的特征，可用FCM多参数分析血液、骨髓和浓缩白细胞悬液中造血干/祖细胞的数量，对血液病、恶性肿瘤、基因异常等疾患的造血干/祖细胞移植治疗有十分重要的意义。,流式细胞术其它应用,血小板疾病的诊断DNA倍体与细胞周期分析应用流式细胞术检测微小残留病变网织红细胞分析细胞免疫功能分析,