干细胞移植在糖尿病治疗上的应用文档资料.ppt

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1、Science于1999年和2000年连续两次将干细胞技术评为世界十大科学成就之一。,干细胞技术是医学发展的未来,干细胞技术是医学发展的未来,干细胞治疗的原理及应用,干细胞的分类 干细胞治疗原理 干细胞治疗常用细胞种类 干细胞治疗的适应症 干细胞治疗的常用治疗方案,人体是由200多种不同组织约1000万亿个细胞组成的有机体,所有的细胞均起源于一个干细胞受精卵。,干细胞技术最显著的作用：能再造一种全新的、正常的甚至更年轻 的细胞、组织或器官。,“人体干细胞”是指来源于人体的一群具有自我复制能力和多向分化潜能的细胞。,什么是干细胞?,干细胞的分类,胚胎干细胞（ESC）经诱导的多能干细胞（iPS）成

2、体干细胞(ASC)造血干细胞（HSC）内皮祖细胞(EPC)间充质干细胞（MSC）神经干细胞肝脏干细胞脂肪干细胞肌肉干细胞,7,干 细 胞 技 术 原 理,干细胞,复制,前体细胞,各种组织细胞,体外人工培养干细胞，利用干细胞构建细胞、组织、器官来修复组织器官将是未来生物医学工程研究应用的主要方向。,目前细胞治疗常用的细胞来源,骨 髓：自体，异体 外周血：自体 脐 血：自体，异体 脐 带：异体 脂 肪：自体 其 它：胎脑、胎胰腺 等等,12,目前细胞治疗常用的细胞种类,一：骨髓总有核细胞（NC）从自体骨髓获得，去除大部分红细胞，剩下的全部具核细胞。其中富含各系血细胞、造血干细胞、造血各系祖细胞、血

3、管内皮祖细胞和内皮细胞。,13,目前细胞治疗常用的细胞种类,二：单个核细胞（MNC）从自体骨髓或异体脐血中获得，去除绝大部分红细胞、血小板、巨核细胞和多核细胞，剩下的单个核细胞。其中富含胚胎样多能干细胞、造血干细胞、造血各系祖细胞和血管内皮祖细胞。,14,目前细胞治疗常用的细胞种类,三：CD34+细胞（HSC&EPC）从骨髓或脐血单个核细胞中经免疫磁珠法分选的表达CD34糖蛋白的细胞。其中造血干细胞和血管内皮祖细胞的纯度极高，对实验室人员操作要求较高。,15,目前细胞治疗常用的细胞种类,四：间充质干细胞（MSC）首先分离骨髓、脐带或脂肪组织的单个核细胞，经过培养获得贴壁细胞群，呈梭形，体型较大

4、，能分化为多种细胞。其中富含间质干细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、树突状细胞和内皮细胞。还残留少量单个核细胞。对实验室操作人员要求较高。,16,目前细胞治疗的适应症,脑外伤、脊髓外伤性瘫痪后遗症、脑发育不全、癫痫、脑瘫等；帕金森病、老年痴呆症、肌营养不良症、多系统萎缩症、肌萎缩侧索硬化症、脊髓性肌萎缩、脑梗塞等；,18,目前细胞治疗的适应症,股骨头坏死多发性硬化、系统性硬皮病、红斑狼疮、关节炎（风湿和类风湿）心肌梗塞肝硬化、慢性胃炎糖尿病,19,目前细胞治疗的适应症,肾内科：肾病、尿毒症妇科：卵巢早衰眼科：视神经炎、视神经发育不良和萎缩、视网膜色素变性新生儿科：缺氧性脑病、新生儿发育不良、脑瘫；,

5、20,必须经过多种检测确保细胞质量和安全,1.细胞染色形态观察（瑞氏染色）2.活细胞计数（台盼蓝法）3.生长曲线的测定（MTT法）4.克隆形成率（colony forming assay）5.细胞表型（CD34、CD45、CD90、CD105、CD44、CD146、Stro-1、CD200、CD271、SH-2、SH-3、SH-4等）分析（流式细胞仪法、免疫组织化学法）6.内毒素检测7.细胞凋亡检测8.细胞周期分析9.核型分析10.端粒酶活性检测11.相关常见检测基因（BETA-LAC）12.裸鼠致瘤性实验13.软琼脂侵袭实验14.体外分化检测实验：骨细胞方向、神经细胞方向、脂肪细胞方向.,细

6、胞治疗的原理,细胞治疗的作用机制可能是多方面的：MSC可产生细胞因子，或通过减少细胞凋亡起到保护作用，对组织功能恢复发挥积极作用；例如MSC分泌的特异性神经递质及神经营养因子，如神经生长因子、脑源性神经生长因子等神经营养因子，可使轴索实现跨胶质瘢痕屏障的生长，促进脊髓损伤的修复；,22,细胞治疗的原理,这些旁分泌信号分子可通过刺激血管形成、防止移植基质降解和局部细胞凋亡,并可促使内源性修复细胞迁移和归巢至受损部位，协同改善组织重塑过程。,23,细胞治疗的原理,此外受损的细胞的恢复生长还需要周围的一些正常细胞成为生长信号的生产工厂供其使用，即其必须招募一些保姆细胞，移植入的成纤维细胞和内皮细胞即

7、可完成这个任务，帮助内源性残存组织细胞生长分化。,细胞治疗的原理,MSC具有免疫调节能力，MSC可以降低过度免疫对机体的损坏：抑制DC的抗原递呈能力；抑制NK细胞毒活性；减轻中性粒细胞的呼吸爆发；抑制抗原特异性T细胞增殖、CTL细胞毒性和促进调控性T细胞生成的方式调控免疫反应的强度；能够将B细胞停滞在细胞周期的G0/G1期，抑制由抗免疫球蛋白抗体，IL-2,IL-4等不同刺激引起的B细胞增殖，然而MSC并不会诱导B细胞凋亡，反而会更好的维持B细胞的存活。,25,细胞治疗的原理,MSC可向内皮细胞分化；EPC可向心肌梗死区归巢,参与构建毛细血管网并分泌血管形成因子,并且本身可以分化为血管内皮细胞

8、和平滑肌细胞；具有多分化潜能的MSCs 可增殖并增补EPC，MSC中的EPC可直接参与受损局部血管的形成及损伤修复过程；,27,细胞治疗的原理,干细胞移植后向病变部位组织渗透融合，一些移植的干细胞在新的环境下分化成功能细胞，替代损伤细胞，达到恢复组织细胞功能的目的。,28,目前细胞治疗常用的回输方式,一：静脉回输（简单，损伤小）二：局部注射肌 肉（对改善微循环/肌张力有明确疗效）椎 管脑 室三：经脉管介入（疗效有待于进一步研究）,29,细胞治疗的回输时间,炎性因子在梗死坏死组织的表达会显著上调,参与组织的修复、促进梗死部位的新血管生成与干细胞的归巢和转分化。强烈的炎症微环境影响MSCs的生存；

9、结果表明,组织梗死后1周可能是较有利于MSCs归巢和存活的合适的植入时间。,30,目前细胞治疗常用的回输方式,干细胞治疗疾病根据方式方法的不同每个疗程治疗1-4次，每次治疗间隔5-10天，原则上每个疗程间隔的时间是36个月，如疗效明显，可视病情连续做23个疗程。（每次疗程治疗可应用不同干细胞组合）,31,干细胞注射之后的示踪研究,许多研究表明移植MSCs疗法的疗效有限,主要的原因之一是它难以确保足够数量的细胞归巢至病变组织；MSC回输体内的第一步就是向血管内皮粘附;MSC具有跨内皮细胞游出并进入组织的能力 实验室动物研究表明，回输后48小时内，肺毛细血管网、肾毛细血管网是MSC粘附最多的部位，

10、肝、脾也有少量细胞发现。,可能的副作用,其主要副作用为自限性低热。其它所观察到的副作用均为1或2级并且具有自限性(包括头痛、头晕、恶心、皮疹、搔痒、心动过速)，未有患者出现肺或肾部的症状、任何迹象的感染、肝功能衰退或自身免疫失调反应。潜在的生成肿瘤的风险性 椎管和脑室注射应考虑到脑压变化可能引起的副作用。,干细胞与糖尿病,2型糖尿病自然病程与血管病变结局,尚在代谢正常状态 基因？环境？,代谢综合征胰岛素抵抗,进 展,结 局,启 动,心脑血管疾病肾病视网膜病变,血糖,胰岛素抵抗,细胞功能,中国膳食文化渊源流长,“五谷为养，五果为助，五禽为益，五菜为充”黄帝内经素问篇,民以食为天 仓禀实而知礼节吃

11、出来的血缘 一饭定终身,动脉硬化概念,任何原因引起的动脉管壁增厚变硬、失去弹性和管腔缩小。,内皮细胞,内皮下层,内弹力板,内膜(止血、血栓形成、血管张力、通透性，动脉粥样硬化形成部位）,中膜（平滑肌构成,血管张力）,外膜（动脉供血和神经分布）,动脉结构,上皮细胞,病理性动脉硬化,动脉中层钙化：Monckeberg氏动脉硬化 病理所示在动脉中膜可见紫蓝色的钙化灶，而管腔没有受累。X线可以发现中膜钙化结节，但中膜的病灶并不影响血管腔。看不到明显临床表现，临床意义不大。,小动脉硬化 病理所示中层增厚,血管变硬,管腔狭窄。小动脉弥漫性增生病变，其发生与高血压和糖尿病有关。全身细小动脉硬化使许多脏器缺血

12、，并发生结构和功能损害，其中对心、肾、脑的影响最为显著。,动脉粥样硬化：,最常见、最重要的一种。主要病理学标志是泡沫细胞的形成，损伤从内膜开始，血管壁中有富含脂质的斑块形成，外观呈黄色粥样，可造成血管的狭窄，血管中层和外膜也可受累。,动脉粥样硬化引起的全身疾病表现,颈动脉粥样硬化,主动脉粥样硬化,内脏动脉粥样硬化,脑动脉粥样硬化,冠状动脉粥样硬化,下肢动脉粥样硬化,急性脑血管病,心绞痛心肌梗死缺血性心肌病,主动脉瘤,血管性痴呆,夹层动脉瘤,顽固性高血压肠系膜动脉血栓,间歇性跛行坏疽,急性脑血管病,主要累及大型弹力型动脉（如主动脉）和中型弹力型动脉（冠状动脉和脑动脉最多）,冠状动脉粥样硬化是动脉

13、粥样硬化的最常见类型，是造成我国成年人死亡的头号杀手！,顾东风,Jiang He,吴锡桂,等.中国成人主要死亡原因及其危险因素.中国慢性病预防与控制 2006;14(3):149-154.,内皮功能受损,炎症反应增加,平滑肌细胞增殖和迁移形成纤维帽,LDL进入内皮下被氧化,巨噬细胞吞噬oxLDL形成泡沫细胞,斑块破裂局部 血小板聚集 血栓形成,动脉粥样硬化的形成,损伤反应学说认为,LDL是致动脉粥样硬化的基本因素 内皮损伤是关键因素 炎症反应贯穿始终,血管摄影,彩超,核磁,血管造影,血管造影诊断下肢PAD的金标准计算机断层扫描血管成像（CTA）磁共振血管显像。,正常血管,糖尿病患者的下肢血管造

14、影,血管病变,右侧腓动脉全段闭塞,血管病变,左侧腘动脉全段闭塞,血管病变,右侧髂动脉自起始部闭塞,左髂动脉管壁虫蚀状,181例老年糖尿病患者接受ABI检测,我国糖尿病患者1/4发生下肢血管病变老年人群高达1/3强,4675例2型糖尿病患者的足背动脉、胫后动脉进行触诊检查，以搏动明显减弱或消失为异常,王爱红，许樟荣，等.老年医学与保健 2005；11：147149王爱红，许樟荣，等.第四军医大学学报 2005；26：11371139,24.5%,35.36%,发生下肢血管病变,发生下肢血管病变,下肢血管病变是死亡及严重血管事件的风险因子,Curt Diehm,et al.Circulation.

15、2009;120:2053-2061,6880名老年人（65）随访5年显示：PAD对死亡及严重血管事件的风险比是2.17，高于严重心脑血管病史、性别、糖尿病、吸烟等其他风险因素,下肢血管病变越严重无事件生存率越低,Curt Diehm,et al.Circulation.2009;120:2053-2061,结果显示ABI越低则无事件生存率越低,下肢血管病变引起糖尿病变患者肢体远端与足部缺血，最终可导致缺血坏疽,糖尿病足是糖尿病下肢血管病变的终末阶段,Peripheral Arterial Disease in People With Diabetes.2003 Dec;26(12):3333

16、-41.,湿性坏疽,糖尿病足临床表现,干性坏疽,混合坏疽,溃疡和感染,坏死和截肢,糖尿病下肢PAD的特点,病变广泛多部位、多节段病变更远端，小血管病变并有微血管病变手术难度大，效果相对差,Hiatt,W.R.:N Engl J Med,344(21),1608,2001,外周动脉疾病患者的评估和治疗流程,MWD：最大行走距离PFWD：无痛行走距离SF-36：Medical Outcomes Short Form 36 questionnaire WIQ：Walking Impairment Questionnaire,下肢PAD评估,年龄50-69岁并吸烟或糖尿病患者年龄大于70岁劳累后腿痛

17、下肢血管检查异常冠状动脉、颈动脉或肾动脉疾病,ABI检测,0.91 1.30,0.90,1.30,脉波容积测定趾端压力测定多普勒超声图像检查,踏车试验后检测ABI,结果正常:无PAD,结果异常,运动后ABI正常:无PAD,运动后ABI降低,查找腿部症状的其他原因,PAD,Hiatt WR.N Engl J Med,2001;344(21):1608-21,糖尿病下肢血管病变的治疗方案,控制危险因素（基础治疗）降糖调脂降压抗血小板治疗戒烟下肢缺血的治疗（特殊治疗）步行锻炼药物介入或手术治疗抗凝干细胞,干细胞与糖尿病,糖尿病是一类严重的代谢疾病，正危害着世界上越来越多人口的健康。胰岛移植是一种治疗

18、糖尿病的有效方法，却因供体缺乏和移植后免疫排斥问题制约了其广泛应用。干细胞为具有强增殖能力和多向分化潜能的细胞，是利用细胞替代疗法治疗重大疾病的细胞来源之一，其中成体干细胞因不存在致瘤性及伦理道德问题而被人们寄予厚望。成体胰腺干细胞在活体损伤及离体培养条件下均能产生胰岛素分泌细胞，肝干细胞、骨髓干细胞和肠干细胞等在特定离体培养条件下或经过遗传改造后也均可产生胰岛素分泌细胞，将这些干细胞来源的胰岛素分泌细胞移植到模型糖尿病小鼠中可以治疗糖尿病。因而，成体干细胞可以为细胞替代疗法治疗糖尿病提供丰富的胰岛供体来源。,干细胞治疗糖尿病机制,目前应用的干细胞,能够用分化为胰岛细胞的成体干细胞：胰腺干细胞

19、肝干细胞骨髓干细胞肠干细胞等,国内外研究现状,国内外研究现状,国内外研究现状,美国Oris公司在2010年5月，其开发的prochymal（异体骨髓来源的间充质干细胞）已经作为孤儿药物进行I型糖尿病的治疗市场。,各地已经建立运行的干细胞研究中心,山东大学干细胞治疗中心（齐鲁医院）辽宁省干细胞治疗中心 辽宁省人民医院吉林省干细胞工程技术研究中心 吉林大学湖北省干细胞中心 华中科技大学江苏省干细胞库 江苏泰州医药城北京大学干细胞研究中心国家干细胞工程研究中心上海医学转化基地国家干细胞工程技术研究中心广东省分中心 暨南大学,对于细胞治疗，可参考卫生部医疗技术临床应用管理办法中第三类医疗技术的细胞治疗

20、技术进行管理。,首批允许临床应用的第三类医疗技术目录(第三类医疗技术名称)同种器官移植技术变性手术心室辅助装置应用技术自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术质子和重离子加速器放射治疗技术人工智能辅助诊断技术人工智能辅助治疗技术基因芯片诊断技术颜面同种异体器官移植技术,口腔颌面部肿瘤颅颌联合根治术颅颌面畸形颅面外科矫治术口腔颌面部恶性肿瘤放射性粒子植入治疗技术细胞移植治疗技术脐带血造血干细胞治疗技术肿瘤消融治疗技术造血干细胞（脐带血干细胞除外）治疗技术放射性粒子植入治疗技术（口腔颌面部恶性肿瘤放射性粒子植入治疗技术除外）肿瘤深部热疗和全身热疗技术组织工程化组织移植治疗技术,目前细胞治疗临床应用的特点:1 一般采用个体化治疗，至今还无经国家药品食品监督管理局（SFDA）批准的、批量生产的上市细胞产品；2 它是某些难治性疾病治疗中的一种选择，有的甚至是最后的选择。,谢 谢,