最新先行课动物细胞融合和单克隆抗体PPT文档.ppt

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1、提问：哪种植物细胞工程技术可以突破不同生物之间的生殖隔离障碍，培育出新的作物类型？,植物体细胞杂交技术,你能回忆出植物体细胞杂交的过程吗？,植物体细胞杂交技术过程图,动物细胞融合,动物细胞融合的过程请同学们阅读课本P52动物细胞融合,动物细胞融合的概念,动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂交（cell hybridization），是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,动物细胞融合,融合后形成的单核细胞称为杂交细胞,问题讨论,2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？,3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？那动物细胞融合呢？,、植物体

2、细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗?,4、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？什么原理？,5、为什么要用灭活的病毒？,6、动物细胞融合有什么意义？,2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？,3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？那动物细胞融合呢？,离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法,问题讨论,动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。,、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能，只能得到杂交细胞,4、动物细胞融合能利用上述两类方法

3、吗？还有其他方法吗？,能 还可以利用灭活的病毒（生物方法）进行诱导,问题讨论,、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？相同，都是细胞膜的流动性,问题讨论,7、动物细胞融合有什么意义？,6、为什么要用灭活的病毒？,病毒一般对生物体是有伤害的。,仙台病毒,物理或化学方法,丧失感染活性,保留融合活性,突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。,动物细胞融合,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,植物细胞A,植物细胞B,原生质体A,原生质体B,植物体细胞杂交,去壁,融合,组织培养,物理法,化学法,生物法：灭活的病毒,有何同？有何不同？,主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,用途,物理、化学方

4、法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振动、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱,导细胞融合,去除细胞壁后诱,导原生质体融合,细胞融合的方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物、动物细胞融合的比较,产量少、纯度低、特异性差,单克隆抗体,2、传统制备抗体的缺点是？如何改进？,1、传统制备抗体的方法是？,3、抗体是如何产生的？,单克隆抗体,B淋巴细胞,动物在免疫过程中产生的抗体种类可达百万种每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体因此，要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群但是：一个B淋巴细胞在体外

5、不能无限增殖,.,.,一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖,杂种细胞,动物细胞培养技术,设计方案：,动物细胞融合,创始人：米尔斯坦,单克隆抗体,既能产生特异性抗体，又能大量增殖,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？,骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞B淋巴细胞-B淋巴细胞B淋巴细胞-骨髓瘤细胞,多种杂交细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,专一抗体检验阳性,克隆上述杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体检验阳性细胞,单克隆抗体,注射到小鼠体内,体外培养,单克隆抗体的制备过程,第1次筛选目的：得到杂交瘤

6、细胞（多种）。,第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。,该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。,杂交瘤细胞有何特点？,特异性强，灵敏度高,免疫小鼠,培养骨髓瘤细胞,融合,骨髓瘤细胞,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,选择培养基上培养,专一抗体检验阳性,专一抗体检验阳性,注射到小鼠体内,体外培养,单克隆抗体,克隆杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞,多种杂交细胞,杂交瘤细胞有何特点？,本过程利用的那些技术？,动物细胞融合技术动物细胞培养技术,是否注射抗原,（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？几种融合细胞？,两次筛选的目的分别是什

7、么？,2、单克隆抗体制备过程,与传统制备的抗体相比具有什么特点？,诊断疾病（识别作用，如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）,单克隆抗体的应用,优点：准确、高效、简易、快速,用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗，也可运载药物，如“生物导弹”）,（导向作用，作为载体，生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤）（位置准确、疗效高、副作用小）,小结,两个过程,动物细胞培养过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势,单克隆抗体,形成杂种细胞,获得杂种植株,结果,物理、化学方法,（同左）,灭活的病

8、毒,物理（离心、振荡、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原 理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,1、植物、动物细胞融合的比较,课堂小结,融合前处理,用纤维素酶、果胶酶去壁,用胰蛋白酶使细胞分散,2、单克隆抗体制备过程,B淋巴细胞骨髓瘤细胞,诱导融合,B-B细胞,B-瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择培养,杂交瘤细胞（B-瘤细胞）,克隆化培养,抗体检测,产生所需抗体的杂交瘤细胞,体外培养,单克隆抗体,课堂小结,1.右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案,制备单克隆抗体,不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一

9、抗体的B淋巴细胞。,(1).该实验方案的目的是：_,(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？,课堂练习,(3).A是从小鼠的脾脏中取得_ 该细胞能够产生_。,(4).图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。,B淋巴细胞,抗体,细胞融合,灭活的病毒,双亲细胞,产生专一抗体,无限增殖,课堂练习,(5)._ 技术是单克隆抗体的技术支持。,动物细胞培养,（6）单克隆抗体的特点 _，并可大量制备。,特异性强，灵敏度高,课堂练习,2、动物细胞融合和植物细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段完全相同 C.所采用的原理完全相同 D.都能形成杂种细胞,课堂练习,D,3、用a表示骨髓瘤细胞，用b表示B淋巴细胞，则细胞融合过程中两次筛选的目的分别是（）A.a、aa、ab、bb、b a、aa、ab abB.a、aa、ab、bb、b ab、bb、b abC.a、aa、ab、bb、b ab 产生特定抗体的abD.a、aa、ab、bb、b aa 能无限增殖的aa,C,课堂练习,