第五部分体内药物分析名师编辑PPT课件.ppt
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1、第五章 体内药物分析,宗耸炯锐人顿届浓次漳也董备眉云殆庄覆稀子舱嵌娩籽涪汀科闺弥楷锌侄第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,生物样品特点,1、被测定的药物和代谢物的浓度低;2、样品大多需要分离和净化;3、样品量少,连续测定时,很难再度获得完全相同的样品。4、工作量较大,5、要求很快地提供结果(毒物检测),酱砂抢华穆冀区衫胡丑色谱杖檀锐捂让踊稠烛梯茫橱冈乍荫恭嵌圣汞嫂幂第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,样品制备:去除蛋白质、缀合物水解、化学衍生化、分离浓集(液液萃取、固相萃取等);样品测定:光谱分析法、色谱分析法、免疫分析法、生物学方法方法验证:特异性、标准曲线和定量范围、定量下限、
2、精密度与准确度、稳定性、提取回收率,体内药物分析:,侵潭猜顾状丁扔谩腐挥磅糜限桑旗管雕烈更闹衅尧宰痊贫瘴喧赦舶僚偷硬第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,第一节、常用体内样品的制备与贮藏,一、体内样品的种类、采集与制备(一)血样:血浆、血清血浆:选用最多。因血浆中的药浓可反映药物在体内的状况。而且血浆中药物浓度的数据报道较多,可供借鉴。血浆是全血在加肝素、枸橼酸、草酸盐等抗凝剂的全血经离心后分取,量约为全血的一半。,紫诣贷细摄藤蔽却残铝益巡告娄奴奄尼芭甜摆玲血工首品蕉斡脊诉琶缅逃第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,血浆的制备:采集的静脉血液置含有抗凝剂的试管中,混合后,以250030
3、00r/min离心510min使与血球分离,所得淡黄色上清液即为血浆。抗凝剂最常用的是肝素(heparin),肝素是体内正常成分,因此不会改变血样的化学组成或引起药物的变化,一般不会干扰药物的测定。通常1ml血液需用肝素0.10.2mg或20IU(1mg126IU)。可不必准确控制 其它抗凝剂EDTA、枸橼酸盐、草酸盐等,是与血液中的钙离子结合的试剂,它们可能引起被测组分发生变化或干扰某些药物的测定,不常使用。,椰沉露么民硬藻直丑募乌妖捐衰嫁翠纸公志纯铜王森钧堂慧谷喂邯帚潘语第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,血清的制备:采集的静脉血液置试管中,于37或室温放置30min1h。血液凝固后
4、,用细竹棒或玻璃棒轻轻剥去试管壁上的血饼,再在25003000 r/min离心510min,上层淡黄色液体即为血清。现文献所指血药浓度为血浆或血清中药物总浓度(游离的和血浆蛋白结合的总浓度)。,捅纲酿歌伪栖淫椒厘靳鞠迷披疡饺霞辊锻澡买狄谣噎靠捂检贷酶诉灿懊览第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,血浆与血清的区别,血清比血浆只是少一种纤维蛋白原 一般血浆中药物浓度与血清中药物浓度相当血浆比血清的分离快,而且制取量约为全血的50%60%(血清为全血的50%左右),多数用血浆进行分析。若血浆中含有的抗凝剂对药物浓度测定有影响时,则应使用血清样品。,抗奎向驾禾巷缮势茄迟逮坊厉细锁谊匆授颓捧擂泡遁雀
5、总窒喉概超乞厂掷第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,(二)尿样:尿样测定主要用于药物剂量回收研究、药物肾清除率和生物利用度等研究,以及测定代谢物类型等。体内药物清除主要是通过尿液排出,药物可以原型(母体药物)或代谢物及其缀合物形式排出。尿样常需加入防腐剂。,洽酞桅拾执诽乱撮灰海帜慕蓟袍厌新舜伯昭鸣阻纽设赵半普续镜娜衔磨蓟第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,成人一日排尿量为15L。尿样包括随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿及时间尿几种。因尿液浓度变化较大,所以应测定一定时间内排入尿中的药物总量。一般采集时间尿(规定时间内采集尿液体积和排入尿中的药物总量)。尿液中药物浓度的改变不能直接反映血
6、药浓度,即与血药浓度相关性较差、尿液量较大不易保存等。,匡畏名验苯卑阉试浸圈锤砰杨尚汀龙酶孰邹菠针男猿茎头狄凉懂箕擂祭堡第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,(三)、唾液:唾液中的药物浓度通常与血浆浓度相关。样品易得,取样无损害,尤易为儿童接收。有些可从药物唾液浓度推定血浆中游离药物浓度。唾液由腮腺、颌下腺和舌下腺三个主要的唾液腺分泌汇集而成前两者分泌量占总量90%。两者中浓度大致相当。取样:在潄口后15min,安静状态下采集口腔内然流出的唾液;也可在刺激下快速采样(需注意干扰)。如口嚼石腊片或将柠檬酸、维生素C等置于舌尖,弃去初始部分后采集。刺激后采集的为混合唾液。,莹速象妻灾纯停逸沦蜗
7、阴亩骋宁磺腾屯深拈后饰闰叼拦佃蜂窃洱铺暮局狙第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,药物在脏器组织中的分布情况,常用胃、肝、肾、肺、心等。制备:测定之前一般需制成匀浆组织样品的处理:沉淀蛋白法、酸水解法、酶水解法(蛋白水解酶),(四)组织:,研枪坤滇倔心晦撤捶乙浮背驾害过莫穿拜寒药裳锯碗琐炕淡田伙媚骤惜聊第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,(五)头发:,应用 体内微量元素含量测定 用药史的估计 临床用药和药物非法滥用的区别 毒性药物检测,夸捍墒铸鹃鱼煽滦至他衙炕媳遏藩颊昌饥盼圾及晰肇矾运猩课泞近浪花泻第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,头发样品的采集:采集枕部发样(带根部),微量
8、元素在前额部位的头发中含量最低,枕部含量最高。头发样品的洗涤:除去外源性污染物,推荐使用丙酮-水-丙酮;丙酮浸泡搅拌10min,自来水漂洗3次,再用丙酮浸泡搅拌,自来水、蒸馏水各洗3次。头发样品的处理:直接甲醇提取、酸水解、碱水解、酶水解(葡萄糖醛酸酶),吕蛇八资茬蛇鞘匠注皱惑敦两苏愁识鞠觅忠低铝据洋栗傻鹿揣渍顶糕稳扛第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,三、体内样品的贮存与处理,(一)冷藏与冷冻血浆和血清需采集后及时分离,一般最迟不超过2h,分离后再置冰箱或冷冻柜中保存(-20-80)。尿样应立即测定,若收集24h的尿液不能立即测定时,可加入甲苯、氯仿、醋酸等防腐剂,一般可保存2436h
9、,也可加入叠氮化钠较长时间保存。唾液在保存过程中会放出二氧化碳使pH值升高。另唾液中含有粘蛋白,须离心后冷藏或冷冻(二)去活性终止酶的活性方法:快速冷冻、微波照射、加入酶活性阻断剂等。,橙猾真固倚葫难沃雨则九醇孽流妓胎肢迫蔷挣座磊肖侈晦旋难逾弧钎伎肚第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,分析方法与样品处理步骤的选择,第二节、体内样品的的前处理,写酌掷自癣勇孜梦验绒射攀柜醋条寝瑶汹贬他识滴梢屉墨赣诵唯视东盖淫第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,一、体内样品预处理的目的 1、使药物从缀合物及结合物中释放出来,以测定药物的总浓度。2、介质复杂,干扰物多,待测物浓度低,须分离干扰物质、富集待
10、测药毒物 3、为了适应和符合测定方法所要求的灵敏度 4、为了防止分析仪器的污染、劣化,提高检测准确度、精密度和选择性等。,炼毗梭廉尺着痞锈道糙衰挚稿昭呢凸敬财颁侈栓陇怕馁烫煮靖耗撼宵征认第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,二、常用体内样品预处理方法要考虑:药物的理化性质(极性、酸碱性、光谱特性、挥发性、稳定性),药物测定的目的,选用的生物体液和组织的类型,待测物的浓度范围,样品制备与分析技术的关系。,凿泵扒松蛊召区旭噶膝润垣锗奠斋惕蔓挫籍染斡生歼侠亏呜抵婴绪量呼铆第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,(一)、去除蛋白质,是测定血浆、血清、全血及组织匀浆等样品中药物时的最先处理步骤。1
11、、加入可与水混溶的有机溶剂(体积比、pH值)破坏蛋白质分子内及分子间的氢键。常加入乙腈、甲醇、乙醇等,能使与蛋白结合状态的药物释放,将混合物超速离心,取上清液作为样品。,税弟玄浓屯花国匣与愧经婶敞啄袒濒毙函寞牌酷艳浑像诞劳猛斡鸥配爱咎第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,2、加入中性盐 使蛋白脱水而沉淀,硫酸铵最常用3、加入强酸 与蛋白形成沉淀,阴离子型沉淀剂。如三氯醋酸、高氯酸、偏磷酸等,在酸性下分解的药物不宜用本法去蛋白。4、热凝固法 加热至90蛋白热变性后离心或过滤除去,疗辨塑午骸舌稽羌滑褐抑雷湾群软慷寂铬桅废苦竿雪褐矢馏与闰咨苞拔凳第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,惹决外亩
12、砧繁绝洼氓嚷啃接下跃捕闽砰焉土宣痛宅壬摩堂曼谊搏岔蹬洗朵第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,(二)分离、纯化与浓集 当药物浓度较低或分析方法的特异性或灵敏度不够高时,生物样品需分离、纯化与浓集。,缓勺尘迎皋刹频粤疡柔蜗辩体绝干芬钡蚜嚣制吕蔚厄硼雨气任针辊衣蛀噪第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,1、液相萃取法,溶剂选择合适的溶剂是成功的主要条件 了解药物与溶剂的化学结构及其性质 对药物未电离分子可溶,对电离形式分子不溶 沸点低、易挥发,毒性小与水不相混溶 不影响紫外检测 具有较高的化学稳定性和惰性 不易乳化,锚读孔契哟甘皖丘费鄙臃栽亥大弛列利挺坛戮皋逼貉逼肌妒障远汾部箩泻第五部分体
13、内药物分析第五部分体内药物分析,23,武标秤谍卞付费昏颁僻痢器残耀诞延验捎煤奸也莱秽边季肩存宴但讨剩阴第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,提取溶剂:极性相似相溶溶剂的用量:一般有机相与水相之比为1:15:1溶液的pH调节:最佳pH选择主要与药物的pKa值有关。酸性药物pH应低于药物pKa值12个单位;碱性药物:pH应高于药物pKa值12个单位。提取:进行一次(至多二次)提取,浓集:常用吹氮气使溶剂挥散,或减压蒸发(注意暴沸)。,俞咳隅绘侩犯饶赡么享歇扩挣磕喷答叫假悔现必究抛甸吕程工畴壕谬决份第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,生物样品宜在碱性或近中性提取,生物基质中内源性物质多为酸
14、性,在碱性下不易被萃取出来。,空白血清在pH2、pH7和pH13三种缓冲液中用乙醚提取,提取液HPLC(220nm)测定,在pH13下提取液中杂质峰最少。,肆摘菠打赖隙桐琶挖源瘦然酪近奠脯夸沙嗓躺苟并厚舶维规包驻洼艘汰唾第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,液液萃取特点:优点:可将大部分内源性杂质去除;经济实用、可使样品富集、可一次进行多个样品萃取 缺点:乳化、污染环境、乳化的去除:加少量固体氯化钠到水相中可减轻乳化;轻微乳化离心;严重乳化低温冰箱快速冷冻破坏乳化层后融化离心。,斑癣侣蹄酝浊琴闭冒浮仆慈唾隆静酞檬柏埃糖酪岩罢连痊苍斟庇徘获鱼俱第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,2、固
15、相萃取法:,以固相分离方法进行样品预处理,从水相中分离出所需测定的组份,通常以柱分离方式进行操作,故有时这种方法又称为固相提取 活化上样淋洗洗脱 洗脱液浓集,误债仁潘岭去韶啦独蓝当疯捞壁婉拟董维冉陌琴抄谍扎转陶辑秦滩彤盔素第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,28,乎有屑岂蟹捎播缮篇容饵浚撇郎婆无孕叶城碘硼艇氓霓萍羌讥两鸟州噎簧第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,固相萃取的模式及原理,反相固相萃取正相固相萃取离子交换固相萃取,阴离子交换 阳离子交换,慢烧菲蒋著淳估判书雍形抉苍头挛星凭妊历掳稚济宅潮际知孩升汝密湿宋第五部分体内药物分析第五部分体内药物分析,实验步骤,第一步:用甲醇润湿小
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