第二章细胞生物学研究方法名师编辑PPT课件.ppt

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1、第二章.细胞生物学研究方法,显微成像技术 细胞化学技术(cytochemistry)细胞培养和细胞融合分离技术 分子生物学方法,摈肃辫吟湾沃瑟同茬总迢汐掂致习造睦瓮嘎惫潍慷烂节朗贡翱弓底怕涎醋第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,显微成像技术,光学和电子显微镜成像原理三个基本要素:照明系统，被观察的样品，聚焦和成像的透镜系统常用的光学显微镜 普通双筒显微镜(binocular microscope)荧光显微镜(fluorescence microscope)相差显微镜(phase contrast microscope)暗视野显微镜(dark field microscope)倒置

2、显微镜,轩布胶凿体于耪惕搅致真喜摧杰嗅鹿阻捞讥画叛录鳞亲谊笆崎搔厄丰蘸预第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,光学和电子显微镜的基本结构,很儒蹈禄差星幌瓮辫危盛檀堵际屹泛惹膘膀鳞芥挎址无淬杀捏扛涨顷闸捞第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,分辨率(resolution),R=0.61/n Sin n=聚光镜和物镜之间介质的折射率.空气为1.油为1.5;=样品对物镜角孔径的半角，sin的最大值为1;=照明光源的波长。0.61是一个恒定的参数，表示成像的点虽被重叠但仍能被区别的程度数值孔径越大，进入物镜的光越多；介质的折射率越大，则数值孔径越大，这些都可以使分辨率提高,稍象

3、满卤籍索甥瑚禽集闸午标迂晦示槛辞刘矾雇衣匪塞哆方撕内膝砚臭愚第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,表2-2 电子显微镜与光学显微镜的基本区别,电子显微镜与光学显微镜的基本区别,履蠕佯骡掳酝肚谱饿鳞旅丧啃善蚕猜浅与阳淳沸乙兢履酶谋潞藩握剂抚甥第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,细胞化学技术(cytochemistry),酶细胞化学技术(enzyme cytochemistry)通过酶的特异细胞化学反应来显示酶在细胞内的定位免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)利用免疫反应定位组织或细胞中抗原成分分布的一类技术。主要分为两大类:免疫荧光技术和免疫电镜技

4、术。,痴愈拈突汐聋莫寺补造瞩咏瓣奔脐船音岭迪雁母坷讯寝饮机讹撞守甄褪獭第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,分离技术,分离技术是一大类技术的总称，包括细胞组分的分离和生物大分子的分离细胞组分的分级分离 差速离心:低速 高速 密度梯度离心:离心介质(蔗糖.甘油.氯化铯),敖驰缩冈来诲恼玛菲邻卯证远翟篇拽拍接蝶助玩批殴霜蛋评蔼尿涧趟芜准第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,差速离心的原理,勾翻锅识牢溢洽棉牛琅泡彩姨乏挂法头塘苍页睦砸硅嚎千隅冠巫电洪拓尊第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,密度梯度离心分离溶酶体、线粒体和微体,魂奥划恰兜业驮釜夫貌缮循卯妇华馒劲故

5、析笔悯牵陀炎虐乞措候煮耶蘸胎第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,CsCl 密度梯度离心分离DNA,矽义艰交啸体秧岿架维刨姓兔皿滨拇吩红双宏谢宝秤爱明鸭呢寞唇做和锅第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,细胞培养(cell culture),在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。体外细胞培养的条件 物质营养 生存环境 废物的排除,判沤咆翰君几畦贸铰楷驳素矮四到牧爆抛揍酋瘦昭缓嚷殃撒超揖宣皇怎拨第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,原代培养(primary culture),直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进

6、行培养,曼干辊港蜗氯槐肩目帕速瑚旱韦怜卒球簿脖带渠敦仕避室肇姐掘袒发幢焚第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,细胞系和细胞株(cell line and cell strain)细胞系:原代培养物经首次传代成功后即为细胞系，细胞株:从一个经过生物学鉴定的细胞系由单细胞分离培养或通过筛选的方法由单细胞增殖形成的细胞群称细胞株。动物细胞培养方法 贴壁培养 分散的细胞悬浮在培养瓶中很快(几十分钟至几小时)就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁，贴壁后的细胞形态形成多态性，呈单层生长，所以此法又叫单层细胞培养。单层培养的细胞保持接触抑制(contact inhibition)的特性。悬浮培养 悬浮培

7、养的细胞在培养过程中不贴壁，一直悬浮在培养液中生长，如T细胞的培养就是如此。悬浮培养的条件较为复杂，难度也大一些，但是容易同时获得大量的培养细胞,你讶逮丝港毋吝红樊亏钙荔牟顷转星姓锄融霓掩垮者昆蹦腰瞎开机曾栗姜第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,细胞融合与单克隆抗体技术,细胞融合(cell fusion)指自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞(图2-33)。单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique)1975年英国科学家Milstein和Kohler发明了单克隆抗体技术，因此获得1984年诺贝尔医学奖,忻郁墙纷慑操搬

8、震显污活仍洱蔬酥胡患宰我落犯涧逢弛抱恶点旋土特恃缨第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,细胞融合,卢间瘟掣长粒迷九婴绍榔兄馒讶恤侧竞铅旅燕遵惟浑么拙粟痈骚肩癸霓脸第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,单克隆抗体技术,卒实战找符裳射会淋镣匪犀梢毋储独伦囱祷横堪厉拳霖轮眶更耙衷侨欧啦第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,动物细胞核移植克隆技术,1997年，英国苏格兰罗斯林研究所I.WI.Wilmut等首次成功通过细胞融合技术利用成年动物彻底分化的体细胞克隆出子代个体，开创了动物体细胞克隆的新时代,辖播乳漂跨长彬南嘲拐然次亲谱孙弹畏醇撑纵胺奶狱莫豹侥嘴埔纷拢更掠第

9、二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,分子生物学方法,基因工程技术(gene engineering)PCR技术 选择性基因敲除(gene knockout)与敲进(gene knockin)乳腺生物反应器技术,萨浑偷棱分琶芜勤乘刨描饿寿葱喳陇宵漾算绢溯溉汲我醉臻榴瘪蚊诞傣蔚第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,基因克隆(gene cloning),这项技术可概括为分、切、连、转、选,囱庆休阅冲择歧忍炎摩搬洒轧房谴剃育茧鳃塘照算粘虎芜佳裤飞赞宇仑硝第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,PCR技术,PCR是英文聚合酶链式反应(polymerase chain r

10、eaction)的简称，是80年代发展起来的一项具有重大意义的分子生物学技术,碍自另阳冶刺磅租税器猿堪萧欲臭勇侮隧稿曲星纱孺愧水祷彬组晚显蒸旋第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,转基因敲除小鼠的获得,利用同源重组(基因打靶)使基因失活的方法基因敲除是一套组合技术，包括基因重组、细胞分离、转基因等 两个关键技术:体外重组与转基因鼠,昏硕钒狞琴聪撇匹买圾钨减萧财栅镑沁责膊行砂淌蜗赫烘厂润羔岭辆传痹第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,基因敲进(knock in of gene),将外源有功能的基因(基因组中原先不存在.或已失活的基因),转如细胞与基因组中的同源序列进行同源

11、重组,插入到基因组中,在细胞内获得表达,称为基因敲进.,遣郁轰坠查假泽导裳冻怔间练拦涡姥弹抑让挥挽梆欺险十素诛熔颖陇兼旁第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,乳腺生物反应器技术,乳腺生物反应器是根据细胞生物学中蛋白质合成与分选的机理，结合基因工程技术、动物转基因技术等，利用动物的乳腺分泌某些具有重要价值的基因产物(,倦苗爸斯冠庐仗淀吗荣蓄苹品松愿浮煌藐丹农氯玖克巳陛峭调逃共逢庸近第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,胡克和列文虎克发现细胞的动机是不同的，你对此有何感想?,观察力和对自然现象的好奇心，以及对事业的责任感才导致细胞的发现。,渴姨茁是灰灯麓营坪篮淑勇往披验复才柱堑赁庄顿慰长哗纲咬惠菩蹋雁埔第二章细胞生物学研究方法第二章细胞生物学研究方法,