k222动物细胞融合与单克隆抗体2课时文档资料.ppt

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1、复习回顾：1、植物体细胞杂交的过程是怎样的？2、动物细胞和植物细胞在结构上有何不同？,一、动物细胞融合：1、概念：也称，是指 或 动物细胞结合形成一个细胞的过程。形成的单核细胞称为。2、过程：不同 的两个细胞 细胞,细胞杂交,学海导航,两个,多个,杂交细胞,DNA,杂交,3、原理（与植物原生质体融合比较）诱导方法：、。思考：为什么灭活病毒能够作为诱导剂？不灭活的是否可以？4、意义：克服了 杂交的不亲和性。,物理法,化学法,生物法,远缘,灭活的病毒对细胞没有感染能力。,动物细胞融合,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,植物细胞A,植物细胞B,原生质体A,原生质体B,植物体细胞杂交,去壁,融合,组培,物

2、理法,化学法,生物法：灭活的病毒,5、动物细胞融合与植物体细胞杂交比较,二、单克隆抗体,1.传统的抗体由何种细胞产生？2.B淋巴细胞作用有何特点？3.B淋巴细胞能在体外无限增殖吗？4.米尔斯坦和科勒的创造性设想是什么？,抗体的传统生产方法,从血清中分离抗体,该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,多种效应B细胞,动物体内,多种抗体,抗原,实验目的:制备单克隆抗体.实验原理：实验过程：,1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验,用动物细胞融合的方法制备单克隆抗体,试一试,聚乙二醇或灭活的病毒,杂交瘤细胞,提取抗体,效应细胞,肿瘤细胞,注射抗原,效应B细胞,骨髓瘤细胞,融

3、合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,抗原-抗体杂交法,克隆化,单克隆抗体,筛选2,3.若细胞两两融合后，有几种融合情况？,单克隆抗体制备过程,注射抗原,效应B细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,抗原-抗体杂交法,克隆化,单克隆抗体,筛选2,4.第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？,效应B细胞,B淋巴细胞,注射抗原,骨髓瘤细胞,融合,B-B细胞,杂交瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择性培养基 筛选1,多种杂交瘤细胞,符合要求的杂交瘤细胞,抗原-抗体杂交法,筛选2,克隆化,体外培养,小鼠腹腔内增殖,单克隆抗体,杂交瘤细胞特点：既可以产生特异性抗体，又可以大

4、量增殖,注意：对小鼠做何处理？细胞融合后，培养液中共有几种细胞？有几种融合细胞？杂交瘤细胞的特点：既能大量，又能产生。思考：产生抗体的杂交瘤细胞如何筛选出来的？,注射特定的抗原蛋白,五种（B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、B-B、骨骨、杂交瘤细胞）,其中三种融合细胞。,繁殖,专一的抗体,特定的选择性培养基,读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念,人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。,2.单克隆抗体的概念,单:单个细胞 克隆:无性繁殖单克隆

5、抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体,单克隆抗体的优点和应用,优点 强，高，大。应用：作为诊断试剂：准确识别各种 物质的细微差别，并跟 的结合，具有、的优点。用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗，可制成“”，也有少量用于治疗其他疾病。,特异性,灵敏度,产量,抗原,一定抗原发生特异性,准确 高效 简易 快速,癌症,生物导弹,1、从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状()A.难以预测 B.像甲 C.像乙 D.像丙2（2004年，全国）用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中

6、错误的是（）A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体,基础训练巩固,B,B,3.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）诱导融合的方法完全相同 所用的技术手段不相同 所采用的原理完全相同 都能形成杂种细胞A.B.C.D.4.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞

7、小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞A BC D,C,A,创新应用训练5右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？。原因是。（2）图中为 过程，常用作为诱导剂。该细胞继承了，因此不仅能分泌，还有 本领。（3）该方案的目的是。,不能,没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞.,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞的遗传物质,特异性抗体,在体外培养条件下大量增殖,制备单克隆抗体,作业：1、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较。2、单克隆抗体制备过程。,教学目标：1、了解并能简述动物细胞培养的过程、条件及应用 2、举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用教学重点和难点：1.动物细胞培养的过程及条件 2.单克隆抗体的制备和应用,