鱼类细胞工程基础精选文档.ppt
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1、1,课程安排,2,3,4,动物细胞工程,动物细胞工程,是应用细胞生物学和分子生物学的理论和方法,按照人们的设计,进行在细胞水平上的遗传操作,从而获得新型生物。,5,动物细胞工程常用技术,动物细胞培养技术动物细胞融合技术 单克隆抗体技术胚胎移植技术细胞核移植技术,6,动物细胞培养,细胞培养是指从动物活体中取出小块组织分离出细胞,在模拟机体内的生理环境条件下,进行培养,使之继续生存、生长、增殖。原代培养传代培养永久细胞系,7,细胞培养在水产业的应用,鱼类病毒学:病毒的分离、鉴定以及病毒疫苗的制备鱼类细胞毒理学:评价样品的细胞毒性等水产基础理论鱼类免疫学鱼类遗传学,8,本实验课的目的,培养实验的思维
2、,提高实验技能,锻炼动手能力。掌握无菌操作,养成规范的实验室工作习惯。为将来适应多种领域的工作打基础。,9,鱼类细胞培养的基本条件,温度 温度过低时细胞生长缓慢甚至不生长。利用冷冻保藏细胞可保持细胞的原有分裂分化能力。温度过高导致细胞死亡。这主要是由酶和蛋白质所需要的最适温度决定的。适宜的温度:25(温带鱼)、30(热带鱼)、15(寒带鱼)、37(水生哺乳动物)。,10,2.pH 过酸或过碱可导致细胞死亡。这主要与蛋白质的变性和细胞膜的结构受损有关。用 NaHCO3 和 Hepes 调节培养液的pH至7.4左右。,鱼类细胞培养的基本条件,11,渗透压 细胞膜调节渗透压的能力是有限的。需用平衡盐
3、溶液配制各种试剂。常用的平衡盐溶液:PBS:磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution)D-Hanks,鱼类细胞培养的基本条件,12,营养物 细胞培养基:培养基中含有细胞增殖和生长所需要的各种物质。常用培养基:MEM、M199、L-15 等动物细胞离体培养常常需要血清。血清提供生长必需因子,如激素、微量元素、矿物质和脂肪。小牛血清;胎牛血清。,鱼类细胞培养的基本条件,13,支持物 大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃或塑料培养瓶等作为支持物。气体交换 CO2培养箱,调节CO2的比例为5%。去离子水/三次蒸馏水,鱼类细胞培养的基本条件,14,无菌条件 体外
4、细胞培养仅仅是对所需的细胞进行培养,但环境中(如空气)有各种其他微生物,必须对所需细胞进行无杂菌的隔离培养。无菌条件是细胞离体培养最基本的条件。,鱼类细胞培养的基本条件,超净工作台,15,实验室仪器设备,实验室条件:干燥、紫外灯 仪器设备:高压灭菌锅:用于高压灭菌干燥箱:用于干燥超净工作台:用于无菌操作 玻璃三蒸水器:用于制三蒸馏水恒温生化培养箱:用于恒温培养细胞倒置生物显微镜:用于观察细胞生长液氮罐:用于细胞长期保存,16,考核方法,实验报告(论文格式)一.目的与意义 二.材料与方法三.实验结果四.讨论(问题经验体会)要求:多查阅参考文献,实验中胆大心细。,17,修读要求,1无菌操作,严格规
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