实验八细菌鉴定中PPT文档.ppt

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1、一、实验目的,掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V.P的原理及方法。掌握以上实验的用途。,二、实验原理,淀粉实验糖发酵实验 发酵后产生的有机酸：乳酸、醋酸、丙酸等（溴甲酚紫变色范围pH5.26.8,pH6.8紫色）发酵后产生的气体：甲烷、氢、二氧化碳等（德汉氏小管内有气泡，产气漂浮）,糖发酵试验现象,二、实验原理,M.R.及V.P实验 甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂变色，甲基红指示剂变色范围（红4.46.2黄，中间色为橙色）。,二、实验原理,M.R.及V.P实验 VP试验是用来测定某些

2、细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。丙酮酸经缩合、脱羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。,二、实验原理,吲哚实验 吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。,三、实验器材,培养基1、淀粉培养基:500ml（分装于四个三角瓶，包扎，121126灭菌30min）蛋白胨 10g 可溶性淀粉 2g氯化钠 5g 琼脂 1520g牛肉膏 5g 水 1000ml pH 7.22、糖发酵培养基：300ml（

3、分装于28只试管，包扎，112115灭菌30min）蛋白胨 10g 氯化钠 5g 葡萄糖 10g 水 1000ml pH 7.4 溴甲酚紫溶液（1.6%水溶液）1ml 3、M.R.及V.P实验:600ml（分装于56只试管，包扎，112115灭菌30min）蛋白胨 5g K2HPO4 5g 葡萄糖 5g 水 1000ml pH 7.27.44、吲哚培养基:300ml（分装于28只试管，包扎，121126灭菌30min）蛋白胨 10g 氯化钠 5g 水 1000ml pH 7.6,三、实验器材,菌种1、大肠杆菌2、枯草芽孢杆菌3、产气肠其他1、试管6组 28个/组（每个试管带一个德汉氏小管）2、

4、平皿2组 16个/组3、三角瓶2组 8个/组,四、实验步骤,（一）准备实验器材及培养基（3人/组）1、淀粉培养基1瓶，培养皿三个 2、糖发酵培养基7支 3、M.R.,V.P培养基14支 4、吲哚培养基7支,（二）接种培养,接种方案,（三）结果观察,淀粉试验加入碘液观察葡萄糖/乳糖发酵试验直接观察。VP试验：去塞，加40KOH 15滴，振荡，再加等量奈酚，振荡，37振荡培养30min，观察。MR试验：加甲基红试剂23滴，观察。吲哚试验：加1ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振荡，静止片刻使分层，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴，观察。,五、实验结果及分析,六、思考题,1.糖发酵试验中，所安装的杜氏小管起什么作用？2.V.P试验与M.R.试验的最初作用物以及最终产物有什么异同？为什么会出现最终产物的不同。3.吲哚是细菌分解哪一种氨基酸的产物？,