血栓调节蛋白和血栓性疾病文档资料.ppt

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1、抗凝物质-启动蛋白C(protein C，PC)抗凝途径的重要辅因子 通过与凝血酶结合形成TM-凝血酶复合物参与机体抗凝和纤溶，与血栓形成有着密切的关系,凝血酶调节蛋白(thrombomodulin，TM),抗凝机制,（TF）a 凝血酶 凝血酶 抑制（激活）纤溶系统,内源,外源,a a,a,a a,AT-,HC,P C APC PS,TFPI,TM+凝血酶,TM的概况 1960年，Mammen发现含凝血酶血浆具有抗凝作用 1976年，Stenflo证明这种抗凝物质是蛋白C 如何？PC APC 1981年，Esmon首先从兔肺中分离出纯化 TM 激活蛋白C 1984年，Salem 分离 人胎盘T

2、M 1986年，Jacubowski 分离牛TM 1988年，Kumada分离鼠TM 1987年，Jackman RW将人TM的cDNA分离、测序 重组人TM合成,APC+钙离子+PS 降解 a和a 抗凝作用,PC的抗凝途径经典试验 纯合子PC缺乏-新生儿爆发性紫癜 杂合子PC缺乏-一部分患有血栓 PC水平减少-DIC有关（DIC指标）,APC+钙离子+PS 降解 a和a 抗凝,TM的结构由557个氨基酸构成的、不具备内在酶活性的1型跨膜糖蛋白 胞外区-496个氨基酸 1-226个氨基酸组成的第一区域 227-462个氨基酸组成的第二区域，由6个表皮生长因子()样结构区（16区）组成的重复序列

3、 组成 富含丝氨酸/苏氨酸的第三区域，第6个EGF分子区和跨膜区域之间 跨膜序列-23个氨基酸 含2个半胱氨酸的单链跨膜区域，即第四区域 胞内区-38个氨基酸 为一短的尾部，即胞浆区或第五区域,TM五个区域（功能上）第一区域-不参与激活活化蛋白C的过程，但为受体介导的胞吞所 必需，参与内皮细胞在肿瘤生长和炎症过程中的调节 第二区域-46区有重要的钙离子结合点，为蛋白C活化所必需 第三区域-附加硫酸软骨素部分对TM与凝血酶的结合起稳固作用 第四区域-人血尿中有活性的TM可能来源于分解的跨膜成分 第五区域-胞浆区，与TM的内吞和降解有关,TransmembraneCytoplasmic Rich

4、Ser/Thr EGF-Repeats Lectin Like Ca PC Activating Thrombin BindingCOOH NH3 Plasma Membrane TM的结构和cDNA克隆示意图,6,5,4,3,2,1,TM的合成和表达 血管、淋巴管的内皮细胞 人胚胎组织中的合体滋养层细胞 中性粒细胞、单核细胞、血小板、间皮细胞 血、尿、关节组织-以维持血液、淋巴液、滑液呈液 体状态，以防凝块,TM凝血酶复合物 如何结合？内皮膜上的TM与凝血酶有很强的结合力，以1：1的比例形 成TM凝血酶复合物 TM上的硫酸软骨素部分，提供另一个参与PC活化的凝血酶 结合位点，可增加TM与凝血

5、酶的亲和力10-20倍 TM凝血酶复合物的形成使凝血酶构型发生改变，在钙离子 参与下，特异结合蛋白C，发挥TM的抗凝作用 由于TM凝血酶复合物的形成，抑制了凝血酶与纤维蛋白原 和蛋白酶激活受体-1（PAR-1）的相互结合 由于TM凝血酶复合物的形成，遮盖和抑制了血小板上的 凝血酶受体，抑制血小板与内皮的黏附和聚集,Thrombomodulin protein C,Protein CReceptor(EPCR),Thrombin,+Protein S,ActivatedProtein C,fibringen receptor?platelet+,1.Physiological anticoagu

6、lation2.Modulation of pro-inflammatory reponse,蛋白C途径模型,TM的功能 加速蛋白C的激活：作为强的蛋白C激活物，TM能使依赖凝血酶的蛋白C活化过程加快两个以上的数量级。降低凝血酶的功能：TM介导调控体内重要的两种抗凝机制 抑制凝血酶的促凝结构-因微血管系统富含TM，这种环境下所产生的凝血酶绝大部分都被TM包围或分隔 减少凝血酶的生成-大量激活蛋白C（APC）的形成使a和a水解加速，抑制凝血酶过多地产生,对纤溶的作用 TM凝血酶复合物能活化凝血酶激活的纤维蛋白降解抑制物（TAFI）。单链尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）也已被证实是TM凝血酶 复合

7、物的附加底物，进一步肯定了TM在纤维蛋白降解过程中具有广泛 的作用。TAFI与蛋白c竞争性的与TM凝血酶复合物结合，形成了一个分 散的表面。,TM的其它功能 通过生物学、结构学、基因工程分析等研究发现，TM不需要与PC、TAFI或凝血酶结合，也能发挥某些其它的生物功能，但必需通过血凝素样分子和EGF区域来介导。抗肿瘤、抗炎症、稳定胚胎发育过程等,Platelets,Inflammatory cells,IIa,Va,VIIIa,Fibrinmonomer,X,Xa,Cellular,TNFaIL1,X,X,X,Quiescence,TF-Vlla,X,*Inactivation,Inactiv

8、ation,AT,GAG,Endothelium,TM-IIa,Protein S,Prot C,APC,Inactivation,X,X,X,Vascular/proteins Fibrinogen,Fibrinolysis,Restoration of Capillary blood flow,PAI-1,X,Protein Z,ZPI,Ischemia/infarction,Site,TPI,TM基因多态性与人类疾病 TM基因多态性与血栓和动脉硬化的关系 133C/A多态性-心肌梗死（MI）33G/A多态性-MI或颈动脉硬化 A25T多态性-使MI的危险性提高 EGF6区Ala455Va

9、l多态性-与MI相关 TM基因多态性与TM的功能 Arg385Ser多态性（EGF 4区）-使TM的表达和TM的辅因子活 性减少 EGF 4区和5区域环间的突变-使TM的抗凝辅因子活性减低甚至完 全丧失 del791-801,Arg246-第一个导致人类TM功能完全丧失的基因 突变，与血浆TM浓度的减少（大约为正常人的50）,TM和血栓疾病 老鼠服用TM 减轻凝血酶诱导的血栓栓塞（依赖TM）注射抑制PC活化的抗体 加强凝血酶的效果 三种不同程度的TM功能缺陷的小鼠 完全TM缺陷的小鼠由于胎盘发育缺陷而死于宫内 表达50%TM功能的小鼠不会引起小鼠自发性血栓形成，但会增加肺内纤维蛋白的形成而导致

10、持续性的低氧症,TM功能下降 导致血栓形成,TMPro mice（Glu387Pro 点突变基因小鼠）尽管TM激活PC的能力丧失，但只是轻度增加血栓形成的危险性 TM与其它附加的危险因素结合才可能参与或导致血栓形成内皮细胞损伤时，局部TM缺乏触发了凝血和血栓形成 让野生型胚胎和TM完全缺陷的胚胎干细胞进行杂交，生产出的鼠的血管内皮上有一不连续的表面，由TM完全缺陷的区域和邻近的TM正常表达的区域相互交替形成的血管内皮上，纤维蛋白沉积仅仅出现在TM缺陷的地方。内皮细胞中敲除TM基因 敲除TM基因后不会影响胚胎发育，但活产的动物由于在动脉和静脉自发性血栓形成而导致多脏器损害，出生后短期内死于消耗性

11、凝血病。,TM和动脉硬化 在动脉硬化损害区，内皮上TM的局部缺失导致病变部位PC活化受损 血浆TM的基础水平能够反映内皮细胞TM表达，但它与动脉硬化疾病之间的关系不肯定 局部TM的增加是否对动脉硬化有保护作用不肯定,在血管再狭窄和静脉移植发生粥样硬化过程中，TM对局部血管壁的病理改变可能起调节作用 将逆转录病毒的TM注入人为扩张的兔股动脉，可减少血栓负荷、血管壁膜再形成、炎症细胞的浸润和基质的退化，说明平滑肌细胞增殖受抑与TM有关 在内皮细胞中发现TM可通过MAP激酶/ERK途径调节依赖凝血酶受体的胞间信号转导,TM和中风 有研究表明脑出血与血浆TM水平呈负相关 与其他血管床比较，TM在脑毛细血管的表达很低，可能是因为脑内某些区域缺乏TM。体外试验中脑血管TM的表达可被星型细胞释放的TGF（转化生长因子）抑制，提示TM可能影响星型细胞的功能，从而防止凝血酶诱导的神经细胞死亡。动物研究显示用可溶性TM治疗可极大地改善脊髓损伤的预后,TM目前研究状况TM作为内皮损伤指标的证据 TM与DIC TM、VWF、TF的关系 TM与炎症和多脏器功能衰竭 TM与肿瘤重组TM（ART-123）的临床应用 细胞保护和抗炎作用 DIC 抗血栓治疗肝素治疗与TM的关系 TM的检测方法：抗原测定（TM片段）活性测定,谢 谢！,