保健食品功效成分及卫生指标检验规范.doc

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1、功效成分及卫生指标检验规范功效成分及卫生指标检验规范1 主题内容和适用范围1.1 本规范规定了保健食品和原料的卫生要求、功效成分和卫生指 标的检验项目和方法。1.2 本规范适用于保健食品的检验受理、 项目的确定和方法的选择。2 基本要求2.1 凡保健食品，必须符合 保健食品通用卫生要求 ，该要求 所列 的各项目必须按规定执行。附表 1 所列检测项目是对 保健食品通用 卫生要求 补充规定。2.2 保健食品中使用的添加剂必须符合 GB2760 食品添加剂使用 卫生标准规定的品种名单。检测机构根据产品配方检测合成色素、 防腐剂、甜味剂及抗氧化剂的含量。2.3 凡使用有机溶剂提取物为原料的产品，其使用

2、的有机溶剂要符合 GB2760 附录 D 食品工业用加工助剂推荐名单要求。2.4 保健食品应具有与产品配方和申报的保健功能相适应的功效成 分或特征成分，申报时须检测配方中主要原料所含的功效成分或特征 成分。附表 2 所列原料为主的产品须检测表中规定的项目。2.5 保健食品评审专家委员会可根据产品的具体配方、工艺等相关 资料，要求申报单位检测指定的项目。2.6 功效成分、特征成分、营养成分及卫生学指标的检测方法应根 据其产品适用的方法学范围选择国家标准、 卫生部部颁标准、 行业标 准以及国际上权威分析方法进行测定。2.7 在没有相应的标准方法之前，其产品中所声称（具有）的功效 成分或特征成分的检

3、测方法及检测所需的标准品对照品及特殊试剂 均由申报单位提供， 并说明其产品中功效成分或特征成分分析方法的 来源。如属自主开发研究的分析方法， 需提供方法学研究的相关资料， 同时将方法学研究的资料报卫生部保健食品功效成分检测协作组 （中 国疾病预防控制中心营养与食品安全所） 备案，必要时卫生部将组织 方法学验证，其费用由申报单位承担。2.8 检验机构受理保健食品检测时， 申报单位应提供该产品的配方、 工艺及企业标准等相关资料。2.9 卫生部对保健食品的功效成分的检测机构进行认定，检测机 构的名单由卫生部门公布。 保健食品的功效成分检测工作应在卫生部 认定的检测机构进行。 违禁成分的检测由卫生部指

4、定的检验机构进行 检测。附表1:下列类型的产品、或下列原料为主的产品指标检测项目表产品类型检测项目1固体水分、灰分2口服液可溶性固形物、pH3海产品镉4鱼油类酸价、过氧化值（降血脂类产品需检测胆固醇）5茶叶有机氯农药残留（八八八、滴滴涕）6红曲黄曲霉毒素E 1、桔青霉素7中药材水、八八八、滴滴涕8苹果、山楂展青霉毒素9片剂和胶囊崩解时限10抗疲劳、减肥和违禁药物改善生长发育的产品附表2 :功效成分和特征成分检测项目表1营养素补充剂产品中标识的营养素矿物质）（包括维生素和2五加科参类皂甙3蕈类（灵芝、蘑 菇等）膳食纤维4冬虫夏草菌丝体腺苷5红景天类红景天甙6芦荟类芦荟甙7大蒜类大蒜素8螺旋藻类蛋

5、白质、胡萝卜素、素B2维生素B1、维生9茶叶类茶多酚10魔芋类膳食纤维11纤维素类膳食纤维12磷脂类丙酮不浴物、乙醚不浴物（原料）13红曲类洛伐它丁14植物油类脂肪酸、维生素E15动物油类脂肪酸16初乳类免疫球蛋白17鹿血类蛋白质、氨基酸18蚂蚁类锰、蛋白质19蚯蚓类蚓激酶（溶纤酶）、蛋白质20蛇、蝎等蛋白质、氨基酸21角鲨烯角鲨烯22蜂皇浆10-羟基癸烯酸23蜂花粉、蜂胶总黄酮24甲壳质产品脱乙酰度，产品如为复方应检测原料 的脱乙酰度25蛋白质、氨基酸蛋白质、氨基酸制品26褪黑素产品褪黑素 产品原料（褪黑素）需提供原料纯度证明并检测3 保健食品中功效成分的检验方法见附件 1附件 1目录1.

6、保健食品中红景天甙的测定2. 保健食品中大蒜素的测定3. 保健食品中芦荟甙的测定4. 保健食品中脱氢表雄甾酮（DHEA的测定5. 保健食品中吡啶甲酸铬的测定6. 保健食品中盐酸硫胺、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定7. 保健食品中肌醇的测定8. 保健食品中肉碱的测定9. 保健食品中a 亚麻酸、丫 一亚麻酸的测定10. 保健食品中免疫球蛋白 IgG 的测定11. 保健食品中水溶性粗多糖的测定12. 保健食品中人参皂甙的高效液相色谱测定13. 保健食品中原花青素的测定14. 保健食品中核苷酸的测定15. 保健食品中洛伐他丁的测定16. 保健食品中中药功效成分的鉴别方法17. 保健食品中银杏叶

7、总黄酮的高效液相色谱测定18. 保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定19. 保健食品中金雀异黄素的测定20. 保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定21. 五味子类保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的高效液相色谱测定22. 保健食品中腺苷的测定23. 保健食品中褪黑素的测定附：保健食品功效成分检验方法协作组提供的检验方法1. 保健食品中人参总皂甙的测定2. 保健食品中总黄酮的测定3. 壳聚糖的游离氨基测定及脱乙酰度的计算4. 蚓激酶活性的测定5. 乙醚不溶物、丙酮不溶物的测定6. 角鲨烯的测定1保健食品中红景天甙的测定Determ in ati on of salidroside

8、 in health food第一法高效液相色谱法1范围本方法规定了保健食品中红景天甙的测定方法。 本方法适用于以红景天为主要原料的保健食品中红景天甙的测定。 本方法的检出限：0.02卩go本方法的线性范围：0.010.50卩g/mLo2 原理将混匀的试样使用甲醇进行提取，根据高效液相色谱紫外检测器定性定量检 测。3 试剂除非另有说明，在分析中仅使用双蒸水。3.1 乙酸钠分析纯。3.2 甲醇优级纯。3.3 石油醚分析纯。3.4 红景天甙标准溶液准确称量红景天甙标准品 0.0200g，加入甲醇溶解并 定容至10mL此溶液每 mL含2.0mg红景天甙。4仪器4.1高效液相色谱仪：附紫外检测器（UV

9、o4.2 超声波清洗器。4.3 离心机。5分析步骤5.1 试样处理5.1.1 液体试样：准确量取摇匀后的液体试样 20mL于 50mL容量瓶中，先加入 25mL甲醇，超声10min后用甲醇定容至刻度，混匀，经0.45如滤膜过滤后供液 相色谱分析用。5.1.2 固体试样：取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎混匀， 准确称取适量试 样（精确至0.001g ）于50mL容量瓶中，加入甲醇,超声提取10min。取出后加 入甲醇定容至刻度，混匀后以3000rpm/min离心3min。经0.45m滤膜过滤后供 液相色谱分析用。5.2 液相色谱参考条件5.2.1 色谱柱：C18 柱 4.6 x 250mm,5

10、x m5.2.2柱温：室温。5.2.3紫外检测器：检测波长215 nm。524流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸钠溶液二9:91。525 流速：1.0mL/min。526进样量：10儿。527色谱分析：取10卩L标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性， 以试样峰高或峰面积与标准比较定量。5.3标准曲线制备 分别配制浓度为0.0、0.01、0.02、0.05、0.20、0.50卩g/mL 红景天甙标准溶液，在给定的仪器条件下进行液相色谱分析，以峰高或峰面积对 浓度作标准曲线。5.4 分析结果的表示5.4.1 计算h1X C X VX =h2X mX 1000式中：X 试样中红景天甙的含

11、量，mg/g；h 1 试样峰高或峰面积；C标准溶液浓度，卩g/mL；V试样定容体积，mL;h 2 标准溶液峰高或峰面积；m 试样质量，g。计算结果保留三位有效数字。6技术参数准确度 方法的回收率在91.7 %98.6 %之间。允许差 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平 均值的土 10%第二法极谱法1范围本方法规定了保健食品中红景天甙的测定方法。本方法适用于以红景天甙为主要功效成分的保健食品中红景天甙的含量测定。本方法的最低检出量为0.05卩g。若取1.00mL液体类试样，其最低检出浓度 为0.05mg/L;若取0.25g固体类试样、则最低检出浓度为 0.2mg/kg。

12、本方法的最佳线性范围为 0.1卩g/mL1.0卩g/mL。2原理保健食品中红景天甙用甲醇提取，D 101型大孔吸附树脂净化处理，经亚 硝基化后，其衍生物在硼砂溶液中具有电活性，在滴汞电极上还原产生极谱波。 用峰电位定性，以试样与标准的峰电流（lp）比较定量。3试剂除注明外，试剂为分析纯，实验用水为重蒸馏水。3.1 甲醇。3.2 D101 型大孔吸附树脂。3.3 饱和硼砂溶液。3.4 0.2%盐酸溶液。3.5 2mol/L 亚硝酸钠溶液。3.6 1.0mg/mL 红景天甙标准贮备溶液：准确称取 0.1000g 红景天甙对照品（中 国药品生物制品检定所）于烧杯中，加水溶解并定容至 100mL 容量

13、瓶。此溶液 每毫升含红景天甙I.Omg,冰箱保存。3.7 10.0卩g/mL红景天甙标准使用溶液：准确吸取红景天标准贮备溶液 I.OOmL 于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液每毫升含红景天甙10.0卩g。4 仪器与设备4.1 极谱分析仪。4.2 超声波清洗机。4.3 10mmX 150mm玻璃层析柱。5 分析步骤5.1 试样的制备及予处理5.1.1 液体类试样（如保健酒、口服液、饮料等）准确吸取摇匀的试样液1.00mL于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度、摇匀， 供测定用。5.1.2 一般固体类试样（如保健茶、蜜片、胶囊等）准确称取经粉碎并过20目筛的试样0.25g,置50mL三角瓶中

14、，加入10mL 甲醇，于超声波清洗机超声提取10min、过滤，滤液收集于50mL容量瓶中。再 加入 10mL 甲醇于三角瓶中，重复超声提取一次，合并滤液于上述容量瓶中，用 水稀释至刻度，供测定用。5.1.3 个别组分复杂的固体类试样 个别组分复杂的固体类试样需经柱层析净化处理。层析柱制备。取适量 D101 型非极性大孔吸附树脂于烧杯中，加水洗涤数 次，缓缓倾入10mm x 150mm玻璃层析柱内，湿法装柱、树脂约高 50mm， 10mL 甲醇注入层析柱上端进行淋洗，弃淋洗液。净化。按5.1.2节处理、提取试样，准确吸取10.0mL提取试液，缓缓注入层析柱上端，用玻璃蒸发皿收集流出液。 再吸取

15、10mL 甲醇分两次注入层析柱进行 淋洗、合并流出液于蒸发皿中，置70C恒温水浴挥干，用水溶解移入 10mL容量瓶中，水稀释至刻度，供测定用。5.2 极谱分析参考条件单扫描极谱法（SSP法）。选择起始电位为一 400mV，终止电位一900mV， 扫描速度250mV/S,三电极，二次导数，静置时间5s及适当量程。于峰电位（Ep） 600mV （vs.SC日处，记录红景天甙的峰电流（lp）nA。5.3 标准曲线的绘制准确吸取10.0卩g/mL红景天甙标准使用溶液 0, 0.10, 0.20, 0.40, 0.60, 0.80, 1.00mL 于 7 支 10mL 比色管中（相当于含 0, 1.0,

16、 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0 卩 g 红景天甙）。各管加入 2.0mL 2mol/L 亚硝酸钠溶液及 1.0mL 0.2%盐酸溶液置沸水 浴10min,取出冷却至室温后各管再加入1.0mL饱和硼砂溶液，加水稀释至刻度， 摇匀。将各管溶液依次移入电解池, 置三电极系统。 按上述极谱分析参考条件 （5.2） 下测定，记录各管红景天甙的峰电流（Ip）。以红景天甙含量为横座标，其对应 的峰电流为纵座标,绘制标准曲线。5.4 试样测定5.4.1 标准曲线法准确吸取上述待测液0.1mL0.5mL于10mL比色管中，（视其含量高、低 而定）加入 2mL 2.0mol/L 亚硝酸钠溶液,

17、 以下操作同 5.3 节标准曲线绘制项下测 定试液中红景天甙的峰电流（ Ip）。5.4.2 标准加入法分别吸取上述待测液0.10.5mL于2支10mL比色管中（视其含量高、低而 定）。其中一管加入所吸取待测液中红景天甙含量大致相当的红景天甙标准使用 溶液（可先予测一次） ,各管再加入 2mLL2.0mol/L 亚硝液钠溶液,以下操作步 骤同 5.3节标准曲线绘制项下。测定两管溶液中红景天甙的峰电流（Ip）。6 结果6.1计算6.1.1标准曲线法mxViVx 1000式中：X 试样中红景天甙含量， mg/g （或mg/mL）；A从标准曲线上查得的含量，卩g;V试样的定容体积，mL;V1测定用试样

18、溶液体积，mL;m试样的质量（或体积），g （或mL ）。6.1.2标准加入法X=B x h1(h2hi) XmXV1Vx 1000(2)式中：B加入红景天甙标准含量，卩g;h1未加红景天甙标准管中溶液的峰电流，nA;h2加红景天甙标准管中溶液的峰电流，nA;X，m，V1，V与（1）式中表述含义相同。6.1.3结果表示：计算结果保留3位有效数字。6.2技术参数准确度：本方法的平均添加回收率为 92.5%精密度：相对标准偏差（RSD） 7.0%干扰因素：若试样中共存黄酮甙，有正干扰，测定时加入1 %硝酸铝溶液0.5mL, 即可消除此干扰。2保健食品中大蒜素的测定Determ in ati on

19、of allitridum in health food1范围本方法规定了保健食品中大蒜素（三硫二丙烯，GHoS）的测定方法。本方法适用于以大蒜（油）为主要原料，制成的酒、胶囊、片剂中大蒜素的 含量测定。本方法最低检出浓度为0.0430mg/mL；取100mg试样，提取定容5.0mL时, 试样中大蒜素最低检出质量浓度为 0.20g/100g。本方法最佳线性范围：0.320-3.00卩g。2原理根据大蒜素为挥发性油成分，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采用外 标法定量。3试剂3.1无水乙醇（分析纯）。3.2正己烷（分析纯）。3.3标准溶液配制 称取0.1000g标准，置于10mL容量瓶中，用正

20、己烷定容至 刻度，该溶液中含大蒜素浓度为10.0mg/mLo此溶液可在冰箱中保存七天。取该 溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素浓度 为 1.0mg/mLo 4仪器4.1气相色谱仪，附氢火焰（FID）检测器。4.2数据处理机，或积分仪。4.3分析天平：万分之一。4.4超声清洗机。4.5 离心机，3000r/min。5分析方法5.1试样提取5.1.1固体试样精密称取试样0.100g，加无水乙醇2.5mL ,密塞，超声70min,取出冷却，加正己烷2.5-25.0mL定容（调节大蒜素含量约为 1.0mg/mL左右）， 振摇，静置分层后，取上层液进样。5.1.2液

21、体试样 精密吸取20.0 mL试样，于分液漏斗中，加5mL正己烷振摇 提取1mi n,静置（或离心）分层后，取上层液进样。5.2气相色谱参考条件5.2.1 色谱柱 玻璃 色谱柱长：2米，内装担 体：硅藻土 （ Chromosorb W（AW） ,60-80 目;固定相：0.5%己二酸乙二醇酯（Ethylene Glycol Adipate ）;。522柱箱温度：90C。523进样口温度：150C。5.2.4 鉴定器温度：150C。5.2.5 载气：氮气（55mL/min）。5.2.6 氢气：50mL/min ;空气：500mL/min。5.2.7鉴定器灵敏度：2;记录仪衰减：3。5.2.8进样

22、量1卩L。5.3定性分析 在参考操作条件下，以对照品与试样比较保留时间定性。5.4定量分析试样中大蒜素色谱峰面积或峰高与标准的色谱峰面积或峰高比 较定量。5.5分析结果表述试样中大蒜素的含量按式（5.5.1 ）计算。5.5.1计算W=Ai C VA m 1000100式中：W 大蒜素的含量,A试样使用液色谱峰面积或峰高;A2标准使用液峰面积或峰高;C标准使用液浓度，mg/mLV 试样定容体积，mL;m试样的质量，g5.5.2结果表示计算结果保留三位有效数字6技术参数6.1回收率：在不同的试样中不同浓度加标回收率为97.8-116%6.2精密度：同一试样6次测定结果的RSD为2.10%。6.3两

23、次测定结果相对误差：w 10%6.4干扰因素：在超声时,注意密塞。7参考色谱图rK图A标准品气相色谱图图中tr=0.588 溶剂， tr=3.045 大蒜辣素 tr=10.912大蒜素图B片剂试样气相色谱图图中tr=0.6 溶剂， tr=3.062 大蒜辣素 tr=11.011大蒜素3保健食品中芦荟甙的测定1 范围本方法规定了芦荟胶囊、芦荟片剂、芦荟汁等保健食品中芦荟甙含量的测定 方法。本方法适用于芦荟胶囊、芦荟片剂、芦荟汁等保健食品中芦荟甙含量的测定。 本方法的最低检出量10ng本方法的最佳线性范围：0100卩g/mL y=1124194x+3215;线性关系r=0.9999 2原理用甲醇+

24、水（55+45）作为溶剂，提取试样中的芦荟甙，经高效液相色谱仪C18柱分离，紫外检测器293nm条件下检测，以芦荟甙保留时间定性，峰面积定3 试剂3. 1甲醇色谱纯；3. 2水重蒸水；3. 3芦荟甙标准品 纯度98%3. 4芦荟甙标准溶液的制备 精确称取芦荟甙标准品10mg，加流动相甲醇+水（55+45）溶解并移入100mL容量瓶中，定容至刻度 4仪器设备4. 1高效液相色谱仪附紫外检测器4. 2色谱柱 C18 （以十八烷基键合硅胶填料为填充剂） 或具同等性能的色谱柱,150mmm式中：X 试样中芦荟甙含量，mg/g (mg/mL)；Ai试样中芦荟甙的峰面积；C 标准液的质量浓度，mg/mL

25、；A2 标准液中芦荟甙的峰面积；V 试样定容体积，mL ；m 试样的质量，g (mL )。计算结果保留三位有效数字。8. 允许误差同一试样两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10%4. 保健食品中脱氢表雄甾酮（DHEA的测定1范围 本方法规定了保健食品中脱氢表雄甾酮（DHEA含量的测定方法。本方法适用于添加在片剂、胶囊等试样类型中功效成分脱氢表雄甾酮（DHEA 含量的测定。本方法的最低检出量 6.00mg/kg。本方法的最佳线性范围：0.040010.0mg/mL=2原理将粉碎的胶囊和片剂试样使用流动相进行提取和稀释，根据高压液相色谱紫 外检测器定性定量检测。3试剂3.1 甲醇 优级纯。3.

26、2 脱氢表雄甾酮（DHEA标准溶液 准确称量脱氢表雄甾酮（DHEA标准品 （Sigma公司，纯度99% 0.0100g ,加入检测用流动相并定容至 10mL此溶液每mL含1mg脱氢表雄甾酮（DHEA。4仪器设备附紫外检测器（UV4.1高效液相色谱仪:4.2 超声波清洗器。4.3 离心机。5分析步骤5.1 试样处理：取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎混匀， 准确称取试样（精 确至0.001g ）于容量瓶中，加入流动相定容至10.0mL,使浓度大约为每mL中含 脱氢表雄甾酮（DHEA 1mg超声提取5min后以3000rpm/min离心3min。准确 取2.0mL试样溶液于试管中，加入流动相定容至

27、 5.0mL，摇匀。经0.45 5滤膜 过滤后，备用。5.2 液相色谱参考条件5.2.1 色谱柱：C18 柱 4.6 X 250mm5.2.2柱温：室温。5.2.3紫外检测器：检测波长215 nm。5.2.4 流动相：甲醇：水二80： 20。5.2.5 流速：0.6mL/min。5.2.6 进样量：107。5.2.7色谱分析：取10卩L标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性， 以试样峰高或峰面积与标准比较定量。5.2.7色谱图在上述色谱条件下，脱氢表雄甾酮（DHEA的保留时间为7.40。5.3标准曲线制备 分别配制浓度为0.0、0.0400、0.200、1.00、5.00、10.0mg

28、/mL 脱氢表雄甾酮（DHEA标准溶液,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析,以峰高 对浓度作标准曲线。5.4分析结果表示5.4.1计算hiX CX V X 5X =h2X mX 2式中：X 试样中脱氢表雄甾酮（DHEA的含量，mg/g；h1 试样峰高或峰面积；C标准溶液浓度，mg/mLV试样定容体积，mLh2-标准溶液峰高或峰面积；m-试样质量，g。5.4.2结果表示保留三位有效数字。6技术参数准确度 方法的回收率在91.5%96.0%之间允许差平行样相对误差 5%5. 保健食品中吡啶甲酸铬的测定1范围 本方法规定了保健食品中吡啶甲酸铬含量的测定方法。本方法适用于吡啶甲酸铬作为功效成分添加于片

29、剂、胶囊等试样类型中含量 的测定。本方法的最低检出量10.0mg/kg。 本方法的最佳线性范围：2.00100卩g/mL。2原理将粉碎的胶囊和片剂试样使用甲醇：水 =1: 1进行提取和稀释，根据高压液 相色谱紫外检测器外标法定性定量检测。3试剂3.1 甲醇 优级纯。3.2 磷酸氢二钾、磷酸二氢钾分析纯。3.3 吡啶甲酸铬标准溶液 准确称量吡啶甲酸铬标准品0.0100g ,加入甲醇：水 =1:1并定容至100.0mL,如有少量残渣,可使用超声波加速溶解。此溶液每 mL 含100卩g吡啶甲酸铬。4仪器设备附紫外检测器（UV4.1高效液相色谱仪:4.2 超声波清洗器。4.3 离心机。5分析步骤5.1

30、 试样处理：取20粒片剂或胶囊试样进行粉碎或混匀，准确称取一定量试样于刻度试管中，加入甲醇：水 =1: 1并定容至20.0mL,超声提取5min后以 3000rpm/min离心3min。经0.45 m滤膜过滤后，备用。5.2 液相色谱参考条件5.2.1 色谱柱：C18 柱 4.6 X 250mm5.2.2柱温：室温。5.2.3紫外检测器：检测波长254nm。5.2.4 流动相：0.125mol/L磷酸盐缓冲溶液：乙腈=425： 75。5.2.5 流速：0.5mL/min。5.2.6 进样量：107。5.2.7色谱分析：量取10卩L标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定 性，以试样峰高或峰

31、面积与标准比较定量。5.3色谱图在上述色谱条件下，吡啶甲酸铬的保留时间为7.0235.4 标准曲线制备 吡啶甲酸铬标准溶液 标准曲线。5.5分析结果表示5.5.1计算hX =h配制浓度为 0.0、2.00、5.00、10.0、,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析50.0、100 卩 g/mL,以峰高对浓度作iX C xV2X mx 1000式中：X 试样中吡啶甲酸铬的含量，mg/g； hi 试样峰高或峰面积；C标准溶液浓度，卩g/mL；V试样定容体积，mL;h 2-标准溶液峰高或峰面积；m试样量，g。5.5.2结果表示检测结果保留三位有效数字 6技术参数准确度 方法的回收率在91.5%98.4

32、%之间允许差平行样测定相对误差 5%6. 保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定Determ in ati on of thiami ne hydrochloride,pyridox ine hydrochloride, niaci n,n iaci namide and coffe ine content in health food1范围本方法规定了保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因 含量的高压液相色谱测定方法。本方法适用于盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因作为膳食补 充剂添加于片剂、胶囊、口服液、饮料等试样类型中含量的高压液相色谱测定。

33、本方法的最低检出量为盐酸硫胺素 0.4mg/kg、盐酸吡哆醇0.4mg/kg、烟酸 2.0mg/kg、烟酰胺 1.2mg/kg、咖啡因 1.0mg/kg。本方法的最佳线性范围：盐酸硫胺素0.50050.0卩g/mL盐酸吡哆醇0.50050.0卩g/mL烟酸1.00100卩g/mL烟酰胺1.00100卩g/mL咖啡因5.00500卩g/mL2原理将粉碎混匀的片剂、胶囊或液体试样使用甲醇：水：磷酸=100: 400: 0.5进行提取和稀释，根据高压液相色谱紫外检测器外标法定性定量检测。3试剂3.1 甲醇优级纯。3.2 乙腈色谱纯。3.3 磷酸分析纯。3.4 硫酸月桂酯钠(Sodium Dodecy

34、lsulfate )高压液相色谱用离子对试剂。3.5 1-癸烷磺酸钠(Sodium 1-Decanesulfonate )高压液相色谱用离子对试剂。3.6 标准储备液A准确称量已扣除水分的盐酸硫胺素和盐酸吡哆醇标准品各0.0500g，溶于水中并定容至 50mL3.7 标准储备液B准确称量已扣除水分的烟酰胺和烟酸标准品各 0.0400g，溶 于水中并定容至20mL3.8 混合标准使用液 准确称量经80C干燥4h的咖啡因0.0500g ,准确加入标 准储备液A 5mL,标准储备液B 10mL,再加入甲醇：水：磷酸=100: 400: 0.5 混合溶液4仪器和设备4.1高效液相色谱仪：附紫外检测器（

35、UV4.2 超声波清洗器。4.3 离心机。5分析步骤5.1 试样处理5.1.1 取20粒以上片剂或胶囊试样研磨或混匀， 称取一定量试样于试管中（准 确至0.001g ）,加入甲醇：水：磷酸=100： 400： 0.5混合溶液,使浓度为每毫升 中大约含盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇 0.25mg,烟酸、烟酰胺1mg超声提取5min 后以3000rpm/min离心5min,上清液经0.45m滤膜过滤后待进样5.1.2 液体试样直接以甲醇：水：磷酸二100： 400： 0.5混合溶液稀释，充分 混匀后经0.45 Jm滤膜过滤后待进样。5.25.2.15.2.35.2.45.2.5色谱条件色谱柱：液体试样TS

36、K G8 4.6 x 150mm 柱温：室温检测波长：盐酸硫胺素 260nm 咖啡因、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇 硫酸月桂酯钠溶液（530:470:1烟酰胺、盐酸吡哆醇流动相：盐酸硫胺素：280nm5530):乙腈：磷酸=咖啡因、烟酸、:1-癸烷磺酸钠溶液（1.22 850）:乙腈:磷酸=850:150:15.2.65.2.75.3保留时间:流速：1mL/min 进样量：10儿图1在该色谱条件下，盐酸硫胺素（图1 1）保留时间14.305咖啡因（图2 1）保留时间4.986、烟酸（图2 2）保留时间8.728、烟酰胺（图2 3）保留时间9.341、盐酸吡哆醇（图2 4）保留时间18.512 5.

37、4分析结果表示5.4.1计算h1X G x VX =h2X mX 1000式中：X 试样中单一成分的含量，mg/g （mL ;h1 试样峰高或峰面积；G标准溶液浓度，卩g/mL；V试样定容体积，mLh2-标准溶液峰高或峰面积；m 试样量，g (mL。542结果表示检测结果保留三位有效数字。6技术参数准确度 方法的回收率在91.2%102.5%之间 允许差平行测定相对误差 10%7保健食品中肌醇的测定1范围 本方法规定了保健食品中肌醇含量的测定方法。本方法适用于肌醇作为功效成分添加于片剂、胶囊、饮料等试样类型中含量 的测定。本方法的最低检出量为2mg/kg。 本方法的最佳线性范围是0.110mg

38、/mL2原理将固体试样提取液或液体试样稀释液浓缩至干， 经硅烷化处理，以正己烷提 取，气相色谱氢火焰检测器定性定量检测。3试剂3.1 无水乙醇分析纯。3.2 正己烷分析纯。3.3 无水硫酸钠分析纯。3.4 三甲基氯硅烷分析纯。3.5 六甲基二硅氨烷分析纯。3.6 二甲基甲酰胺分析纯。3.7 肌醇标准溶液将肌醇标准品（纯度 99%在100芳C干燥4h，准确称量 0.0500g，溶于乙醇溶液（310），准确配成100.0mL溶液。此溶液每mL含0.500mg 肌醇。3.8 硅烷化试剂 将三甲基氯硅烷、六甲基二硅氨烷、二甲基甲酰胺以1: 2:8的体积比混合制成，临用时现配。4仪器和设备4.1 气相色

39、谱仪：附氢火焰检测器（FID）4.2 旋转蒸发仪。4.3 超声波清洗器。5分析步骤5.1 试样预处理5.1.1 取20粒片剂或胶囊试样研磨或混匀，称取一定量（准确至0.001g ）于试管中，加入乙醇溶液（310）,使浓度为每毫升中大约含肌醇0.5mg,超声提 取10min,在转速为3000r.p.m / min 下离心5min,上清液待用。液体试样如浓 度过高可用乙醇溶液（310）稀释至每毫升含肌醇0.5mg。5.1.2 准确量取1.0mL试样溶液于旋转蒸发仪浓缩瓶中，加入5mL无水乙醇，于60C旋转蒸发仪上浓缩至剩有少量液体，之后再每次加入5mL无水乙醇直至浓缩瓶中液体完全除去。5.1.3

40、向浓缩瓶中准确加入硅烷化试剂5.0mL，使用超声波振超至瓶中内容物完全分散。在70C水浴中加热10min。冷却后加入10mL水,再准确加入3.0mL 正己烷，混摇后放置10min,在转速为3000r.p.m / min下离心5min，取出正己 烷层，加入少量无水硫酸钠，轻轻混摇后放置，取上清液进样。准确量取3.7中肌醇标准溶液1.0mL,并按试样5.1.2起操作，可得肌醇标 准衍生溶液。5.2 气相色谱参考条件5.2.1 检测器：FID5.2.2 色谱柱 BP5 25m x 0.32mmi.d.石英弹性毛细管柱5.2.3 气体流速载气（NO50mL/min尾吹气（2）氢气40空气50分流比15

41、0mL/min40mL/min500mL/min1: 505.2.4 柱温：190C5.2.5 进样口温度：245E5.2.6 衰减：45.2.7 纸速：25.2.8 色谱分析：量取1卩L标准及试样衍生液注入色谱仪中，以保留时间定性, 以试样峰高或峰面积与标准比较定量。5.2.9 色谱图在上述色谱条件下，肌醇的保留时间为5.220。标准色谱图试样色谱图5.3 标准曲线制备配制浓度为0.0、0.1、0.5、2.5、5.0、10.0mg/mL肌醇标准溶液，在给定的仪器条件下进行气相色谱分析，以峰面积对浓度作校正曲线。5.4 分析结果表示5.4.1 计算公式1X C x V x 1002X m式中：

42、X 试样中肌醇的含量，mg/100g （mL）;h1 试样峰高或峰面积；C标准溶液浓度，mg/mL；V试样定容体积，mLh2-标准溶液峰高或峰面积；m试样量，g或mL。5.4.2 结果表示检测结果保留三位有效数字。6技术参数准确度 方法的添加回收率在91.0%97.2%之间 允许差平行样测定相对误差兰0%8保健食品中肉碱的测定1 范围本方法规定了片剂、胶囊保健食品中肉碱的测定方法。本方法适用于以肉碱为主要原料的片剂、胶囊中肉碱的测定。本方法最低检出量为0.27ug。本方法最佳线性范围：0.050mg/mL2.0mg/mL。2. 原理试样中的肉碱以0.5mmol/L的盐酸超声提取，反相色谱分离，与标准品的保 留时间比较定性，以峰面积外标法定量。3. 试剂除特殊说明，所用试剂均为分析纯。实验用水为去离子水或同等纯度的蒸馏 水。3.1 磷酸氢二钾3. 2辛烷磺酸钠3. 3 0.50mmol/L 盐酸3. 4肉碱标准溶液：精密称取干燥至恒重的肉碱标准品（含量98%）0.0200g,用0.50mmol/L盐酸溶解并定容为10.0mL，此溶液浓度为2.0mg/mL。4. 仪器4. 1 HPLC系统，配有紫外检测器和色谱工作站;4. 2超声波提取器；4. 3溶剂微孔过滤器带0.45um水相滤膜。