BPG层析柱实用标准装柱流程的要求规范.doc
《BPG层析柱实用标准装柱流程的要求规范.doc》由会员分享,可在线阅读,更多相关《BPG层析柱实用标准装柱流程的要求规范.doc(10页珍藏版)》请在三一办公上搜索。
1、操 作 标 准目的:为了使BPG300层析柱装柱过程可重复,并能够得到较好的柱效,故建立此操作规范。范围:配合KTA process系统进行有效的蛋白质纯化操作。责任人:层析工序操作人员标准操作程序:1 基本术语概念填料因子(Packing Factor, PF):指在在装柱过程中,用低流速(如60cm/h)对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度(柱高)的比值,GEHC生产的各种常见填料的PF参见GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA;线性流速(linear flow rate):单位时
2、间内液体流经的直线距离,常用cm/h表示;体积流速(volume flow rate):单位时间内液体流经的空间容积,常用ml/min表示;换算:2 准备工作2.1 检查层析柱的完整性,所带配件,是否水平(用水平仪矫正),是否清洁(如有污染应进行清洗)。2.2 确定所用填料及其特性、浓度等以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例,其填料因子(PF)为1.15,新填料(slurry)浓度为75%(保存于20%乙醇中),耐压3bar。2.3 确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例,中试工艺参数:柱高h=10cm;体积流速v1=3ml/min;柱内径d=1.6
3、cm.即,线性流速v2=v1/s柱=3/(3.140.82) cm/min=1.5 cm/min;样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min;在工艺的线性放大中h、v2和t均不变,则可保证样品出峰的位置(洗脱时间)和形状不变。使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数:装柱体积V柱= S柱h=3.141.521L=7L;装柱需要slurry体积Vslurry=V柱PF/Cslurry以DEAE Sepharose Fast Flow为填料,则,Vslurry=71.15/0.75L=10.73L;装入柱中的slurry高度Lslurry=Vslurry/S柱=10.73/
4、(3.141.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1 层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈,旋松密封调节器,用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈;3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝,并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处,在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀,在柱底安装四路二通阀;3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管,另一端连至KTA process上端连接口COLUMN TOP,同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至KTA process的下端连接口COLUMN BOTTOM。 图1、BPG300层析柱安装示意图3.2层析
5、柱下端筛网排气泡3.2.1连接两根足够长的细管到KTA process进样泵的A1和B1进口,两管另一端均放入纯水中;3.2.2从A1泵入纯水:打开UNICORN软件,在system control窗口点击manualvalvesInletA,选择inletA1,insert;InletB,选择closed,insert;Column,选择upflow,insert;PumpFlow,设定流速60L/h,点击execute运行程序充水至BPG柱中2-3cm左右,pause,清除下端筛网中的空气,用注射器吸出筛网中残留的气泡。4装填料4.1准备填料所用填料为DEAESepharose Fast
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- BPG 层析 实用 标准 流程 要求 规范
链接地址:https://www.31ppt.com/p-4196570.html