4GCMS数据处理和定性定量分析.ppt

《4GCMS数据处理和定性定量分析.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《4GCMS数据处理和定性定量分析.ppt（48页珍藏版）》请在三一办公上搜索。

1、4GCMS数据处理和定性定量分析,56、死去何所道，托体同山阿。57、春秋多佳日，登高赋新诗。58、种豆南山下，草盛豆苗稀。晨兴理荒秽，带月荷锄归。道狭草木长，夕露沾我衣。衣沾不足惜，但使愿无违。59、相见无杂言，但道桑麻长。60、迢迢新秋夕，亭亭月将圆。,4GCMS数据处理和定性定量分析4GCMS数据处理和定性定量分析56、死去何所道，托体同山阿。57、春秋多佳日，登高赋新诗。58、种豆南山下，草盛豆苗稀。晨兴理荒秽，带月荷锄归。道狭草木长，夕露沾我衣。衣沾不足惜，但使愿无违。59、相见无杂言，但道桑麻长。60、迢迢新秋夕，亭亭月将圆。GC/MS数据处理和定性定量分析赛默飞世尔科技应用工程师

2、：任安书GC/MS数据系统GCMS联用获得的数据量非常大，信息也非常丰富，如果数据处理不当，可能丢失许多宝贵的信息。一个样品如果GCMS得到的TIC图中有1 00个可鉴别的色谱峰。却可能会有上千张质谱图，因为每个色谱峰至少有35次扫描，色谱峰间隔也有若干次扫描。每张质谱图都有可利用的信息,一、我对STS教育精神的认识（一）STS教育的涵义 STS”系科学（Science）、技术（Technology）、社会（Society）三个英文单词首字母的缩写。STS教育是指：在现实的技术和社会环境下进行的科学教育活动，强调理科各科教学与本学科的科学与技术的发展紧密结合，与当前的社会生产和社会生活紧密结合

3、，把学生对于自然界的理解（科学）与改造世界（技术）和他们的日常生产、生活经验（社会）结合起来，突出科学、技术与社会的相互关系以及科学技术在社会生产、生活和发展中的应用，着重培养学生分析问题、解决问题的能力。（二）STS教育的理论依据 辩证唯物主义认为：“一切科学都是生活的科学，”科学技术本身就是为了解决人们的生活问题而发展起来的，它一开始就与人们的生活过程融合在一起，随着历史的发展逐步转变为一种具有相对独立的社会活动，但科学技术并未因此脱离人们的生活过程，而是在更高的程度上渗透到人们生活的一切领域之中，正如恩格斯说的那样“社会一旦有技术上的需要，则这种需要就会比十所大学更能把科学推向前进”。社

4、会生产和生活不断提出新的问题，促使科学来解决问题，从而推动科学的进步，形成科学技术社会生产的一体化模式，所以科学、技术、社会三者之间是紧密联系的，不可分割的，当前科学转化为技术，技术形成生产力的速度超过了历史上任何一个时期，新的科技成就和产品正在大踏步地进入生产领域和生活领域。二、我在教学中渗透STS教育的措施（一）巧妙设计教学内容，提高教学内容的社会针对性 例1：生态工程（选修3、专题5）学生学习了人工生态系统、生态农业的内容后，让学生选取一种熟悉的养殖业（鱼、鸡、猪?）讨论，如何提高养鱼（鸡、猪?）的经济效益？如何设计生态养鱼（鸡、猪?）？通过加强与农业生产密切相关的知识和技能教育，既恰当

5、地联系了实际，又提高教学内容的社会针对性。把浓厚的泥土气息带进了课堂，从而培养了学生新的生物技术价值观，使学生感到生物学的确是一门与生活、生产密切相关的学科。（二）充分利用生物教材中STS教育的相关材料 课堂教学是学校教育的主要方式，也是开展STS教育的主要平台。课堂教学中充分利用教材中提供的STS教育的相关材料，以人教版必修1为例，有的在教材中以“科学家的故事”来介绍，P51（细胞世界探微三例）。有的开辟成“与社会的联系”，如P85，有的是“与生活的联系”如P33。有的处理成“科学前沿”如P52（国际人类蛋白质组计划），有的设计成“与生物学有关的职业”如P128（医院里的检验师），更多的是在

6、练习中以“拓展题”的形式出现，如P6、P12、P29、P33、P38，练习的拓展题中都渗透了STS教育的相关材料。（三）开展生物进农家课外活动 学生的课外活动内容，是课堂教学内容的延伸和补充。我国是一个农业大国，农村中学生占全国中学生总数的70%以上，农村学生家长在生产实践中掌握的实践经验知识丰富，但有关生物的形态结构和内部生理却缺乏科学性的认识。有的教学内容可形成“生物进农家活动”，实现学生、家长在生物学知识方面的互补。例2：家长 大雨过后，要及时给庄稼排水。学生 保障庄稼的正常呼吸作用。例3：家长 棉农知道种植棉花的过程中需要经常摘心、整枝，以防止棉花“疯长”。学生 因为营养生长和生殖生长

7、相互制约的缘故。通过“生物进农农活动”，学生家长、优势互补，学生学生、互动，讨论，交流经验知识，学生老师、相互分享知识，理论 联系实际，学以致用，在课内外渗透STS教育。三、我对目前STS教育的建议（一）教材内容的滞后性 与生物学科相关的科技成果迅速在生活、生产中广泛应用，但是，与社会进步、科技发展相适应的教材具有明显的滞后性，远远跟不上科技的发展。传统的教材在内容上“难、繁、窄”，过分注重知识本身的系统性和学科知识的完整性，增加了STS教育的困难。（二）加强学科间的渗透，改善理综的“拼盘”缺陷 生物与物理、化学一样，属于自然科学，长期以来各自为政，即使高考中的理综卷也是名副其实的“拼盘”，只

8、在形式上做了统一。有的师范院校虽然设置了科学专业，但学生毕业从教后，在学校里仍然是教物理、化学和生物，并没有统一的科学教材，结合目前学校教育的实际情况，我甚至设想物理、化学、生物教师在会考水平上交叉分工，知难而上，生物教师也在会考水平上尝试教物理、化学，为将来条件成熟时编写STS教材作铺垫，彻底改善理综科学课的“拼盘”缺陷。总之，渗透STS教育不仅要从教材入手，还要从学生入手，更要求教师转变观念，不断学习，俗话说，地冻三尺，非一日之寒。一个人乃至一个民族的发展都是一个从量变到质变的过程。如果我们每一个生物教育工作者在平时的教育、教学过程中能够有意识地去时时、事事关注STS教育，做一个细心且爱动

9、脑筋的人，立足于课堂，放眼于STS教育，那怕是一点点的创新，定能为自己添加信心、动力，从而产生“蝴蝶效应”，结出丰硕的果实。语文是一门富有情感性的学科，这已成为人们的共识。注重情感体验，课堂情意浓浓，才能算一堂好课。这样的课，学生受到高尚情操与趣味的熏陶，丰富学生的精神世界。在语文教学中如何创新课堂，进行情感教学呢？下面我谈几点粗浅的看法。1 提炼教材，把握情感 语文学科内容丰富，几乎每篇课文都蕴含着浓郁的思想感情。教师在语文教学中要把握教材这一特点，提炼教材，把握文章情感线，围绕情感线引导学生从语言文字着手，向学生传情达意，披文入情，撞击学生心灵深处的感情火花。以情激情，使学生体会出文章所表

10、现的或喜或悲的深刻而丰富的情感。如：找骆驼一课以商人的情感为线索：（丢失骆驼）着急（有了线索）高兴（老人说出骆驼特点却又说不知骆驼在哪）生气（老人指点后找到骆驼）敬佩；母鸡一课：一向讨厌不敢讨厌，围绕这两方面进行体会，披文入情，品析词句进行体验；狼牙山五壮士以题眼“壮”字为情感线索，壮士是豪迈、勇敢、不怕牺牲的人，学本文要让学生从课文的每个部分体会五壮士的壮言、壮行，体验文章的情感。2 创设情境，调动情感 教师可以通过音乐、课件、绘声绘色的语言来创设情境，调动学生情感，让学生走近文本和文本产生共鸣。如飞夺泸定桥播放课件夺泸定桥片断，体验战士们的英勇；十里长街送总理播放哀乐，教师语言导入，配乐朗

11、读，营造悲伤的情感；军神一课教师用精炼动情的语言讲述关羽骨疗伤的故事导入引起学生的兴趣，调动学生对刘伯承的敬佩之情。3 品读词句，领悟情感 语言是情感的结晶，绘声绘色的朗读课文，能使学生陶醉其中，感受作品的情感信息，触发情感，引起共鸣从而受到陶醉。许多文章一种情感贯穿全文，如难忘的泼水节全文洋溢着高兴、激动的感情，可指导学生全文情感朗读，但要注意读出程度的轻重，重点句重点朗读品析。有的文章情感是变化的，教学要善于抓住重点语句，品析语句，指导朗读，领悟情感。如爱迪生救妈妈一课，妈妈生病的痛苦，爸爸斥责的语言、爱迪生委屈语言、医生夸奖的语言、情感不断变化，要抓住这些情感句进行朗读指导、体验。4 表

12、演实验，体验情感 让学生亲自去表演文中内容，让学生亲自去实践、去经历，这样可以使文字鲜活起来，学生身临其境、触景生情、情感体验水到渠成。如爱迪生救妈妈可以让学生演一演妈妈肚子痛得打滚和大家急得团团转；狼牙山五壮士让学生当一当五壮士阻击敌人、英勇跳崖等。有的文章可以做做实验，体会这种做法巧妙如邮票齿孔的故事可用针在纸上刺小孔验证邮票齿孔的作用；爱迪生救妈妈让学生带来镜子做做实验，把光聚在一起；玩出来的名堂让学生带来放大镜做做显微镜的实验等。学生亲自实验了，体验到这种做法的巧妙，敬佩之情油然而生。5 填补空白，丰富情感 领悟文本情感有时可以填补文本空白，进行适当的添油加醋，使情感更具体化，更丰富。

13、如我教学丑小鸭一课体会养鸭的小姑娘也讨厌它，我让学生说说小姑娘看到丑小鸭有些什么行动进行填补具体化；小鸟讥笑会怎样讥笑。体会小鸟的态度，丑小鸭的可怜。6 拓展迁移，激发情感 体会了文章情感，最终要让学生受到陶冶，培养学生高尚的情操和健康的审美情趣，形成正确的价值观和积极的人生态度，我们教学要重视情感的拓展迁移。如爱迪生救妈妈可让学生也学医生夸一夸爱迪生。说说要学爱迪生的什么品质，说说自己生活中怎样想办法解决困难，这样就由爱迪生想办法解决问题激发了学生想办法解决困难的感情。创新课堂教学，陶冶学生情感，我们语文教师任重道远。我们要努力实践，不断总结、创新，使我们的课堂情意浓浓。培养学生具有丰富的情

14、商、高尚的情操、健康的审美，让学生形成正确的价值观、积极的人生态度。【创新教学沙龙主持人】新课程标准实施了多年，但有多少课堂教学真正落实了“三维目标”？关注学生情感，将学生情感的陶冶纳入创新教学的视野，是创新教学的目标追求。原来如此，创新教学就是落实新课标！,GC/MS数据处理和定性定量分析,赛默飞世尔科技应用工程师：任安书,GC/MS数据系统,GCMS联用获得的数据量非常大，信息也非常丰富，如果数据处理不当，可能丢失许多宝贵的信息。一个样品如果GCMS得到的TIC图中有1 00个可鉴别的色谱峰。却可能会有上千张质谱图，因为每个色谱峰至少有35次扫描，色谱峰间隔也有若干次扫描。每张质谱图都有可

15、利用的信息,GC/MS数据系统,各种近代分析仪器都配备了计算机和相应的应用软件，通称为仪器的数据系统(也有称化学工作站)。GCMS联用仪器的数据系统包括硬件和软件两个部分应具备以下功能：控制仪器运行，包括设置气相色谱、质谱的运行参数，实时显示运行状态，如真空，压力、温度、电压参数及所运行的方法等；采集、处理、简化、储存数据，并实时监测数据采集过程；数据再现和处理，谱图处理、定性、定量分析、结果输出、数据传输等。数据系统的结构和功能对仪器性能的发挥及仪器操作的灵活性至关重要,GC/MS数据系统,目前多数仪器数据系统的硬件，包括计算机主机及显示器、键盘、打印机等基本的外围设备，一般都是通用的PC机

16、，但是配置不同，性能差别也不小还有一个很重要的部件，即任何计算机和GCMS仪器连接，也需要有一个“接口”，是由模数数模转换器(AD、DA)、多路切换开关、实时钟还有微处理器等组成的接口电路板，放在电子部件的机箱内。它不是通用部件，不同生产厂家、不同类型仪器的接口板结构性能都不相同。它的功是将质谱检测器接收的离子流的电压信号通过AD转换成数字信号，经微处理器采集、简化处理并储存在计算机中，这就是通常获得的谱图的原始数据文件另外，通过DA转换将操作员从计算机键盘输入的各种参数通过AD转换传送到相关的电路控制器，控制仪器运行，同时在显示屏上显示仪器运行状态。它关系到数据的采集、传输速率和数据的质量,

17、GC/MS数据系统,数据系统的软件包括运行仪器的操作系统和各种应用程序，还有各种用途的质谱数据库。不同生产厂家、不同类型仪器的操作系统也不相同但近年来有的厂家将自家生产的不同类型仪器的操作系统逐渐统一规范化，除了控制仪器运行和数据采集功能不通用外，数据处理的功能都是通用的，并且可联网，做到资源共享,GC/MS数据系统,值得注意的是，计算机辅助质谱解析通用软件的发展，过去质谱数据库虽然是通用的，但是各个厂家数据系统采集的质谱数据格式不同，谱库检索的系统也不相同近年来质谱数据有了多种转换格式，一些厂家的应用软件还提供了不同质谱数据格式的转换功能，NIST的谱库检索系统已被普遍采用，最新版的NIST

18、、软件，增加了许多应用程序，除分子量、同位素丰度、元素组成计算等基本功能外，还有谱图解析、自动鉴别质谱数据、分离GC共流出色谱峰等应用软件,一、质谱图的提取,质谱库检索和谱图解析都需要获得好的质谱图。质谱图的提取不仅要保证谱图的质量，还要不丢失可鉴定的组分，包括共流出组分的分离。背景扣除没有固定的要求例如：是取色谱峰顶对应的一张质谱图还是几张质谱图平均，需不需要扣除背景，是扣除前面还是后面的谱图等。主要的是根据出峰情况，结合样品信息和实验条件进行判断。知识和经验的积累是必需的。,二、质量色谱法的应用,只要有总离子流色谱图，就可以提取扫描质量范围内任何质量的离子流图，即质量色谱图。质量色谱图可以

19、提供许多信息，应用它可解决许多问题，如色谱峰纯度检查、追踪目标化合物、确定同系物的碳数分布范围、进行准确定量等，所以被称为质量色谱法(1)色谱峰纯度检查和准确定量 上面的例子已经说明质量色谱法可以帮助鉴别共流出组分，做色谱峰纯度检查。又因为质量色谱将两个组分完全分开了，而色谱峰则未完全分开，所以用质量色谱峰面积进行定量比用色谱峰面积定量要准确得多,二、质量色谱法的应用,(2)目标化合物追踪 邻苯二甲酸酯类是常见的增缩剂，在分析试验室中几乎无所不在，各种塑料包装、塑料瓶盖、样品预处理用的一些试剂、硅胶、树脂等都含有此类化合物它们的沸点较高，容易残留在色谱柱中，柱温升高到200以上就会流出。往往在

20、GCMS分析前做空白试验时，检查是否有这类化合物残留，可采用质量色谱追踪，如果有这类化合物很容易检查出来,由邻苯二甲酸丁酯和邻苯二甲酸辛酯的质谱图(图19 6)可知，它们有非常强的特征离子mz 149。在空白试验或考察GCMS联用本底时，采集数据过程中用mz 149离子流图实时追踪，或从数据采集后得到的TIC图中提取mz149质量色谱图，都能很快判断它们是否存在,二、质量色谱法的应用,进样品前空白试验的实例色谱条件：起始温度60，停留5 min，以6min升温至280，停留10min。目的是察看色谱柱流失本底和高温段的基线漂移情况这里截取30min后的一段总离子流和mz 207、mz 149的

21、离子流图。35 min 后基线开始上升，固定相本底中mz 207增高。温度达到240，mz 149质量色谱显示有一个峰(2115号)，40min后温度到280，基线上升,mz 149质量色谱也显示有一个峰(2 49号),将这两次扫描的质谱图和检索结果标准谱图比较，虽然分子离子无法确认，但凭经验可以认定是邻苯二甲酸类化合物。它们易残留在柱子中，而且一般要在较高温度下才能流出,二、质量色谱法的应用,三、GC/MS定性分析,充分发挥GCMS联用技术的优势，分离是定性的关键。质谱定性专一性好的前提是得到正确的质谱谱图。同一样品，分离条件不同，可能鉴定出上百个成分，也可能只鉴定出几十个成分。,三、GC/

22、MS定性分析,定性不能只依靠质谱谱库检索。分离不好得到的质谱图不可靠，不仅检索匹配率可信度低，对质谱图进行解析也有困难。色谱的保留时间以及与样品相关的一系列信息都是定性的重要依据。实际上未知化合物鉴定有两种不同的含义：一是待测样品中已知结构化合物的鉴定(目标化合物或可疑化合物)；另一种是待测样品中是否发现新的未知结构化合物。后者是一个较大的分析课题，需要有其它辅助方法鉴定，最终还需合成验证,GCMS定性分析类型及相关分析技术,657/2002/EC对质谱定性的要求,全扫描：当用单级质谱记录全扫描图谱时，至少要有四种离子的相对丰度大于等于基峰的10%。如果分子离子峰在参考图谱中的相对丰度10%，

23、则必须包括在内。选择离子监测质谱方法时要求:96/23/EC指令附录 I A组 4识别点 96/23/EC指令附录 I B组 3识别点,657/2002/EC对质谱定性的要求,对质谱确证方法的要求,对于每个诊断离子，信噪比 3:1 测定至少一对离子丰度比相对离子丰度最大容许偏差 不能超过下表,6.对质谱确证方法的要求,对于每个诊断离子，信噪比 3:1 测定至少一对离子丰度比相对离子丰度最大容许偏差 不能超过下表,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,三、GC/MS定量分析,有一种说法，认为色谱可以很好地定量，而GCMS联用方法只适合于定性实际上，这是一种误解。GCMS

24、联用技术不但可以定量，有时比色谱的其它检测器更具有优势。例如，其它色谱检测器均要求色谱峰完全分离才可以正确定量，而GCMS联用技术可以在色谱峰不完全分离的情况下，用质量色谱法或选择离子检测，对其中的化合物分别定量。图中是色谱峰未分开(虚线)的两个化合物，但是并不影响它们分别用各自的特征质量离子mz 230、mz 244的峰面积定量。尤其用同位素标记化合物做内标进行定量分析更是GCMS联用技术的独到之处。,三、GC/MS定量分析,GCMS联用技术定量分析的特点是先定性，后定量对于一个化合物，首先根据其保留时间和质谱图特征离子鉴定，确认它是目标化合物之后再进行定量，因而避免假阳性检出。其次，GCM

25、S联用定量一般不用总离子流色谱图，而是用特征离子的离子流图。因为离子流图相对稳定而且不受干扰，定量结果更可靠。,(一)定量分析基础,定量分析就是要确定待测样品中各组分或某一组分的准确含量。无论采用什么仪器，都是在一定条件下，根据检测器的响应因子与待测化合物含量的函数关系计算出目标化合物的含量GCMS联用分析，化合物特征质量离子的峰面积(或峰高)与相应待测组分的含量成正比如何得到待测化合物的响应因子是定量分析的关键,(一)定量分析基础,响应因子的测定需要标准样品，在实际工作中，纯化合物标准样品的获得和保存是定量分析的一个难题。尤其是有机化合物种类繁多，有的化合物不稳定，易挥发，易降解，不易保存标

26、准样品配制首先应该准确地配制一个母液。可以是单标(只含一个待测组分)，也可以是混合标(含数个待测组分)。每个组分的含量需准确，并且该含量高于待测样品的含量。然后再将配制的母液逐级稀释，最后一级的含量应低于待测样品的含量如果需要加入内标，则在每一级稀释后的标准样品以及未知样品中加入等量的内标化合物,(一)定量分析基础,定量结果的数据表达形式应该是取决于定量分析的方法在GCMS联用 分析中，常见的一种定量结果报告是用TIC峰面积归一给出的相对百分含量。这种定量结果虽有一些用处但不是严格的定量分析结果。因为这是将所有化合 物的响应因子当作一样，而实际各种化合物的响应因子并不相同，即使是同系 物亦会有

27、很大区差别还有一种情况是用浓度给出的定量结果，因为标准样品不够，只用了一个和几个标准样品的响应值代替所有待测化合物响应值。这种定量分析结果也是不严格的，因此都应作出必要的说明，以免误解,(一)定量分析基础,GCMS和GCMSMS联用方法常被作为定量检测的最终确证方法。因此质量保证质量控制(QAQC)是定量分析不可缺少的重要环节,(二)定量方法,GCMS联用分析常用的定量方法和色谱一样，有归一化法、外标法、内标法等。各有其优缺点和使用范围，不适当的运用必然造成较大的误差。根据不同要求正确选择定量方法十分重要。定量方法中响应值的计算可以用峰高法也可以用峰面积法，要看在线性范围内哪一个测量的准确性和

28、重复性更好。,(二)定量方法,1归一化方法 将样品中所有组分含量之和作为100，计算各个组分的相对百分含量，称为归一化法。计算公式：式中 Wi组分i含量；Ai组分i的峰面积(或峰高)；fi组分i的质量校正因子。当fi为体积校正因子或摩尔校正因子时，结果分别为体积分数或摩尔分数。,(二)定量方法,归一化方法的主要问题是校正因子的测定不容易，所以在GCMS联用中，对于校正因子接近的一些化合物，往往直接用峰面积归一法计算，得到的是各组分峰面积的百分比。这也能有个定量的概念，因而有其实用意义但是应注意，对于校正因子相差甚远的一些化合物，要慎重。还有，并不是待测样品的所有组分都能从色谱柱流出，或得到足够

29、的信号强度，这会带来误差,(二)定量方法,2外标标准曲线方法 用标准样品配制不同浓度的标样，在与待测样品完全相同的操作条件下，测得标样中各化合物的峰面积或峰高，得到响应因子：式中 wi待测化合物标样含量；Ai待测化合物标样峰面积(或峰高)。,(二)定量方法,不同浓度测得结果绘制工作曲线，标准工作曲线的斜率即是绝对校正因子。待测化合物含量可从标准曲线直接查得，也可由下式计算：Pi=fiAi,(二)定量方法,3内标标准曲线方法外标法存在一定缺点，限于每次的分析条件从样品处理到测试都会产生误差。为了克服不可避免的测量误差，选择适当的基准物质(内标化合物)加入标样和待测样品中进行测定，计算待测化合物和

30、内标化合物响应值之比(称为相对响应因子)，由相对响应因子和加入内标化合物的量进行定量，称为内标法。相对响应因子计算，可由：,得到,式中 wi待测化合物标样含量；Ai待测化合物标样峰面积(或峰高)；WS内标化合物含量；As内标化合物峰面积(或峰高),(二)定量方法,当进样量、仪器响应值发生变化时，处在同一样品中的待测化合物与内标化合物的含量比值不变；它们的响应值的比值也就不变因此，内标法可以消除由于进样量、仪器响应值波动等带来的系统误差。最好在所有标样和待测样中加入内标的量相同，以避免由于内标物的浓度变化引起响应值的非线性变化所造成的偏差如果在样品前处理(如浓缩、萃取、衍生化等)之前加入内标，还

31、可以补偿待测组分在前处理中的损失。必要时可以加入多个内标内标法的关键是内标的选择。内标化合物应该是待测样品中不存在的化合物，而其性质应尽可能和待测化合物相近，溶于样品又不起化学反应，出峰接近待测化合物(或在它们之间)又不能相互重叠，确实不易找到,(二)定量方法,4、同位素稀释法最理想的是采用待测化合物的同位素标记物作为内标，可以保证内标化合物的化学性质、色谱行为、质谱行为都与待测化合物一致，这样可以消除化合物之间的差别带来的误差此法又称“同位素稀释法”同位素标记物作内标只有GCMS联用技术可以运用，色谱其它检测器无法使用，这就是所指GCMS联用独到之处,(二)定量方法,标准加入法 该方法实质上

32、是一种特殊的内标法，它以欲测组分的纯物质为内标物，加入到待测样品中，然后相同的色谱条件下测定加入欲测组分前后的峰面积，从而计算欲测组分在样品中的含量的方法。在很多情况下能较好地消除基质效应，获得较为满意的分析结果。,(二)定量方法,1997年国际物质量咨询委员会(CCQM)在巴黎召开第六次会议，将同位素稀释质谱法、精密库伦法、电位滴定法、凝固点法等作为绝对定量方法，其中同位素稀释质谱法是唯一一种微量、痕量和超痕量元素的权威测量方法 同位素化合物与样品分析物在一定的范围内应视为同一化合物(如有机质谱中常用13C和2H作为标记同位素)，二者具有基本相同的物理和化学性质，虽然天然化合物中有一定同位素

33、化合物，但其量相对极小，基本不会对检测有不利影响同时内标与样品分析物的流出时间很相近或相同时，由此在基质中添加一定量的、合适的同位素标准品作为内标进行方法的质量控制手段是非常适合的,(二)定量方法,式中，RF为校正因子，RF=含量/面积或含量/峰高；C为含量；S为峰面积或峰高同位素稀释法的优点为：一般可以校正基体影响(标样和样品的差别)，提取效率稳定；进样误差小，保留时间随溶剂梯度变化影响不大；仪器漂移影响小；在质谱中同位素稀释剂与样品分析物响应稳定，定量结果从样品分析物与内标的响应比得出更准确缺点为：样品制备很耗时；对移液和稀释等中的误差结果有缺陷,计算公式：,（三）定量分析应注意的问题,1

34、仪器校准为了使定量数据准确，重现性好，在采集数据时要得到很好的峰形，仪器校准非常重要色谱条件从进样口到色谱柱、进样方式、衬管类型、进样口的清洁程度、不分流进样开启分流阀的时间、柱效的保持、选用的溶剂和相应的初始炉温等影响色谱定量结果的因素会同样影响GCMS联用的定量质谱条件有各参数的设置、调谐方式、调谐结果差别、仪器的稳定性、离子源、分析器清洁程度等，都直接影响定量结果。所以，定量分析首先要把仪器调整到最佳状况，并且对仪器的检测限应该有数选择适当的仪器条件和方法往往会得到更好的定量分析结果。如某些化合物的CI电离方式比EI电离灵敏度明显要高SIM方式比全扫描方式灵敏度高，重现性也好,（三）定量

35、分析应注意的问题,2定性要正确 定量分析的重要前提是定性要正确。定性鉴定要符合以下原则：色谱保留时间定性，若无标样定性，保留时间与重要参考文献要相符。因此色谱分离一定要好。无杂质干扰 质谱定性，质谱图库检索匹配率应在9 0以上，质谱能得到合理解释,（三）定量分析应注意的问题,定量离子应该是待测化合物的特征离子，多数情况下选择基峰或较强的峰，这样可以减少误差。但是当不同化合物的特征离子质量相同时，尤其是未完全分离的色谱峰中两个化合物欲选的离子质量相同时，应选择其它不同质量的离子作为定量离子。一般在所有化合物谱图中出现概率很高的离子(m2 43)，或在本底及样品基质中出现概率高的离子，强度虽高，除

36、非不得已，也不选择它们作定量离子，因为干扰大容易引入误差 确证离子的选择。为了避免假阳性检出，需要再选择几个离子作为定性离子的限定条件。进一步确认是待测化合物的特征离子，才能用其进行定量。确证离子(包括定量离子在内)一般是选35个，并要限定其相对强度,（三）定量分析应注意的问题,3峰面积的准确积分 定量离子峰面积计算，对于定量分析结果至关重要。特别是当峰形不好或进行痕量分析时，峰面积积分不当会带来较大误差，如何选择积分参数就显得更加重要。一般仪器数据系统的定量软件对峰面积积分方法都有实例说明,（三）定量分析应注意的问题,4标准曲线的线性范围 用标样的响应值对含量作标准曲线。通常是选择线性拟合，

37、直线的斜率即为响应值。有些情况下，待测组分的响应值与浓度不成线性相关，可以用响应值对浓度的倒数或浓度平方的倒数、对数等作标准曲线实际工作中，标准曲线的线性范围较窄，难以达到好几个数量级。线性范围和仪器灵敏度相关。当仪器灵敏度较高时，注意样品浓度不能太高。可以事先配好不同浓度标样对仪器灵敏度进行考察5标准曲线的再校正 由于仪器的响应值会发生变化，定量标准曲线不能长期使用，必须定期或不定期用标样重新测试，对标准曲线上的每个点做再校正,(四)影响定量分析结果的因素,1色谱 自动进样的进样顺序和洗针程序是否合理，直接影响标准曲线的质量。正确的方法是，依照标准溶液的浓度，从最低到最高依次进样，每次进样前

38、不要用溶剂洗针，只用样品洗针。手动进样，除依照上述方法进样外，需注意取样量的准确和进针速度的一致性。进样口正确的维护保养有利于峰形的改善和峰面积的重复,色谱住的选择、升温程序的设定影响分离和峰形，峰形好坏影响定量结果。例如，定量离子流的峰拖尾、裂分或成“馒头状”。峰形不很理想时(图1一90)，首先需要判断拖尾部分是否由于色谱分离所造成的，是否有共流出物干扰。进行峰纯度检查，提取不同质量离子流图进行比较。如果是共流出物干扰，可以考虑更换定量离子；如果是峰拖尾，只有通过改便色谱条件改善峰形,(四)影响定量分析结果的因素,积分参数选择影响积分结果。好的峰形容易得到好的积分结果。不好的峰形如何积分，取

39、决于积分后定量曲线的线性相关状况，只能通过对积分结果的重现性进行比较以及对标准曲线的评价来决定 积分方式不同，对于峰面积影响很大。要尽量使积分结果具有好的重现性和好的线性相关,(四)影响定量分析结果的因素,2质谱 调谐方式和调谐结果(分辨率、离子丰度比例、倍增器高压)以及真空都会影响灵敏度 尽量采用选择离子监测的方式进行定量。因为选择离子监测时，质量分析器可以把更多的时间分配给检测离子。同时，由于选择离子检测噪声小，信噪比更高。因此，对于定量离子来说，选择离子检测比扫描方式有更高的灵敏度和准确性 设置采样参数时，既要分配给每个离子足够的采样时间，又要保证每个色谱峰能够得到足够的数据点。一般来说

40、，每个色谱峰需要有1525个数据点才能准确地定量。因此，质谱采集每个数据点的时间不能过长(取决于采集每个数据点时消耗在每个检测离子上的时间以及程序时间)。尽量采用内标法可以纠正由于进样量偏差、仪器响应值变化等因素造成的系统误差。严格地说，内标物的响应受系统误差影响与目标化合物不尽相同。所以，利用同位素标记的化合物作内标是最好的选择,(五)定量程序,编制一个定量方法。若使用自动进样器，只要放置好样品，仪器自动运行，测定每个标样和样品(最好将每个样品测定多次取平均值)。然后进行数据处理，程序首先根据保留时间找到待测化合物的定量离子是否在给定的时间范围内，其次，检查限定离子是否都存在并且相对于定量离

41、子的比例关系是否符合要求，只有全部满足每个条件，才可以对其峰面积进行积分(因此GCMS比单纯色谱定量更可靠)。绘制标准曲线，计算待测化合物浓度，得到该组分的含量，最后给出定量结果报告目前GCMS联用的数据系统都有专用的定量软件包，使用方便且大大提高工作效率。但是要注意各种参数的意义，不同样品的定量要求和测定步骤不一定相同，不能任意套用固定的格式，否则将造成严重错误,THANK YOU,谢谢,46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。卡耐基47、书到用时方恨少、事非经过不知难。陆游48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。史美尔斯49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。孙洙50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。莫扎特,