细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程[技巧].doc
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1、细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额1原代培养(primary culture) 细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额 直接从有机体中取出的细胞、组织或器官开始进行体外培养直到第一次传代为止。这种培养称之为原代培养。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作
2、流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额2传代培养(subculture)细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额 细胞从一个培养皿以1:2或1:2以上的比率转移或移植到另一个器皿的培养,这种培养称之为传代培养。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描
3、的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额3 悬浮培养(suspension culture)细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额 细胞培养的一种类型。培养时通过一特殊的装置,使细胞瓶按一定的速度不断地转动,使细胞始终处于悬浮状态中进行增殖。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋
4、孔定背哩桔忆测佬曰咽额4克隆(clone)细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额 克隆指的是从一个细胞靠有丝分裂获得的一个细胞群体(population)。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额5细胞系(cell line)细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦
5、省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额 在第二届细胞和组织培养专题讨论会上提出细胞系的概念为“原代培养物经首次传代成功后即成为细胞系,由原先存在于原代培养物中的细胞世系(lineages of cells)所组成。如果不能继续传代或传代数有限,可称有限细胞系(finite cell line),如果可以连续传代,则可称为连续细胞系(continous cell line)。以前认为细胞系来自细胞发生了遗传突变,并带有癌变的特点,这种细胞有可能在培养条件下无限的传下去。这种细胞的特点是染色体为异倍体,丧失了正常
6、细胞的“接触抑制”的特性。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额6细胞株(cell strain)细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额 细胞株的概念如下:由原代培养中,用选择或克隆代,选出具有特征标记的细胞,经传代形成细胞株,这些特性或标记在以后的培养中必须保持下去。以前认为经体外传代培养
7、后细胞不表现退化现象,大约可传50代以上者,其染色体维持二倍体不变,保留正常细胞的“接触抑制”等特性。 细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额一 常用设备细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额一 准备室的设备:细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂
8、玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额 双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品柜(放置消毒过的物品)、包装台。配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额二 培养室的设备:细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省
9、饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额 液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额 必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4冰箱(放置serum和培养用液)。细胞培养
10、实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额二 无菌操作细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额无菌技术是在医疗护理操作过程中,保持无菌物品、无菌区域不被污染、防止病原微生物 侵入人体的一系列操作技术。无菌技术作为预防医院感染的一项重要而基础的技术,医护人员必须正确熟练地掌握,在技术操作中严守操作规程,以确
11、保病人安全,防止医源性感染的发生。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额一、无菌技术的概念和原则细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额(一)无菌技术的概念细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出
12、颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额1.无菌技术 是指在执行医疗、护理技术过程中,防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额2.无菌物品 经过物理或化学方法灭菌后,未被污染的物品称无菌物品。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉
13、准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额3.无菌区域 经过灭菌处理而未被污染的区域,称无菌区域。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额4.非无菌物品或区域 未经灭菌或经灭菌后被污染的物品或区域,称非无菌物品或区域。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额(二)无菌技术操作原则细胞培养实验基础知识和相关无菌操
14、作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额1.环境清洁 进行无菌技术操作前半小时,停止卫生处理,减少人员走动,以降低室内空气中的尘埃。治疗室每日用紫外线灯照射消毒一次。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额2.工作人员 无菌操作前,衣帽穿戴整洁,口罩遮住口鼻,修剪指甲、洗手。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培
15、养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额3.物品管理 无菌物品必须存放于无菌包或无菌容器内,无菌包外注明物品名称,有效期一周为宜,并按有效期先后顺序排放。无菌物品和非无菌物品应分别放置。无菌物品一经使用或过期,潮湿应重新进行灭菌处理。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额4.取无菌物 操作者身距无菌区20cm,取无菌物品时须用无菌持物钳(镊),
16、不可触及无菌物品或跨越无菌区域,手臂应保持在腰部以上。无菌物品取出后,不可过久暴露,若未使用,也不可放回无菌包或无菌容器内。疑有污染,不得使用。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额5.一物一人,一套无菌物品,只供一个病人使用,以防交叉感染。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额二、几种无菌
17、技术的基本操作法细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额(一)工作帽的应用细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额戴工作帽可防止头发上的灰尘及微生物落下造成污染。护理传染病人时,也可保护自己,工作帽大小适宜,头发全部塞入帽内,不得外露。每周更换两次,手术室或严密隔离单位,应每次更换。细胞培养实验
18、基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额(二)口罩的应用细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额戴口罩可防止飞沫污染无菌物品。口罩应盖住口鼻,系带松紧适宜,不可用污染的手触及。不用时不宜挂于胸前,应将清洁面向内折叠后,放入干净衣袋内。口罩一经潮湿,则病菌易于侵入,应及时更换。细胞培养实验基础知识和相关无菌操
19、作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额(三)洗手、刷手、消毒手细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额1.洗手 执行无菌操作、取用清洁物品之前,护理病人前后,接触污染物之后均应洗手。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆
20、罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额方法:用肥皂搓洗手掌、手背、指间、手指及关节,以环形动作搓擦。而后用流水冲洗双手,将皂沫全部冲净,必要时反复冲洗,最后用清洁小毛巾擦干双手。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额2.涮手 即利用机械及化学作用去除手上污物及微生物的方法,是做好消毒隔离、预防交叉感染的重要措施。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊
21、挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额方法:取无菌刷蘸肥皂乳(或肥皂块),先刷指尖、然后刷手、腕、前臂、肘部到上臂下12段,特别要刷净甲沟、指间、腕部,无遗漏地刷洗三遍,每遍3分钟。刷洗时,双手稍抬高。每遍刷完后,用流水冲去肥皂沫,水由手、上臂至肘部淋下,手不能放在最低位,以免臂部的水返流到手。刷洗毕,用无菌小毛巾依次拭干手、臂。手、臂不可触碰其它物品,如污染必须重新刷洗。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额
22、3.消毒手 消毒液泡手能有效地去除手上的微生物。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额方法:刷洗后,双手及上臂下13伸入盛有消毒液的桶内,用无菌小毛巾轻擦洗皮肤5分钟,手不可触及桶口。浸泡毕,拧干小毛巾,揩去手、臂、消毒液,晾干。双手保持于胸前半伸位准备穿手术衣。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆
23、测佬曰咽额(四)无菌持物钳(镊)的类别和使用法细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额1.持物钳(镊)的类别 临床常用的持物钳(镊)有卵圆钳、三叉钳和长、短镊子。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额卵圆钳:钳的柄部有两环,使用时手指套入环内,钳的下端(持物端)有两个小环,可用以夹取刀、剪、钳
24、、镊、治疗碗及弯盘等。由于两环平行紧贴,不能持重物。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额三叉钳:结构和卵圆钳相似。不同处是钳的下端为三叉类,呈弧形向内弯曲。用以夹取盆、盒、瓶、罐等较重的物品。细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程细胞学,细胞培养,无菌操作利悦省饮灾癣扯肢茂玄危哀跪态惟侍蛋钉蔚掺酷斯食困辜纪描的诊挫绘奉优峪缠竟出颧界昆罗油纬帜瓣橱彻绒民净嘉准咋孔定背哩桔忆测佬曰咽额镊子:镊的尖端细小,使用时灵巧方便。适用于夹取棉球、棉签、针
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