血栓弹力图标准操作规程(修订版).doc
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1、目录一.方法原理 .2二.方法确认可(包括线性、不精密度、检出限、灵敏度和特异性) .6三.TEG实验检测取血要求.11四.仪器和试剂 .12五.TEG质控检测操作流程.13六. TEG普通杯检测操作流程.18 七.TEG血小板图检测操作流程.21八.参考区间 (高岭样品) .25九.临床意义 .26十 TEG 日维护 .31十一 TEG 月维护.33一 方法原理 承载血标本的测试杯以作 445的角度和每 9 秒一周的速度均速转动,一旦血栓形成,置于血标本检测杯中的金属探针受到标本形成的切应力作用,随之出现左右旋动,金属针在旋动过程中由于切割磁力线而产生电流,给电脑软件处理后,便形成 TEG
2、曲线。TEG 参数图解凝血弹性描记仪(TEG)参数解析 4SP 时间(测量从反应开始到弹力图曲线出现分叉的时间)1、SP=Split time2、纤维蛋白原未被激活前的时间。4R 时间(从血样开始检测至描记图幅度达 2mm 所需的时间):1、R 时间是血样放在 TEG 分析仪内到第一块纤维蛋白凝块形成之间的一段潜伏期。2、R 时间因使用抗凝剂或凝血因子缺乏而延长,因血液呈高凝状态而缩短。3、R 延长能通过注射 FFP(新鲜的冰冻血浆)而纠正。(FFP 含有丰富的凝血蛋白)4K 时间(从 R 时间终点至描记图幅度达 20mm 所需的时间):1、评估血凝块强度达到某一水平的速率(20mm 幅度);
3、2、通过高纤维蛋白原水平和较小程度地通过血小板功能来缩短 K,而影响血小板功能及纤维蛋白原的抗凝剂能延长 K;3、K 时间延长通过注射 cryo(冷沉淀)与 FFP 来纠正; 4Alpha 角度(从血凝块形成点至描记图最大曲线弧度作切线与水平线的夹角):1、血凝块动力学特性;2、影响 Alpha 角度的因素与 K 时间相同(见上);3、参数 Alpha 角度与 K 时间密切相关,两者都是反映血凝块聚合的速率。但两者之间又存在区别,在凝血处于极其低凝状态时,血凝块强度的最终强度是幅度达不到 20mm,此时 K 不能被定义。因此,Alpha 角度比 K 时间更全面、更易理解。4、6 个单位的 cr
4、yo 使增加 9.4。4最大幅度 MA(描记图上的最大幅度,即最大切应力系数):1、MA 反映了正在形成的血凝块的最大强度或硬度及血凝块形成的稳定性;2、MA 主要受纤维蛋白原及血小板两个因素的影响,其中血小板的作用要比纤维蛋白原大,血小板质量或数量的异常都会影响到 MA 值;3、10 个单位血小板可使血小板计数增加 40,20031,400/mm3, MA 增加了13.2mm。4A(任一时刻描记图曲线两点间的距离):1、用来监测任一时刻曲线两点间的扫描宽度,是血凝块强度或弹性函数,A值用单位 mm 来计量;2、MA 值在确定前与 A 值相等;3、MA 值确定后 A 值测量血凝块溶解的信息。4
5、TMA 时间(从凝血开始至 MA 值确定所需用的时间):1、TMA=Time To MA,血凝块动力学特性的综合测量;2、TMA 包含血凝块的形成速率,评估形成稳定血凝块所需用的时间。4G(血凝块强度,即最大切应力强度):1、将 A 值进行转换使其能实际测量血凝块强度(G),用单位 d/sc 来计量;2、G 值在 MA 值确定后的同时也被确定。3、G = 5000A/(100-A),描述 Clot firmness.4EPL(预测在 MA 值确定后 30 分钟内血凝块将要溶解的百分比)1、EPL=Estimate Percent Lysis;2、EPL=100(MA-A30)/MA;4CL30
6、(测量在 MA 值确定后 30 分钟内血凝块溶解剩余的百分比):1、CL3085%意示处于高纤溶状态,即纤溶亢进;应使用抗纤溶药来纠正。2、CL30=100X(A30/MA)4LY30(测量在 MA 值确定后 30 分钟内血凝块幅度减少速率) 1、LY307.5%意示处于高纤溶状态.即纤溶亢进;应使用抗纤溶药来纠正。4CI(凝血综合指数)-3 低凝 -3正常+3 +3 高凝 4E(弹性常数)1、E 是标准化的 G,作为一个弹性常数;2、EMX 是最大振幅时的 E;EMX=(100 X MA)/(100-MA);4TPI(血小板动力学指数)1、TPI=EMX/K 2、TPI = Thrombod
7、ynamic Potential Index,血凝块动力潜能指数;6 低 6正常15 15 高4CLT 时间(测量从 MA 值确定后 A 值达到 2mm 的时间)1、CLT=Clot lysis time(也称为 TTL=Time to lysis)血块溶解时间。4LTE 时间(CLT 的估计值)LTE=Lysis time estimate估计的血块溶解时间(CLT)。在 MA 出现后 30 秒电脑开始计算 LTE,并不断更新直到 MA 出现后 60 分钟。如果血块在 60 分钟之前已溶解,此时 LTE 为实际血块最终溶解时间。如果 LTE 大于 3 小时,该值显示“3hrs”。LTE 是根
8、据弹力图的斜率并外推到振幅为 2mm 计算得到。4AA%INHIBITION判断血小板血栓素受体抑制剂对血小板抑制的百分比,如阿司匹林等.4ADP%INHIBITION判断血小板 ADP 受体抑制剂对血小板抑制的百分比,如氯吡格雷等二 方法确认可(包括线性、不精密度、检出限、灵敏度和特异性)准确度为求证TEG的测量准确度,Haemoscope公司进行了一项评估,将TEG5000型分析仪和TEG3000型分析仪的测量性能表现进行对照。准备40种冷冻干血样。每种血样被分为两份,同时装载到一校准后的5000型分析仪和3000型TEG仪上。然后在37摄氏度下,按本手册介绍的检测步骤,用相同的TEG软件
9、同时对两份血样进行测试。以下四参数就是经这种标准检测测定的。R(mm) =从血凝开始的距离(时间,以2mm/分钟的速度)K(mm) =从标准血凝块强度的距离(时间,以2mm/分钟的速度)(20mm振幅)MA(mm) =血凝块强度最大值(振幅,单位mm)Angle(deg) =血凝块增长率的斜率用 t 测试对检测得到的数据进行分析,这是一种建立在两样本零差别假设基础上,将接受测试的两个相同样本的测试结果进行对照的统计学检验方法。测验结果证明5000系列TEG的样本测量性能与3000系列分析仪一致。分析显示,5000系列和3000系列结果在P 0.05,TEG参数R,K,MA和角度没有实际的统计学
10、意义。并且,两相等血样间的绝对差(见下表)没有超出仪器精确程度允许的误差范围,1个单位。下表列出,两种型号仪器的两相等血样的测量结果及标准偏差,两相等血样的差别及标准偏差,t值和2-tail的概率。参数测量对照同一型血样分成的两相等血样的测量结果对照(血样类型=40)参数R(mm)K(mm)Angle(deg)MA(mm)5000型(血样1量结果标准偏)11.56251.1782.15000.37973.96252.38230.62501.0363000型(血样2测量结果标准偏差)11.75001.2762.27500.42373.37503.0630.40101.261血样间差别(血样标准偏
11、差)0.18750.3540.12500.0900.58750.6130.22401.498T值0.681.390.960.87DF787878782-TAIL P值0.4970.1680.3410.388精准度为验证使用本手册推荐的激活剂(Celite,组织因子,凝血酶,DAPTTIN,高岭土-由Haemoscpe公司提供)进行检测的测试精确度,Haemoscpe公司做了以下评估:按照TEG用户手册介绍的步骤,从5位未发生凝血问题的健康人每人抽取10立方厘米血样。将每份血样分为8份,使用4台TEG仪器,测试的时间跨度为两天;对加入Haecomscope高岭土的血样,测试时间跨度5天。对每种活
12、化剂来说,需要被用来处理40个血样。基于TEG测量数据,对不同活化剂处理的血样来说,TEG参数的精确度可以用变化系数(CV)百分比表示如下:硅颗粒(品牌名称:Celite;Haemoscope公司提供)R8.7%K7.6%ANG2.4%MA4.1%组织因子(品牌名称:Hemoliance;制造商:Ortho)R K ANG MA13.1% 12.9% 2.3% 3.3% 凝血酶 (品牌名称:Thrombin Sigma,制造商:Sigma) R K ANG MA 13.2% 13.4% 3.5% 3.8%高岭土/Sulphatide/磷脂混合物 (品牌名称:DAPTTIN;制造商:Immuno
13、)R12.7%K17%ANG2.8%MA5.0% 高岭土H/Sulphatide/磷脂混合物 (品牌名称:Kaolin;Haemoscope公司提供) R K ANG MA 13.4% 4.4% 2.8% 6.3% 比较而言,TEG测量的参数CV值相对较小,而其他多数凝血测量仪器,CV值要高一些。正常值范围Haemoscope在软件中提供了正常值范围参考,在下述表格里可以看到。样本类型RKANGMA样本量Celite10.014.03.06.053.067.059.068.0132Sodium Clitrate +Celite7.013.03.05.061.073.055.065.098原血3
14、1.046.011.021.022.038.047.058.0132枸橼酸化原血28.046.07.014.031.049.049.059.0132组织因子(TF)4.06.02.04.062.073.061.069.0178Sodium Clitrate +TF1.53.52.07.059.075.053.065.041 功能纤维蛋白原水平测试 有20位病人同意加入了这一项研究计划。这20位病人年龄在22到62之间(平均年龄= 34.911.9 ),其中,10位男性,10位女性。他们的实验室纤维蛋白原水平在34.5和862毫克/分升之间。这些研究对象不包括已知患有血凝因子不足或血凝缺陷,肝病
15、,或需血液稀释或心肺支路的病患。在静脉插入导管,将静脉血收集到两个含3. 8%柠檬酸纳的4.5cc硅化试管 (BectonDickinson,Rutherford, NJ)中。在37摄氏度温度下将样本在TEG分析仪上运行45分钟。从第一个试管中取出0. 33立方厘米血样,混合20ul的.2M CaCl2对其进行重新钙化,10ul的重组人体组织因子(加快获得MA参数)和4ul的ReoPro(2 mg/ml)(Eli Lilly, Indianapolis,IN)成一个血样,进行MA测量。重复进行这些分析,最终的MA值(以ReoPro表现的MAR)是多次分析结果的均值。试管中血样剩余部分用于进行纤
16、维蛋白原水平(使用克劳斯照片光学方法,纽约,长岛,医学实验室自动控制,MLA Electra 1600c分析仪)的实验室检测。对第二个试管中的血样,连续进行两次通常的盐稀释,为的是获得更广范围的纤维蛋白原水平。按前面描述的方法对稀释过的样本进行相同的样本准备和TEG测试,随匹配样本送实验室分析纤维蛋白原。最小平方线性回归被用来确定TEG MAR值和测量出的纤维蛋白原水平间的关系。画出一条回归线对应计算95%的斜角置信区间。当P14.5IU, 每周二、四上午抽血(不需要空腹)序号检测项目开单类型取血种类取血要求采血管采血量抗凝时间1普通检测血栓弹力图实验高岭土静脉或动脉全血安静环境,一针见血枸橼
17、酸(蓝盖)抗凝管按刻度要求抽满即刻送达两小时之内检测2血小板图检测血栓弹力图实验高岭土静脉或动脉全血安静环境,一针见血枸橼酸(蓝盖)抗凝管肝素化(绿盖)抗凝管各一份按刻度要求抽满即刻送达两小时之内检测血栓弹力图实验氯吡格雷血栓弹力图实验阿司匹林TEG血栓弹力图实验血样准备描述1 枸橼酸化全血血样程序:备两个注射器,戴上手套,在安静环境下,用一根19G蝶形针,一针见血吸取样血,最初1ml弃用。另外吸取足量血放在蓝瓶盖的聚丙烯试管内(含有浓度为3.2%的枸橼酸钠),待采血量达到试管要求的刻度时,停止吸取。将试管封口后上下轻轻翻转3次(切勿用力摇晃),使血与枸橼酸钠混合。称为枸橼酸化的全血2 肝素化
18、化全血血样程序:备两个注射器,戴上手套,在安静环境下,用一根19G蝶形针,一针见血吸取样血,最初1ml弃用。另外吸取足量血放在绿瓶盖的聚丙烯试管内(含有肝素浓度14.5IU),待采血量达到试管要求的刻度时,停止吸取。将试管封口后上下轻轻翻转3次(切勿用力摇晃),使血与肝素混合。称为肝素化的全血四 仪器和试剂TEG检测需要TEG血栓弹力图仪-5000和配套的试剂(Kaolin,AA和ADP),加样枪(需要10ml,20ml,50ml,100ml,340ml,360ml和1000ml的规格)TEG 血栓弹力图仪结构1 水平仪:调平血栓弹力图仪的标准。2 电源按钮:打开或关闭电源。3 加温线:传递温
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