资源植物扶芳藤叶中总黄酮提取物的抗氧化性研究毕业论文.doc

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1、本科毕业论文（设计）( 2013届 ) 题 目：资源植物扶芳藤叶中总黄酮提取物的抗氧化性研究、学 院：生命与环境科学学院 专 业：生物技术 学生姓名： 学号：20909051042 指导教师： 职称（学位）：副教授 合作导师： 职称（学位）： 完成时间： 2013 年 5 月 25 日 成 绩： 综合成绩： 等级： 黄山学院教务处制学位论文原创性声明兹呈交的学位论文，是本人在指导老师指导下独立完成的研究成果。本人在论文写作中参考的其他个人或集体的研究成果，均在文中以明确方式标明。本人依法享有和承担由此论文而产生的权利和责任。声明人（签名）：年 月 日目 录摘要英文摘要1引言12材料与方法32.

2、1材料与设备32.1.1实验材料32.1.2实验试剂42.13实验仪器42.2实验方法42.2.1扶芳藤叶中总黄酮化合物的提取工艺42.2.2扶芳藤叶中总黄酮提取物含量的测定42.2.3扶芳藤叶中总黄酮提取物的总抗氧化能力的测定2.2.4扶芳藤叶中总黄酮提取物超氧阴离子自由基清除能力的测定测定待添加的隐藏文字内容32.2.5扶芳藤中总黄酮提取物羟基清除能力的测定2.2.6扶芳藤中总黄酮提取物清除DPPH自由基清除能力的测定3结果与分析53.1扶芳藤叶中总黄酮提取物的含量53.2扶芳藤叶中总黄酮提取物的总抗氧化能力53.3扶芳藤叶中总黄酮提取物对超氧阴离子自由基的清除能力53.4扶芳藤叶中总黄酮

3、提取物羟基清除能力3.5扶芳藤叶中总黄酮提取物对DPPH自由基的清除能力4结论与讨论7参考文献7致谢8资源植物扶芳藤叶中总黄酮提取物的抗氧化性研究 摘 要：扶芳藤叶片洗净烘干至恒重，粉碎后分别采用石油醚、75%乙醇在索式提取器里回流浸提，然后减压浓缩提取液，得到扶芳藤叶中总黄酮提取物，并分别对其抗氧化总还原能力、对羟自由基，超氧阴离子自由基，脂过氧自由基清除能力进行了实验研究。结果表明：扶芳藤叶总黄酮提取物具有较强的体外抗氧化活性，能有效地清除羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基，且在实验浓度范围内，清除能力随扶芳藤叶中总黄酮提取物浓度的增加而呈上升趋势。扶芳藤叶可加强作为天然抗氧化剂来

4、源的应用。关键词：扶芳藤；总黄酮；自由基；抗氧化性Study on antioxidant of the total flavonoids from Euonymus fortunei leaves (College of Life and Environment sciences, Huangshan University, Huangshan, 245041, China)Abstract: The extraction of flavonoids in Euonymus fortunei was studied and the antioxidant effects of the ext

5、ract were evaluated as well. Method: Euonymus fortunei leaves were extracted in Soxhlet extractor with petroleum ether and 75% ethanol, and then the extract was concentrated by vacuum, the total flavonoids were gotten from Euonymus fortunei leaves. The reduction capacity and the scavenging capacity

6、to hydroxyl radicals, superoxide anion radicals, DPPH radicals of total flavonoids extracted from the leaves of Euonymus fortunei were studied. Result: The results showed that total flavonoids extracted from the leaves of Euonymus fortunei had a good anti-oxidant properties, and could effectively sc

7、aveng hydroxyl radicals, superoxide anion radicals and DPPH radicals. In the experimental concentration range, its scavenging capacity rised with the increase of the concentration of the total flavonoids. The leaves of Euonymus fortunei would be enhanced development as natural antioxidants to improv

8、e economic value of deep processing. Conclusion:The flavonoids from leaves of Euonymus fortunei was found have strong antioxidative activity. Key words: Euonymus fortunei; Total flavonoids; Free radical; Antioxidantion1引 言 扶芳藤（Euonymus fortunei（Turcz）Hand-Mazz）属卫矛科（Celastraceae）卫矛属（Euonymus L.）。扶芳藤四

9、季常绿，耐荫性强且具良好的抗寒能力，在园林绿化方面具有广泛的应用；扶芳藤是民间药材，全株均可入药，性味辛，具有行气活血、舒筋散瘀、止血、补肝肾等功效；摘其茎叶制成茶饮，不仅可以生津止渴，还具保健和药用价值（江苏新医学院，2006）；动物药理实验研究表明：扶芳藤的粗提物具有明显的降压作用（陈一，1993）。因此，扶芳藤是一种集观赏、绿化、饮用、保健和药用价值的资源植物。目前，扶芳藤的开发利用尚处于起步阶段，近年来，对于扶芳藤叶中化学成分及其各种制剂在临床上的应用，已有了一些报道（黄莹娟，1997）（袁晓等，1994），但目前对扶芳藤中总黄酮的提取及其抗氧化性能的研究，却还未见报道。本实验重点研究

10、了从扶芳藤叶中提取的总黄酮的总还原能力、对羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基的清除能力，为扶芳藤作为资源植物的保健药用价值的深入开发提供参考数据。2 材料与方法2.1材料与设备2.1.1实验材料扶芳藤(Euonymus fortunei)植株采自安徽省黄山市黄山学院南区VVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVVV，由黄山学院生命与环境科学学院张慧冲副教授鉴定。2.1.2实验试剂芦丁（

11、纯度99.99%，中国药品及生物制品检定所），乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，PBS(磷酸缓冲盐溶液)，硫酸亚铁，DPPH（二苯代苦味酰基自由基）等均为国产分析纯。实验用水为二次蒸馏水。2.1.3实验仪器RE-52D旋转蒸发器（上海青浦沪西仪器厂）、HH-S数显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器有限公司）、PL203电子天平（0.001g）（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）、WFZ UV-2100型紫外可见分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司）、SXT-02索式提取器（上海洪纪仪器设备有限公司）及各种实验用玻璃仪器等。2.2 实验方法2.2.1 扶芳藤叶中总黄酮化合物的提取工艺（叶文峰等，200

12、2）（杨新建等，2012）新鲜扶芳藤叶洗净，置于60烘箱中烘干至恒重粉碎成粉末，称取2.500g扶芳藤叶干粉，用滤纸包装捆扎好置于索氏提取器中加入125ml石油醚回流浸提脱脂大约4h至无色取滤纸里滤渣用75%乙醇回流浸提约7h至无色收集提取液用旋转蒸发器减压浓缩浓缩液加水煮沸，过滤得总黄酮化合物提取液（加水定容至250.0ml）待用。2.2.2 扶芳藤叶中总黄酮提取物含量的测定（1）标准曲线的制备（陈飞彪等，2005）（杨俊等，2002）：称取10.000mg芦丁（芸香叶苷三水，烘干至恒重无水），用75%的乙醇定容至100.0ml，制成0.1mg/ml的标准溶液，转移至试剂瓶中保存备用。取上述

13、标准溶液1.0ml、3.0ml、5.0ml、7.0ml、9.0ml、11.0ml分别于6支25.0ml容量瓶中，加5%亚硝酸钠1.0ml摇匀，放置6min；再加10%硝酸铝1.0ml摇匀，放置6min；最后加4%氢氧化钠10.0ml，用75%乙醇定容至25.0ml充分摇匀，放置10min（郭亚健，2006）。6支容量瓶所对应的芦丁溶液浓度分别为0.001mg/ml、0.003mg/ml、0.005mg/ml、0.007mg/ml、0.009mg/ml、0.011mg/ml。以试剂空白做对照，于分光光度计502nm波长下测定吸光值。每组平行测定三次，取平均值。以吸光值A(X)为横坐标，浓度C(Y

14、)为纵坐标绘制A-C标准曲线。得标准曲线的线性回归方程方程为：Y(C)=0.1251X(A)+0.0013（公式2-1），相关系数R2 =0.9995，线性范围0.0010.011mg/ml，线性关系良好（图1）。图1 芦丁标准及线性回归曲线（2）扶芳藤叶中总黄酮提取物含量的计算：分别精密移取3.0ml、4.0ml、5.0ml提取液，按照“标准曲线制备”下的操作，测定吸光度，由芦丁标准曲线回归方程换算成浓度。总黄酮含量C（mg/ml）=Y*稀释倍数 （公式2-2 ） 总黄酮提取率（%）=Y*稀释倍数*V*100%/1000W （公式2-3）式中，Y: 所测定溶液吸光度带入标准曲线方程算出黄酮类

15、物质的浓度（mg/ml）；V: 原浸提液体积（ml）；W: 所称量的样品的质量（g）。2.2.3 扶芳藤叶中总黄酮提取物的总抗氧化能力的测定（普鲁士蓝法）分别取未稀释的总黄酮提取液、按照体积比稀释成5%、10%、20%、30%的总黄酮提取液，对照芦丁溶液及VC溶液（芦丁溶液、VC溶液浓度与未稀释总黄酮提取液浓度相同）各1.0ml，加pH6.6磷酸钠缓冲液2.5ml，加1%铁氰化钾2.5ml，50水浴20min，加10%三氯乙酸2.5ml，取上述混合液2.5ml，分别加蒸馏水2.5ml和0.1%三氯化铁2.5ml，静置10min，在700nm处测吸光值。每组平行测定三次，取平均值。吸光值越大，说

16、明还原性越强，抗氧化性越强。（赵艳红等，2008）（Baske A等，1999）2.2.4 扶芳藤叶中总黄酮提取物超氧阴离子自由基清除能力的测定(邻苯三酚自氧化法)（赵艳红等，2008）。取Tris-HCl缓冲液（pH8.2）6.0ml，分别加未稀释的总黄酮提取液、按照体积比稀释为1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%总黄酮提取液、对照芦丁溶液及VC溶液（芦丁溶液、VC溶液浓度与未稀释总黄酮提取液浓度相同）0.5ml，再加37水浴过的50mmol/L邻苯三酚盐酸溶液0.5ml，混合反应4min，然后用1.0ml浓HCl终止反应，在322nm处测吸光值。以等体积不含样品时邻苯三酚溶液为对照空白

17、，吸光度为A0。每组平行测定三次，取平均值。超氧阴离子自由基清除率公式如下：O2-清除率（%）=A0-A/A0*100% （公式2-4）式中， A0：不含样品时邻苯三酚的自氧化吸光度； A ：被测样品溶液吸光度。2.2.5 扶芳藤中总黄酮提取物羟基清除能力的测定（邻二氮菲-Fe氧化法）（赵艳红等，2008）取5mmol/L邻二氮菲1.5ml，加4.0ml磷酸钠缓冲液(pH7.4)混和均匀，再加入7.5mmol/L硫酸亚铁1.0ml，分别加未稀释总黄酮提取液、按照体积比稀释成5%、10%、20%、30%的总黄酮提取液、对照芦丁溶液及VC溶液（芦丁溶液、VC溶液浓度与未稀释总黄酮提取液浓度相同）1

18、.0ml，加1.5ml蒸馏水，加0.1%双氧水1.0ml，37水浴加热1h，于536nm处测定吸光值。每组平行测定三次，取平均值。羟基自由基清除率的公式如下：OH清除率（%）=A（加）- A(损)/A(未损)-A(损)*100% （公式2-5）式中：A(加)：为加入样品（抗氧化剂）及双氧水；A(损)：不加入抗氧化剂只加双氧水；A(未损)：两者都不加，加蒸馏水作为参比。2.2.6 扶芳藤中总黄酮提取物清除DPPH自由基清除能力的测定（DPPH法）（丰永红，2002）（Benzie I F F等，1996）（1）原理：DPPH（二苯代苦味酰基自由基）是一种稳定的自由基，其乙醇溶液呈紫色，在517n

19、m处有最大吸收峰。当向DPPH溶液中加入自由基清除剂时，溶液颜色变浅，吸光度变小，吸光度变小的程度与自由基被清除的程度呈线性关系，故可用于检测自由基被清除的程度。清除自由基的能力用抑制率表示，抑制率越大，表明该物质的抗氧化能力越强。（2）清除DPPH自由基的实验：分别吸取未稀释的总黄酮提取液、按照体积比稀释为1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%总黄酮提取液、对照芦丁溶液及VC溶液（芦丁溶液、VC溶液浓度与未稀释总黄酮提取液浓度相同）2.0ml，加DPPH溶液（用80%乙醇定容至8mg/L，存放于棕色试剂瓶中）2.0ml，以80%乙醇为空白参比溶液，测定溶液在517nm处的吸光值

20、A1；同时测定总黄酮提取液、按照体积比稀释为1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%总黄酮提取液、对照芦丁溶液及VC溶液（芦丁溶液、VC溶液浓度与未稀释总黄酮提取液浓度相同）2.0ml与80%乙醇2.0ml混合液在517nm处的吸光值A2 ；再测定DPPH溶液2.0ml与80%乙醇2.0ml混合液在517nm处的吸光值A0 。每组平行测定三次，取平均值并按以下公式计算样品的抑制率。DPPH自由基抑制率的公式如下：抑制率（%）= 1-（A1- A2）/ A0 *100% （公式2-6）式中：A1 ：为样品溶液与DPPH溶液混合液的吸光值；A2 ：为样品溶液与80%乙醇溶液混合液的吸光

21、值；A0 ：为DPPH溶液与80%乙醇溶液混合液的吸光值。3结果与分析3.1 扶芳藤叶中总黄酮提取物的含量表1 扶芳藤叶中总黄酮提取物的含量C(mg/ml)A(吸光值)Y(由标准方程得)提取率(%)3ml/25ml0.1310.1160.01581.314ml/25ml0.1350.1630.02171.355ml/25ml0.1330.2020.02661.33均值0.133/1.33由表1中扶芳藤叶总黄酮提取液的A，根据标准曲线方程Y(C)=0.1251X(A)+0.0013和总黄酮含量计算公式C（mg/ml）=Y*稀释倍数，可得总黄酮类提取物含量为0.133mg/ml；根据公式：总黄酮提

22、取率（%）=Y*稀释倍数*V*100%/1000W，其提取率为1.33%。iguamgIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIX3.2 扶芳藤叶中总黄酮提取物

23、的总抗氧化能力表2 从扶芳藤叶中提取的总黄酮提取物的总抗氧化性稀释浓度5%10%20%30%未稀释芦丁VC吸光值（A）0.1140.1420.1860.2530.3220.3900.410图2 从扶芳藤叶中提取的总黄酮提取物的总抗氧化性通过观察在扶芳藤提取液粗黄酮存在时，用Fe3+ Fe2+ 的转移来检测其还原能力，因为一种物质的总抗氧化能力与它潜在的抗氧化活性有十分密切的关系。由表2和图2可知，扶芳藤叶黄酮类提取物的总抗氧化性与芦丁、VC的相当，并且在实验浓度范围内，抗氧化能力随着总黄酮提取物浓度增大而提高，说明扶芳藤叶中的总黄酮提取物具有良好的抗氧化能力，完全可以作为天然抗氧化剂使用。3.

24、3 扶芳藤叶中总黄酮提取物对超氧阴离子自由基的清除能力表3 扶芳藤叶总黄酮提取物对超氧阴离子自由基的清除率稀释浓度1%2%3%4%5%6%7%芦丁VC吸光值（A）1.2171.2121.1861.1681.1421.1200.9901.4391.178吸光值（A0）1.502清除率（%）18.9719.3121.0422.2423.9725.4334.094.1921.57图3 扶芳藤叶总黄酮提取物对超氧阴离子自由基的清除率由表3、图4可知：扶芳藤叶黄酮类提取物对超氧自由基有很好的清除作用，在实验浓度范围内，随浓度的升高清除率呈上升趋势。尽管在提取物浓度很低的情况下，也有很明显的清除效果，并且

25、1%的低稀释浓度的黄酮提取物对超氧阴离子自由基的清除率比对照样品芦丁溶液（0.133mg/ml）还高。4%的低稀释浓度的黄酮提取物对超氧阴离子自由基的清除率高于VC溶液（0.133mg/ml）的清除率。由此可看出，扶芳藤叶总黄酮提取物对超氧阴离子的清除效果要优于 VC 和 芦丁。生物体内氧化还原反应中，大致有2%5%的氧会产生超氧自由基，超氧自由基的毒性是机体发生氧中毒的主要原因，表现在使核酸链断裂，多糖解聚和不饱和脂肪酸过氧化作用，进而造成遗传突变，膜损伤，酶系失灵，线粒体氧化磷酸化作用改变等一系列变化。此实验表明，扶芳藤叶中的总黄酮提取物可通过良好的清除超氧自由基能力来保持机体正常的生理机

26、制。3.4 扶芳藤叶中总黄酮提取物羟基清除能力表4 扶芳藤叶总黄酮提取物对羟基自由基的清除稀释浓度5%10%20%30%未稀释芦丁VC清除率(%)8.4021.0027.73310946.2241.1864.71A(样品)0.0740.0890.0970.1010.1190.1130.141A(未损伤)0.183A(损伤)0.064图4 扶芳藤叶总黄酮提取物对羟基自由基的清除由表4、图4可知，扶芳藤叶总黄酮提取物对羟基自由基有显著的清除作用，并且随总黄酮提取物浓度的增大，清除率随之增加。并且未稀释的扶芳藤叶总黄酮提取物（0.133mg/ml）与相同浓度的芦丁相比，其清除率还高于芦丁，但略低于V

27、C溶液。因此，扶芳藤叶中总黄酮提取物对羟基自由基有较好的清除作用。有研究表明，自由基与机体的许多功能障碍和疾病的发生有关，因此研究自由基的检测方法并探讨物质对自由基的清除作用具有重要意义12。对于生物体而言，羟基自由基是最活泼的自由基，也是毒性最大的自由基，它可与活细胞中的任何分子发生反应而造成损害，且反应速度快。羟基自由基的半衰期很短，一般存在时间不足，即它与其他分子反应而全部消失13。然而，由它引起的自由基链反应却可在较大范围内造成生物体的损害。此实验表明，扶芳藤叶中的总黄酮提取物可通过良好的清除羟基自由基能力来行使抗氧化功能。3.5 扶芳藤叶中总黄酮提取物对DPPH自由基的清除能力表5

28、扶芳藤叶总黄酮提取物DPPH自由基的清除稀释浓度1%3%5%10%20%30%未稀释芦丁VC吸光值A10.5530.5190.4300.3950.2170.1230.1430.1100.044吸光值A20.0050.0170.0180.0290.0430.0500.0940.0170.011吸光值A00.670清除率(%)18.2125.0738.5145.3774.0389.1092.6986.1295.07图5 扶芳藤叶总黄酮提取物DPPH自由基的清除由表5、图5可知，扶芳藤叶总黄酮提取物对DPPH自由基有显著的清除作用，并且随总黄酮提取物浓度的增大，清除率随之增加，未稀释的扶芳藤叶总黄酮

29、提取物对DPPH自由基清除率高达92.69%，其清除能力略高于相同浓度的芦丁溶液，与相同浓度的VC溶液相当。因此，扶芳藤叶中总黄酮提取物对DPPH自由基有良好的清除作用。4 结果讨论实验采用索式提取法提取了扶芳藤叶中的总黄酮，此法操作简便，并在提取过程中采用石油醚脱脂，提高了提取液中总黄酮类化合物的纯度。以芦丁和Vc作为对照，扶芳藤叶中总黄酮提取物的体外抗氧化性研究表明，扶芳藤叶总黄酮提取物有良好的抗氧化性，能有效地清除羟自由基，超氧阴离子自由基，DPPH自由基，且在实验浓度范围内，随着扶芳藤叶总黄酮提取物浓度的升高其清除能力呈上升趋势。因此，从扶芳藤叶中提取的总黄酮可以作为天然的抗氧化剂摄入

30、到机体内，抑制或解除自由基对机体产生的伤害，从而保护机体的健康。因此，扶芳藤叶可以加强作为天然抗氧化剂方面的开发，提高扶芳藤叶的深加工的经济价值。我国的扶芳藤种质资源非常丰富，育种潜力大，通过引种、育种和适当的栽培措施可培育出适应多种条件具有多种用途的新品种。扶芳藤的药用价值高，随着中医药越来越受到重视，扶芳藤将成为我国药业中的重要原材料。超氧阴离子（O2-）、羟自由基（OH）、DPPH是常见的对生物体内能造成伤害的自由基，可引起细胞损伤和死亡，与皮肤衰老、色斑、皱纹及某些皮肤疾病的发生有密切关系，因此，目前抗自由基的生物学、医药学与功能食品科学的研究成为一个十分活跃的研究领域。当机体由于某种

31、原因而产生过多的自由基时，由自由基产生的反应往往呈链式或瀑布式迅速扩展，因此及早防止和清除自由基的产生是治疗由自由基导致的疾病的关键，因此，保护食物中抗氧化成分或在食物中添加天然抗氧化成分，以弥补或增强机体清除自由基或抑制自由基反应能力，药食同源，食补胜于药补，可以成为抗自由基生物学和功能食品的开发利用的交叉融汇的新方向。本次研究采用的是石油醚和乙醇浸提后置于索式提取器中连续提取，是粗提取，得到的是扶芳藤叶中的总黄酮提取物，对于其中的化学成分的组成及其各化学成分的具体作用，还有待后续的研究。参考文献陈飞彪，李长生金鸡菊总黄酮的提取及含量测定食品科学，2005，26(9)：314-316陈一扶芳

32、藤的降压作用中药研究文献摘要（第5卷） 北京：中国医药科技出版社，1993:604丰永红，于淑娟，李国基DPPH法测甘蔗提取物抗氧化活性研究药物分析志，2002，22(2)：97-99郭亚健，张兰珍山楂叶、沙棘总黄酮含量测定的商榷中国药品标准，2010，11（4）：246-247黄莹娟扶芳藤对血栓的形成及凝血系统的影响 西北药学杂志，1997；12(1)：19-20江苏新医学院中药大词典上海出版社，2006：1108.秦卫东杭白菊提取物抗氧化性能研究徐州:彭城大学食品科学系，2000：21-22.唐巧玉，周毅峰，朱玉昌金橘皮中黄酮类物质的提取及其体外抗氧化活性研究农业工程学报， 2008，24

33、(6)：258- 261杨俊，许娟化杭白菊总黄酮的提取工艺及其含量动态的变化研究中草药杂志,，2002，33(11)：989-990杨新建，段素云，宋琳琳金银花中总黄酮的提取及其抗氧化活性的研究安徽农业科学，2012，40（12）：7047-7049叶文峰杜仲叶总黄酮最佳提取工艺条件的研究宜春学院学报，2002，24(4)：23袁晓，吴晓辉扶芳藤种油中的拒食活性化合物的X-射线晶体结构分析 天然产物研究与开发，1994；6（2）：37-42赵艳红，李建科，李国秀天然抗氧化物体外活性评价方法的优选与优化陕西师范大学食品工程系，2008：65-66Baske A,Giordanoa S,Casta

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37、治学态度，精益求精的工作作风，诲人不倦的高尚师德，严以律己、宽以待人的崇高风范，朴实无华、平易近人的人格魅力对我影响深远。不仅使我树立了远大的学术目标、掌握了基本的研究方法，还使我明白了许多待人接物与为人处世的道理。本论文从选题到完成，每一步都是在导师的指导下完成的，倾注了导师大量的心血。感谢我的导师胡晓倩教授，他严谨细致、一丝不苟的作风一直是我工作、学习中的榜样！在此，谨向导师表示崇高的敬意和衷心的感谢！本论文的顺利完成，离不开各位老师、同学和朋友的关心和帮助。在此感谢各位老师、同学和朋友指导和帮助；等老师的指导和帮助；感谢黄山学院生命与环境科学学院，感谢辅导员谢家荣老师四年来给我学习上的指导和生活上的鼓励与支持，感谢和我一同完成实验的各位同学，特别感谢我的同学，没有你们的帮助实验是不可能顺利完成的，感谢你们在实验过程中对我的照顾和帮助。最后要感谢的是我的父母，他们不仅培养了我对中国传统文化的浓厚的兴趣，让我在漫长的人生旅途中使心灵有了虔敬的归依，而且也为我能够顺利的完成毕业论文提供了巨大的支持与帮助。在未来的日子里，我会更加努力的学习和工作，不辜负父母对我的殷殷期望！我一定会好好孝敬和报答他们。