中草药抗氧化活性研究—— 忍冬藤抗氧化活性毕业论文.doc
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1、毕业设计(论文) 题 目:中草药抗氧化活性研究 忍冬藤抗氧化活性 学 院: 专 业: 班 级: 姓 名 学 号: 指导教师 目录中英文摘要1绪论21忍冬藤提取工艺2 1.1 所需仪器2 1.2 提取方法2 2忍冬藤抗氧化活性研究方法3 2.1DPPH法3 2.1.1 DPPH法实验原理3 2.1.2 DPPH法实验过程3 2.1.3 DPPH法实验分析与结果3 2.2福林酚法5 2.2.1 福林酚法实验原理5 2.2.2 福林酚实验过程5 2.2.3 福林酚实验分析与结果6 2.3 ABTS法7 2.3.1 ABTSS实验原理7 2.3.2 ABTS实验过程7 2.3.3 ABTS实验分析与结
2、果8 2.4铁离子螯合能力法9 2.4.1 铁离子螯合实验原理9 2.4.2 铁离子螯合实验过程9 2.4.3 铁离子螯合实验分析与结果10 2.5还原力测定法10 2.5.1 还原力实验原理10 2.5.2 还原力实验过程11 2.5.3 还原力实验分析与结果123 总结13 致谢14 参考文献15 中草药抗氧化活性研究 忍冬藤抗氧化活性 摘要 中草药是天然的抗氧化活性物质的重要来源,因其种类繁多,如菊花,甘草,忍冬藤,金银花,决明子,等中草药抗氧化成分复杂,因此活性差异较大。用于开发体内自由基清除药物,保健品,和食品的抗氧化剂。中草药中的抗氧化活性物质有黄酮,多酚,生物碱,多糖,皂苷等等,
3、都是非常好的天然抗氧化活性成分。本文以忍冬藤为例。其成分有皂苷,绿原酸,黄酮,多糖,都具有清除自由基能力和抗菌能力。 忍冬藤能采用多种方法分析其抗氧化活性。DPPH方法是目前最常用的检测清除自由基能力被广泛应用于实验室中。福林酚法用于检测样品中的总酚含量,是研究抗氧化活性的因素之一。ABTS法原理与DPPH相似,都是应用到了抗氧化活性物质具有自由基清除的能力。铁离子螯合法,通过测定样品的铁离子螯合能力从而得出样品的抗氧化能力大小。样品的螯合能力越强,则抗氧化活性也越强。还原力测定法也是最常用的方法之一。关键词 忍冬藤;DPPH ;福林酚法;ABTS,;还原力测定The study of the
4、 antioxidant activity of Chinese herbal medicine the antioxidant activity of Honeysuckle cane Abstract Chinese herbal medicine is a great resource of antioxidant activity substance .the kind of the Chinese herbal medicine is various .such as chrysanthemum, licorice ,honeysuckle and etc. And it s com
5、position is very complex .so the antioxidant activity of which vary from one to another . Chinese herbal medicine act removing free redicals which contain such as ketone,phenol, Alkaloid,sugar,saponins and so on which are excellent antioxidant activity substance. Honeysuckle cane is a example of t.h
6、e Chinese herbal medicine which contain , saponihens Chlorogenic acid,ketone.which can abolish radical and act as antioxidant activity substance .the ability of antioxidant activity of Honeysuckle cane can be admeasurement by many ways .The DPPH is the method that people use it most in the lab to an
7、alyse antioxidant activity. Folin is used to analyse the phenol of the sample .but it is only one of the fact to balance the antioxidant activity .there are also other method to analyse the ability of antioxidant activity of the sample which are ABTS,Fe chelating ability .The ABTS and DPPH are very
8、resemble .both of them are based on the ability to abolish free redicals .Fe chelating is to determine the ability of the sample of the Fe chelating ability. The more the power of the Fe chelating .the higher ability of the sample of the antioxidant activity .reducing power is also another method to
9、 setting out the power of antioxidant activity .Key word Honeysuckle cane ;DPPH ;Foline-Phenol ;ABTS ;Fe chelating 绪论 中草药种类繁多,且抗氧化能力各不相同。含有的抗氧化活性成分也是种类较多。但是中草药活性成分的提取和研究抗氧化活性的方法是大致相同。因此本文以忍冬藤为例子。详细阐述其抗氧化活性研究方案。得出适合中草药抗氧化研究的一般方法。 忍冬藤又叫,大薜荔,千金藤,是金银花的干燥茎枝。其主要含有,皂甘,黄酮,绿原酸等具有抗氧化活性。现代医学证明其含有较强的抗菌和抗氧化功效,能抑
10、制自由基的生成,从而保护机体。延缓机体的衰老。 中草药提取物的抗氧化活性研究主要可以利用福林酚法,ABTS法,还原力测定法,DPPH法,铁离子螯合等一些方法来测定其抗氧化活性的大小。通常实验室较常用的抗氧化检测方法为DPPH法。DPPH法利用抗氧化活性物质具有清除自由基的能力,从而得出DPPH的清除曲线。福林酚法通常检测抗氧化活性物质所含的总酚量。其抗氧化能力的大小通常用没食子酸的量表示。ABTS法和DPPH的原理大致相同,都是利用抗氧化活性物质具有自由基清除能力,通过自由基清除的强弱来表示抗氧化能力的强弱。铁离子螯合能力也是反应样品抗氧化能力的一个因素,即螯合率越高,样品的抗氧化能力也越高。
11、还原力测定是利用铁氰化钾还原为亚铁氰化钾后,亚铁氰化钾能与三价铁离子反应生成普鲁斯蓝来测定样品的抗氧化能力大小。通常结果用样品VC所含VC的当量表示。1 忍冬藤的提取方法1.1 所需仪器: 旋转蒸发仪:型号 RE-5003 上海申顺生物科技有限公司。 离心机:型号GL-10MC。北京四环仪器厂。 恒温水浴锅:型号:HH2型 北京普析通用仪器有限公司 。循环水式真空泵:型号SH-3 上海亚荣生化仪器厂。1.2 提取方案A 材料粉碎: 称取忍冬藤20克,粉碎,并且50目过筛B 热回流提取:将破碎后的忍冬藤放置于磨口的圆底烧瓶中,加入适量的乙醇或甲醇,用恒温水浴锅加热至微沸的状态。并且回流2次,第一
12、次1小时,第二次0.5小时。C 抽滤 :用布氏漏斗减压抽滤浸提液,滤液放入圆底烧瓶中。D 浓缩 :合并浸提液,用旋转蒸发仪,温度控制在40度左右慢慢蒸发掉乙醇,至没有乙醇的味道。E 离心 :浓缩液必须4度存放24小时后,并且10000转离心30分钟,取上清液,加乙醇定容至1g/ml,(即浓缩液的质量与定容的刻度相同)。2 忍冬藤抗氧化活性研究方法2.1 DPPH法2.1.1 实验原理: DPPH清除率的检测是一种快速,简单,高效的实验室抗氧化检测方法,在天然植物提取物体外抗氧化测定中应用广泛。其原理是用到二笨代苦味酰基(有毒),DPPH. 它是种在有机溶剂中比较稳定的氮自由基,其分子结构有三个
13、苯环,一个氮上有孤对电子,在517纳米处有最强吸收峰。若有抗氧化物质存在时,DPPH上的孤对电子被配对从而使其颜色发生变化,成为浅红紫色,用分光光度计分析DPPH含量的变化。2.1.2 实验过程:A 忍冬藤样品曲线的绘制 以甲醇为溶剂,配制不同浓度的样品溶液,取0.1ml的样液,并且加入3.9ml的浓度为25mg/ml DPPH标准液,以甲醇代替样液做空白试验,在515纳米处测吸光值。B VC参照曲线的绘制 配制不同浓度的VC溶液,取0.1ml的样液,并且加入3.9毫升的质量浓度为25mg/ml DPPH标准液,以甲醇代替样液做空白试验,混合液摇匀,在515纳米处测吸光值。C BHT参照曲线的
14、绘制,配制不同浓度的BHT溶液,取0.1ml的样液,并且加入3.9毫升的质量浓度为25mg/ml DPPH标准液,以甲醇代替样液做空白试验,混合液摇匀,在515纳米处测吸光值。D 根据样品忍冬藤,VC溶液,BHT溶液的溶度曲线算出清除率 见如下公式 其中A1表示甲醇与DPPH溶液的吸光值,A0表示样品的吸光值。并且绘制出吸光曲线。根据吸光曲线计算出半数清除量IC50的值。(IC50即清除率为50%所对应的样品浓度)。IC50值越小,则抗氧化能力越强。从而衡量样品,和参照品抗氧化能力之间的关系 清除率=(1-A0/A1)*100% 2.1.3 结果与分析2.1.3.1忍冬藤吸光曲线表1说明了当忍
15、冬藤的浓度在025mg/ml时候具有较为合适的吸光度范围,并且随着浓度的增大,吸光度值减小,在图一的吸光度曲线中得出忍冬藤在该浓度区间内,线性良好,回归方程为y=-0.0172x+0.6117。且方差为0.9906.误差较小。表1 忍冬藤吸光度表 忍冬藤浓度(mg/ml) 0 5 10 15 10 25吸光度值 0.635 0.510 0.429 0.342 0.273 0.1942.2.3.2 BHT吸光度曲线分析 表2说明当BHT的浓度在0到2.5mg/ml时具有较好的吸光度值范围,并且当浓度在2和2.5mg/ml时吸光度值差异较小,反应在曲线上为指数函数的曲线。说明当BHT浓度达到2mh
16、/ml时。DPPH的清除量变化很小。BHT的吸光曲线回归方程为y=0.5990e(-0.6970)。 表2 BHT吸光度表 BHT浓度(mg/ml) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 吸光度值 0.636 0.416 0.305 0.1956 0.128 0.125 2.2.3.3 VC吸光度表分析 表3可以看出VC的浓度在00.5时具有较好的吸光度范围,并且清除率较忍冬藤和BHT都要来的大和彻底,但是VC的清除率不能达到100%。图3可以看出VC的线性较好。回归方程为y=-1.2466x+0.6051。方差为0.9886。表3 VC吸光度表 VC浓度(mg/ml) 0 0.1 0.2 0.
17、3 0.4 0.5吸光度值 0.636 0.471 0.330 0.220 0.090 0.014 2,234 结论分析 如表四所示 三种样品对DPPH都有清除作用。 从实验分析来看忍冬藤在吸光度范围内是直线。VC在标准吸光度范围内也是直线,但是BHT是曲线,所以不难得出如果继续加大忍冬藤和VC的浓度,则吸光度的改变会很小。也有可能得到相同的吸光度曲线。从图可知清除率越大,看氧化活性液越大。其中VC最强,清除率达到97。7%。BHT次之,忍冬藤最弱。抗氧化活性为VCBHT忍冬藤,并且VC的半数清除量是忍冬藤的85.5倍。BHT的半数清除量是忍冬藤的17.5倍。通过对比说明了忍冬藤具有清除自由基
18、的能力。表4 根据三者吸光度曲线的比较可以计算得出IC50值 忍冬藤浓度 清除率 IC50 VC浓度 清除率 IC50 BHT浓度 清除率 IC50mg/ml % mg/ml % mg/ml %0 0 0 0 0 05 19.6 0.1 26.0 0.5 34.510 32.4 0.2 48.1 1 52.015 46.1 17.1 0.3 65.4 0.2 1.5 73.8 0.9820 57.0 0.4 85.8 2 80.025 70.1 0.5 97,7 2.5 80.3 2.2福林酚法2.2.1实验原理: 多酚类物质是植物抗氧化的主要成分之一,忍冬藤中就含有丰富的多酚类物质,其能与福
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