【毕业论文】锌浸种对水稻种子萌发及幼苗生长的影响.doc
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1、【标题】锌浸种对水稻种子萌发及幼苗生长的影响 【作者】熊 星 【关键词】杂交水稻氯化锌萌发幼苗生长 【指导老师】冉景盛 【专业】生物科学 【正文】1引言水稻种子萌发及其生理特性的变化严重影响水稻的播种和稻米的质量。由于我国水稻主产区处于长江以南地区,属于亚热带,并常年受季风气候的影响,以及地理环境因素的影响,致使对水稻种子萌发及生理特性的研究显得至关重要。锌(Zn)是植物必需的14种矿质元素中的之一,作为植物生命活动的调节剂,参与酶的活动,影响植物的代谢,对植物的种子萌发和生长具有重要的影响。Zn作为必需元素参与到植物的生长代谢过程中,但当其浓度超过一定范围不仅会对植物产生毒害作用,进入食物链
2、还将对人的健康造成伤害。水稻是我国的主要粮食作物之一,水稻的生产直接关系到我国人民的粮食问题,而Zn作为必需矿质元素与水稻种子萌发和幼苗生长之间具有什么样的关系成为本次试验的研究目的。水稻种子萌发与必需矿质元素的浓度有很大关系。目前,国内外大量专家学者有了一定的研究成果。如杨海霞,李涛1等做的实验结果表明10 mg.L-1及20 mg.L-1的 Zn2+溶液对小麦种子的萌发、幼苗根系活力和叶绿素含量有促进作用,25 mg.L-1至160 mg.L-1的Zn2+溶液随着浓度的增高使得小麦种子的发芽幼苗根系及地上部分的生长发育受到抑制。李灵芝,李海平2等研究了硫酸锌对苦荞种子萌发及其生理特性的影响
3、,结果表明一定浓度的硫酸锌浸种有促进苦荞种子萌发的作用,0.05的硫酸锌效果最好,发芽率可以提高20,活力指数可以提高28。鲁先文,何俊3研究的Cu2+、Zn2+对小麦种子萌发和幼苗生长的影响,研究不同浓度Cu2+、Zn2+污染对其种子萌发、幼苗生长、叶绿素含量的影响。结果表明低浓度Cu2+和Zn2+可促进小麦种子萌发和幼苗生长,高浓度Cu2+和Zn2+对小麦种子萌发有抑制作用。张春荣,李红等4研究了重金属Cd2+,Zn2+对紫花苜蓿种子萌发及幼苗生长的影响,结果表明低浓度的Cd2+,Zn2+处理液对种子的萌发和幼苗的生长具有激活效应,高浓度的Cd2+,Zn2+处理液抑制种子的萌发和幼苗的生长
4、;且对根的作用大于对芽的作用;而混和处理液对种子的影响大于单一离子的影响。王晓波,宋凤斌5研究了锌对水稻种子萌发的影响。结果表明3 mg.L-1 Zn2+能有效加快稻种的萌发进程,提高种子发芽率38.9%,促进胚芽尤其是胚根的生长,种子活力指数提高122.34%;在萌发初期,锌能显著增强种子膜透性,提高超氧化物歧化酶(SOD)活力56.96%、过氧化氢酶(CAT)活力221.53%;浸种后期,锌在降低电解质外渗及SOD、CAT活力的同时,提高过氧化物酶(POD)活力284.17%。韩瑾徐,温馨等6研究的不同锌水平对番茄幼苗生长的影响,采用盆栽育苗的方式研究了不同锌水平对番茄幼苗生长的影响。结果
5、表明适当的锌肥浓度,可提高番茄幼苗的叶、茎鲜重以及叶绿素的含量。但当锌肥浓度过高时,幼苗的生长势降低。因此,本实验选用涪陵常见的水稻品种宜香9303,探究不同浓度梯度的Zn2+溶液浸种对水稻种子的萌发和幼苗生长的影响,通过本试验以期寻找到不同浓度的锌溶液对水稻种子萌发和生长的相关机理,为解决相关问题提供理论依据,从而为促进水稻的生产提供参考,具有一定的现实意义。2材料与方法2.1材料2.1.1供试材料水稻品种:宜香9303,由涪陵农业科学研究所提供。2.1.2仪器设备恒温水浴锅,冷冻离心机,可见分光光度计,电子天平,人工气候箱,恒温箱。2.1.3药品氯化锌、蒽酮、考马斯亮兰G-250、NaOH
6、、磷酸缓冲液、3,5-二硝基水杨酸等。2.2试剂的配制2.2.1各浓度梯度的氯化锌溶液精确称取相应质量的氯化锌,用蒸馏水溶解并定溶至1000mL来配制0 mg.L-1、2.0 mg.L-1、3.0 mg.L-1、5.0mg.L-1、10mg.L-1、20mg.L-1的氯化锌溶液。2.2.2蒽酮溶液称取0.1g蒽酮溶于100 mL稀硫酸(由76 mL比重1.84的硫酸稀释成l00 mL)中即得蒽酮试剂贮于棕色瓶内,冰箱保存。2.2.3考马斯亮蓝溶液称取100 mg考马斯亮蓝溶于50 mL 95%乙醇中,加入85%正磷酸100 mL,加蒸馏水到1000 mL混匀。2.2.4 0.02 mg.L-1
7、(pH6.9)磷酸缓冲液0.2 mg.L-1L磷酸二氢钾67.5 mL与0.2 mg.L-1L磷酸氢二钾82.5 mL混合,稀释10倍。2.2.5 1%淀粉溶液1 g可溶性淀粉溶于100 mL PH6.9,0.02 mg.L-1磷酸缓冲液中,其中含有0.0067 mg.L-1氯化纳。2.2.6 3,5一二硝基水杨酸试剂3,5-二硝基水杨酸:称取3,5-二硝基水杨酸10 g, NaOH 20 g,酒石酸钾钠200 g,加入500 mL蒸馏水,适当加热溶解后,加入重蒸酚2 g,无水亚硫酸钠0.5 g,以蒸馏水稀释到1000 mL,贮藏在棕色瓶中。2.2.7 Hoagland溶液(1)大量元素:每升
8、培养液中加入以下各种试剂。表2.1大量元素的种类及用量试剂 浓度(mol?L-1) 每升培养液中加入的体积(mL)KH2PO4KNO3Ca(NO3)2MgSO4 1111 1552(2)微量元素:每升水中应加入以下各种物质。表2.2微量元素的种类及用量化合物 每升水中加入的量(g) 化合物 每升水中加入的量(g)H3BO3MnCl2?4H2OZnSO4?7H2O 2.861.810.22 CuSO4?5H2OH2MoO4?H2O 0.080.02(3)Fe-EDTA溶液:1 L水中加入Na2-EDTA 7.45 g,FeSO4?7H2O 5.57 g。每升大量元素培养液中加入1 mL Fe-E
9、DTA溶液和1 mL的各种微量元素溶液即可。2.3实验方法2.3.1种子的处理与培养取上述品种的水稻种子用3%的H2O2溶液消毒510 min后,用蒸馏水处理冲洗数次,再分别置于0.5、2.0、3.0、5.0、10、和20 mg.L-1浓度的氯化锌溶液中,浸泡48小时,以蒸馏水做对照实验7。从浸泡过的种子中精选100粒健壮饱满的籽粒,放入垫有两层滤纸的培养皿中,每个处理设6次重复。实验在光照培养箱中培养,温度为281,湿度为80%85%,光周期为10h/14h(光/暗比)。2.3.2种子活力的测定以种子露白为标准,统计24 h,48 h,72 h,96 h的发芽率,且培养9天后,从各个培养皿中
10、分别取20株幼苗,将它们分别放入干燥的培养皿中,置于干燥箱中,60烘干至恒重,称重,取其单株的平均干重,并计算发芽指数和活力指数8。发芽指数=Gt/Dt(Gt是t时间内的发芽数,Dt是相应的发芽天数)式(2-1)活力指数=发芽指数幼苗干重式(2-2)2.3.3平均株高和平均根长培养第9天后,每天随机选取20棵幼苗,测量由水稻种子胚到苗端的长度,其平均值即为株高。每组随机选取20棵水稻幼苗,测量其每株根长,求平均值即平均根长9。2.3.4叶绿素含量的测定称取剪碎混匀的叶片0.1 g,装入具塞试管中,用95乙醇丙酮混合液(1:l,vv)10 mL浸提至叶片完全变白,用紫外分光光度计在波长665 n
11、m和649 nm比色测定光密度值,按Arnon法计算叶绿素含量。将测定得到的吸光值,输入Excel数据处理软件,按下列公式10进行计算:Ca=13.95A6656.88A649 式(2-3)Cb=24.96A6497.32A665 式(2-4)据此即可得到叶绿素a和叶绿素b的浓度(Ca、Cb:mg.L-1),二者之和为总叶绿素的浓度。最后根据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量:叶绿素的含量(mg/g)=CabVn/W。 式(2-5)式中: Ca为叶绿素a的浓度;Cb为叶绿素b的浓度;Cab为总叶绿素的浓度;V为提取液体积;n为稀释倍数;W为样品鲜重。2.3.5可溶性蛋白含量的测定取烘干粉碎
12、样品0.1 g放入50mL容量瓶中,加0.25NaOH溶液5 mL,40振荡提取30分钟,蒸馏水定容至刻度,3000转每分钟离心5分钟即可。取样品液1 mL,加考马斯亮兰-250溶液5 mL,室温下静置2分钟,比色,查标准曲线蛋白质含量,以蒸馏水中加考马斯亮兰溶液5 mL为对照。可溶性蛋白标准曲线的制作:取100 ug牛血清蛋白标准液0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.0 mL分别放在10 mL试管中,加蒸馏水至1 mL,再加5 mL考马斯亮兰溶液混匀,室温下放置2 min,在波长595 nm处比色,以吸光度为纵坐标,牛血清蛋白含量为横坐标制备标准曲线。表2.3可溶性蛋白质标准曲线
13、的制作项目 管号1 2 3 4 5 6 7牛血清蛋白标准液/mL 0 0.1 0.3 0.5 0.7 0.9 1.0蒸馏水/mL 1 0.9 0.7 0.5 0.3 0.1 0牛血清蛋白含量ug 0 10 30 50 70 90 100蒽铜试剂/mL 5 5 5 5 5 5 5OD值 0.000 0.0207 0.0574 0.0942 0.1310 0.1677 0.1861图2.1牛血清蛋白标准曲线计算11:样品中蛋白质含量%=A50100/1W106=A/W200式(2-6)式中:A为样品测定液中蛋白质含量W为样品重(g)1为测定液体积(mL)50为样品液总体积(mL)106为换算为微克
14、系数100为百分含量2.3.6可溶性糖含量的测定称取0.1 g过40-60目筛的粉末干样放入三角瓶(50 mL)中,在加入25 mL蒸馏水放入沸水浴中煮沸20-30分钟,取出冷却,过滤入100 mL容量瓶中,用热水冲洗残渣数次,定容至刻度。取样品提取液0.5 mL,加入蒸馏水0.5 mL,再加蒽铜试剂5.0 mL,混匀,在A620nm处进行比色,查标准曲线得可溶糖含量并进行含糖量计算。标准曲线的制作:取100ug.mL-1葡萄糖标准液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分别放在10mL试管中,加蒸馏水至1mL,再加5mL葱酮试剂混匀,在沸水浴中煮沸l0min,取出冷却,在波长620n
15、m处比色,以吸光度值为纵坐标,葡萄糖标准液浓度为横坐标绘制标准曲线。表2.4葡萄糖标准曲线的制作项目 管号1 2 3 4 5 6葡萄糖标准液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0蒸馏水/mL 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0葡萄糖浓度/ug 0 20 40 60 80 100蒽铜试剂/mL 5 5 5 5 5 5OD值 0.000 0.0152 0.0306 0.0459 0.0612 0.0765图2.2葡萄糖糖标准曲线计算12:可溶性糖含量()=糖重量(ug)稀释倍数100/样品重(g)10式(2-7)2.3.7 a-淀粉酶活性的测定取酶液 1 mL二份,分别放入测定管及
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