黄连药用成分的提取及含量测定化学化工制药毕业论文设计.doc

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1、黄连药用成分的提取及含量测定摘要：黄连又名为川连、川黄连、姜制黄连、姜连、萸连等。本品为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch、或云连Coptis teeta Wall以及 三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Chenget Hsiao的干燥根茎。其主要功能为清热，燥湿，泻火，解毒。用于湿热，呕吐吞酸，高热神昏，心烦不寐，心火亢盛；血热，目赤，消渴，牙痛；外治湿疹，湿疮，耳道流脓；酒黄连善清上焦火热，用于目赤，口疮；姜黄连清胃和胃止呕，用于寒热互结，湿热中阻，痞满呕吐；萸黄连用于舒肝和胃止呕。本实验以含量较高的活性成分盐酸小檗碱为评判指标，先对提取溶剂和提

2、取方法进行筛选，然后以溶剂浓度、提取时间和溶剂加量为考察因素，进行用正交设计实验对黄连的提取工艺条件进行优化。结果表明，从黄连中提取盐酸小檗碱，用乙醇作为溶剂要优于甲醇、丙酮，以热回流法提取优于超声提取法。正交设计实验表明最佳提取工艺条件为3g黄连生药粉用150ml的80%乙醇提取3h。 本实验通过对所筛选出的最佳工艺条件进行了验证，表明了筛选出的最佳工艺条件具有一定的可行性，并且具有较高的稳定性，而且所提取的有效成分含量也比其他方法高。关键词：黄连; 盐酸小檗碱; 正交设计; 最佳工艺; 含量Extraction and Assaying of Medicinal ingredients I

3、n Rhizoma CoptidisAbstract:Huanglian is named chuanlian ,chuanhuanglian,jiangzhihuanglian,jianglian,yulian and so on.The Branch of huanglian is Ranunculaceae Coptis chinensis Franch or Coptis teeta Wall and Coptisdeltoidea. The major function of huanglian is clearing heart,eliminating dampness disch

4、arging fire detoxify.Used for muggy,sickness and acid regurgitation hyperpyrexia,coma,fuss andsleepness,heart-fire,hyperactivity;blood-heart,hot-eyes,drinking and urine,toothache;it also used for eczema,auditory meatus suppurate;jiuhuanglian is good at clearing upper-heater fiery ,used for hot-eyes,

5、canker;jianghuanglian is used for clearing stomache and controlling nausea and vomiting,besides,chills and fever interties;yuhuanglian is used for relaxing liver, controlling nausea and vomiting .In this experiment with higher levels of the active ingredient of berberine hydrochloride for evaluation

6、 indicators, First screening the extraction solvent and extraction methods, And then with the dissolvent concentration, dissolvent volume and extraction time for the study of factors to optimized extraction conditions of huanglian by orthogonal test. The results showed that The berberine hydrochlori

7、de extracted fromhuanglian , ethanol is superior to methanol,acetone as a solvent, heat reflux extraction method is superior to ultrasonic extraction method.The optinmm extraction processes of extracting berberine hydrochloride from huanglian was adding 150ml of 80 alcohol，refluxing and extracting 3

8、 hour for 3g.This experiment verify to the optimum conditions,showed that optimum conditions possess the feasibility , certain high stability, and the extraction of active ingredients than any other method.Key words：huanglian ，berberine hydrochloride，orthogonal design，optimization artwork，contents目

9、录第1章 绪 论11.1 黄连的概述11.1.1 黄连的植物形态11.1.2 黄连的种植21.1.3 黄连的采收与加工31.1.4 黄连的鉴别31.2 黄连的本草考证41.3 黄连的化学成分及药理作用研究现状51.3.1 黄连化学成分的研究51.3.2 黄连药理作用的研究61.3.3 黄连的发展前景91.4 提取方法的介绍91.4.1 超声波提取技术91.4.2 加热回流提取法101.5 盐酸小檗碱的介绍101.5.1 盐酸小檗碱的理化性质101.5.2 盐酸小檗碱的应用11第2章 实验材料、仪器与方法122.1 实验试剂122.2 实验仪器设备122.3 实验材料122.4 实验方案122.

10、5 实验方法132.5.1 黄连生药的预处理132.5.2 盐酸小檗碱标准曲线的绘制132.5.3 提取溶剂的选择试验152.5.4 提取方法的选择试验152.5.5 最佳提取工艺条件的选择试验16第3章 结果、分析与验证183.1 不同提取条件下盐酸小檗碱的提取量183.2 筛选出最佳提取工艺条件183.3 对最佳提取工艺条件进行验证20结论与讨论21致 谢23参考文献24第1章 绪 论 黄连为毛莨科植物黄连Coptis chinensis Franch、云连Coptis tecta wall或三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.cheng et Hsiao的干燥根茎1，为清

11、热类药物，性寒且味苦，具有泻火解毒、清热燥湿等功效，始载于神农本草经，列为上品2。 中国药典中黄连及盐酸小檗碱一直都有收载。主要成分是黄连素（berberine,Ber）,又名小檗碱。Ber 属于异喹啉类生物碱，化学结构有离子型和分子型两种，其结构中的季铵氮为整个分子的碱性中心，可以形成盐酸盐和硫酸盐。在临床应用中，黄连素一直作为非处方药用于治疗腹泻，现代研究证实，黄连素具有显著的抗心律失常、抗心力衰竭、抑制血管平滑肌增值、降低胆固醇、改善胰岛素抵抗、抗血小板、抗炎等作用3，故临床应用较多。常用的提取方法有超声提取法、连续回流法、乙醇回流提取法、煎煮法等。黄连中小檗碱在煎煮、浓缩过程中易损失，

12、因此中药复方制剂中的黄连常单独提取。黄连的主要生产产地是四川、湖北，其次是贵州、陕西，主要为栽培，药材名川连、味连、鸡爪黄连。生产在四川石柱、长江南岸、及湖北来凤等地的称南岸味连，产量大；生产在四川巫溪、长江北岸、城口及湖北房县等地的称北岸味连，质量佳。栽培于四川峨嵋与洪雅的为三角叶黄连，药材名雅连、峨嵋连、刺盖连。主产于云南德钦、维西、碧江及西藏察隅等地的为云连，药材名云连。1.1 黄连的概述1.1.1 黄连的植物形态 黄连是多年生草本，根茎有分枝且形如鸡爪4。叶基生，有长柄；叶片卵状三角形，三全裂，中央裂片棱形，羽毛深裂，边缘有锯齿。花葶12条，顶生，聚伞花序有38花。叶中央裂片卵状棱形或

13、长棱形的为云连，其羽状深裂36对。味连多呈簇林分枝,弯曲互抱,形似鸡爪，其部分根茎中段有细瘦的节间,光滑如茎杆,习称 “过桥” 5 。单枝峰常呈圆柱形,长310cm直径310mm。表面呈黄褐色 ,外皮脱落处显红棕色,粗糙,且有不规则结节状隆起及须根或者须根质坚硬,折断面不整齐,可见放射状纹理,皮部显暗棕色,木部呈金黄色,髓部红棕色,有时中空,气徽，味极苦。雅连多呈单技6,圆柱形 ,长约410cm,直径约 310mm。一般具有明显的“过桥”,且较长。质轻而硬， 折断时易从“过桥”处断裂 。 云连多呈单枝，呈圆柱形。表面显黄棕色,少有“过桥”。形细小,长约25cm,直径约24mm。质轻而脆,断面较

14、平坦,呈黄棕色。1.1.2 黄连的种植 黄连主要生产于四川、湖北、湖南、贵州、陕西、云南等地，福建、江西、安徽、广西等省区也有野生或有少量栽培。黄连为多年生草本植物，地下根茎多数分枝，表面粗糙，呈黄褐色，须根多且细长。叶丛生、叶柄长，小叶一般35枚，边缘深且裂成羽状，有锯齿，呈淡绿色且较有光泽。花茎于春末抽出，高约100厘米，顶生圆锥聚伞花序，花小显黄绿色。骨突果成熟开裂，种子较小，黄褐色。黄连喜湿润冷凉，忌高温干燥。 黄连喜生长在高山阴湿冷凉处，透光度为3040，忌强光、高温、干燥及积水处。土层肥厚、排水良好、土壤湿度在5060左右。种子有胚后热阶段，经低温才能够发芽，特别是苗期耐光能力差，

15、苗越大抗光能力则越强。 黄连是否高产优质，其关键在于田间管理，应注意除草追肥，栽后35天，如有缺苗应立刻补之，并要施肥、清粪水助苗成长；发根后一个月需要施硫酸铵7.510千克，1011月间每公顷施腐熟牛马粪3000037500千克，前期主要施氮肥，后期需再撒一层薄熏土，以后的每年春秋需各施肥培土一次，春季每公顷施硫酸铵112150千克，或人粪尿或腐殖质上1500022500千克，冬肥每公顷3750060000千克饼肥过磷酸钙、石灰或者是腐熟牛马粪等。注意冬肥施后都要培熏土，3-4年后少施氮肥或者不施氮肥。以磷肥、钾肥为主，要注意收获前不能追肥。黄连从小苗至收获除草很重要，需见草就除，小苗期用于

16、拔，除小、除净。除草同时要注意培土，先薄后厚逐年增加，第二年1.5厘米厚，第三、四年则增至1.53厘米厚。 在管理中应该注意调整遮荫度，3年内遮荫要经常检查，有缺遮荫者要赶快遮上，遮荫逐年减少，若是架子棚，应在收获当年于种子收后，揭去遮荫材料，使黄连在日光下生长，让养分向根茎转化，使根充实。如做扦插繁殖材料的黄连，至收时才能扯棚，若是林间栽黄连，在栽后第三年开始砍修树枝，遮荫50，第四年减至30，第五年207。1.1.3 黄连的采收与加工 黄连于栽后第五年1011月份收获。要适时科学地采收:摘取嫩稍长 1015cm ,先端具有56 片叶。每一次采收时 ,需要在茎基部留 23节 ,使新发生的嫩茎

17、略呈匍匐状，大概半月后 ,可进行第2 次采收。从第 2 次采收起茎的基部只需要留 1节 ,这样就可以控制植株的高度和株形。南方地区周年均可收获 ,而北方地区温室生产即可周年采收 ,且89 月为采收旺季8。采收时要将整株黄连挖出，抖掉泥沙，再将须根及地上部分一起剪掉，须根及叶分别要晒干，供兽使用。根状茎则单独烘干，炕时火力要均匀，一开始火力不宜太强，应慢慢加大，一般根状茎易折断，待断面呈甘草色时即可出炕，趁热放入槽笼内，推撞掉残存泥沙、须根以及叶柄即可得成品。1.1.4 黄连的鉴别1. 分显微特征和粉末特征介绍 味连根茎横切面：鳞叶组织为数层类圆形的薄壁细胞,直径34-65um,木栓细胞4-8列

18、 ,细胞呈扁平状,排列整齐 ,切向长为45-62um,径向宽为 16-30um , 皮层宽广,有时可见叶迹维管束和根迹维管束；皮层薄壁细胞呈类圆形或类椭圆形, ,内侧细胞较小，外侧细胞较大，皮层中石细胞单个散在或数个成群,显黄色,类圆形、类方形、卵形或肾形,长45-75um,宽 30-46um ,壁厚且多数具层纹, 胞腔小，孔沟明显,韧皮部外侧纤维成束。有的纤维束伴有石细胞,均呈黄色,纤维束大小不等,有的每束只有几个纤维,多的则达数十至上百个纤维,单个纤维呈类多角形类圆形, 直径 15-28um。壁较厚,微木化,胞腔较小，维管束为外韧开放型,呈断续的环状排列,束间形成层不明显；木质部由导管、木

19、纤维和木薄壁细胞组成,壁厚薄不一, 导管口径小,横切面观察,导管、木纤维和木薄壁细胞不易区分；韧皮部由筛管群和薄壁细胞组成,筛管细胞较小,类圆形、类方形或长方形；射线宽窄不一,细胞呈 3-57列,细胞径向延长,排列整齐且壁薄；形成层细胞扁平，切向延长,排列整齐；中央髓部无石细胞群,均为薄壁细胞,髓部薄壁细胞类圆形,直径28-46um ,整个组织的薄壁细胞中均含淀粉粒且较小9。 粉末特征：呈棕黄色。石细胞鲜黄色，类方形、类圆形、类多角形或稍有延长，直径2564m，壁厚928m。韧皮纤维鲜黄色，纺锤形或长梭形，直径2540m，壁较厚，纹孔较稀。木纤维众多，呈鲜黄色，直径1013m，壁具裂隙状纹孔。

20、导管主要为纹孔导管，也有少数为具缘纹孔、螺纹或网纹导管，直径719m。淀粉粒长圆形、类球形或卵形、肾形，直径110m ，复粒少数由24个分粒复合而成。鳞叶表皮细胞黄绿色或黄棕色，类长方形，壁微波状弯曲。此外，有木栓组织、木薄壁细胞、管胞和细小草酸钙方晶等。2. 理化鉴别 (1) 取黄连粉末约1g，加乙醇10ml，加热至沸腾，放冷，滤过。取滤液56 滴，加稀盐酸1ml 与含氯石灰少量，即显樱红色；另取滤液56 滴，加5 没食子酸乙醇溶液 23 滴，蒸干，趁热加硫酸数滴，即显深绿色。 (2) 取黄连粉末50mg，加甲醇5ml ，加热回流15分钟，滤过，滤液定容至5ml,作为供试品溶液。另取黄连对照

21、药材，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成0.5mg/ml 的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法，吸取上述的三种溶液各1l，分别点于同一硅胶薄层板上，并以苯醋酸乙酯异丙醇-甲醇水(6:3:1.5:1.5:0.3) 作为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，然后置紫外光灯(365nm) 下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显同样的黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显同样的一个黄色荧光斑点10。1.2 黄连的本草考证 黄连始载于神农本草经，列为上品。本草纲目载：“今虽吴、蜀皆有，惟以雅州、眉州者为良；药物之兴废不同如此；大抵有二种：一种根粗无

22、毛有珠，如鹰鸡爪形而坚实，色深黄；一种无珠多毛而中虚，黄色稍淡；各有所宜。”名医别录载：“黄连生巫阳（今四川省巫山县）川谷及蜀郡（今四川省雅安境内）、太山；二月、八月采。”可见自古以来即以四川为主要产地。新修本草载：“蜀道者粗大节平，味极浓苦，疗渴为最；江东者节如连珠，疗痢大善；今澧州（今湖南澧县）者更胜。”据产地、药物形状及性味来看，本草纲目所载前一种即今之“味连”，原植物为黄连Coptis chinensis Franch.；后一种即今之“雅连”，原植物为三角叶黄连Cdeltoidea CYCheng et Hsiao；而新修本草所云产江东，节如连珠者即华东一带所产的“土黄连”，其原植物为

23、短萼黄连Cchinensis Franch. varbrevisepala WTWang et Hsiao，植物名实图考载：“黄连，今用川产，其江西山中所产者，谓之土黄连。” 目前主要产地为湖北省利川市以及重庆市石柱县11。1.3 黄连的化学成分及药理作用研究现状 自上个世纪国内外学者对黄连进行了一系列的研究，对黄连化学成分和药理研究有了较完整的认识。其中盐酸小檗碱对心血管系统、血液系统有显著作用，还具有抗炎、抗癌等疗效，并且在很多医药领域已开始投产用于临床。至今，中外学者已在前人研究的基础上就黄连的化学成分和药理临床等方面的研究做了进一步的补充，尤其随着HPLC、MS及联用技术等的普及及发展

24、，取得了一些新的研究结果12。1.3.1 黄连化学成分的研究 黄连主要含小檗碱（berberine）,含量为5.2%7.69%,还含黄连碱（coptistine）、甲级黄连碱（worenine）、掌叶防己碱（palmatine）、药根碱（jatrorrhizine）、表小檗碱（epi-berberine）、gronlandicine和5-羟基小檗碱（berberastine）等，由于他们有相似结构，常统称黄连生物碱。1.小檗碱（berberine） 与羟胺反应生成衍生物，说明分子中有活性醛基，称为醛式小檗碱。如果在水溶性的季铵式游离小檗碱水溶液中加入过量的碱，则生成游离小檗碱的沉淀，称为醇式小

25、檗碱。异名为黄连素。分子式C20H18NO4+,相对分子质量为336.37。从水或稀乙醇中结晶所得的小檗碱为黄色针状结晶。盐酸小檗碱为黄色小针状结晶。羟基化合物为黄色针状结晶（乙醚），熔点145oC(分解)。游离小檗碱较易溶于热水，略溶于水、热乙醇，难溶于苯、氯仿、丙酮。盐酸小檗碱微溶于冷水，易溶于热水，几乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。小檗碱和大分子有机酸生成的盐在水中的溶解度都很小。小檗碱有季铵式、醛式、醇式3种能互变的结构式，其中以季铵式最稳定。小檗碱的盐都是季铵盐，于硫酸小檗碱的水溶液总加入计算量的氢氧化钡，生成棕红色强碱性游离小檗碱，易溶于水，难溶于乙醚，称为季铵式小檗碱。如果用过量的氢

26、氧化钠处理小檗碱盐类，则能生成易溶于乙醚的游离小檗碱。2.黄连碱（coptisine） 分子式C19H15NO5,相对分子质量为337.32。黄连碱为浅黄色针状结晶（乙醇），熔点218oC, 溶于碱，微溶于乙醇，极难溶于水。氯化物为橙黄色棱柱状结晶，300oC也不熔。其硫酸盐为黄色结晶，不溶于水及乙醇。3.掌叶防己碱（palmatine） 异名为巴马丁，分子式C21H22NO4+，相对分子质量为352.40。氯化物为黄色针状结晶（水），熔点198201oC(分解)，易溶于热水，略溶于水，微溶于乙醇和氯仿，几乎不溶于乙醚。经氯仿生成延胡索乙素。硝酸盐为淡黄色针状结晶（甲醇），熔点248oC（分解

27、）。碘化物，熔点240oC（分解）。4.其他成分 木兰碱（magnoline）、2,3,4-三羟基苯丙（2,3,4-trihudroxy-benzenpropanoic acid）、3-羧基-4羟基苯氧葡萄糖（3-carboxy-4-hudroxy-phenoxyglucoside）、3,4-二羟基苯乙醇葡萄糖苷（3,4-dihudroxy-phenylethyl alcohol glucoside）等13。1.3.2 黄连药理作用的研究 黄连具有清热燥湿，泻火解毒等功效。黄连长于清中焦湿热，用于湿热痞满，呕吐吞酸；用于热盛火炽之高热神昏，心烦不寐，牙痛，消渴，血热，目赤；外治湿疹湿疮，耳道流

28、脓。萸黄连舒肝以及胃不和，用于呕吐吞酸的治疗；酒黄连善清上焦火热，用于目赤，口疮；姜黄连可清胃和胃止呕，用于寒热互结，湿热中阻，痞满呕吐的治疗 14。1.现代药理研究表明，黄连有以下多方面药理作用：(1) 抗炎、解热 盐酸小檗碱对急、慢性炎症均有抑制作用。如小檗碱对二甲苯引起的胶性足跖肿胀、耳肿胀、醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加以及慢性棉球肉芽肿均有明显的抑制作用。小檗碱抗炎作用与其抑制炎症过程的某些环节有关，如黄连和小檗碱在体内外均能增强白细胞的吞噬功能。小檗碱可明显降低炎症组织中中性粒细胞中磷脂酶A2(PLA2)的活性以及前列腺素E2(PGE2)的含量，减少炎性介质的生成。黄连可通过抑

29、制中枢发热介质的生成或释放产生解热作用，如解热黄连注射液对实验性发热就有明显的解热作用，并且能降低脑脊液中的cAMP含量。 (2)抗细菌毒素、抗腹泻 黄连和盐酸小檗碱能够对抗多种病原微生物的毒素，提高机体对细菌内毒素的耐受能力，且能对抗大肠杆菌引起的腹泻。小檗碱能对抗霍乱毒素引起的腹泻，并减轻小肠绒毛的水肿、分泌亢进等炎症反应，降低死亡率。此外，小檗碱对非感染性腹泻也具有对抗作用。 (3) 抗病原体 ： 黄连及小檗碱具有广谱抗菌的作用，对多种细菌、结核杆菌及真菌等都有抑制或杀灭作用。实验表明，黄连及盐酸小檗碱对溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、阴沟杆菌及伤寒杆菌共7种

30、16株致病菌均有抑制作用。黄连及三黄注射液(等量黄连、黄芩、黄柏组成)还具有抗真菌作用，黄连煎液及盐酸小檗碱在体外及体内均有一定的抗阿米巴作用，盐酸小檗碱对多种流感病毒均有抑制作用。黄连低浓度时抑菌，高浓度杀菌，抗菌作用环节一般是：破坏细菌结构抑制细菌糖代谢（黄连能抑制酵母菌及细菌糖代谢的中间环节丙酮酸的氧化脱羧过程）抑制核酸、蛋白质合成15。(4)镇静催眠 黄连具有中枢抑制作用。黄连碱、小檗碱均为季铵类生物碱，不易透过血脑屏障因而中枢抑制作用较弱；叔胺类生物碱，例如四氢黄连碱、四氢小檗碱因其易透过血脑屏障而使中枢抑制作用增强。 (5)降血糖 黄连煎剂和小檗碱灌服能使正常或高血糖动物的血糖降低

31、，并且有一定的量效关系。研究表明：小檗碱能降低肝脏和膈肌糖原的含量，抑制以丙氨酸为底物的糖原异生作用，升高血中乳酸的含量，且不影响胰岛素分泌和释放，也不影响肝细胞膜胰岛素受体的数目与亲和力，因此推测小檗碱的降血糖作用是通过抑制糖原异生或促进葡萄糖酵解作用产生的。此外，小檗碱可使糖尿病鼠的晶体、肾脏醛糖还原酶活性明显下降，尿蛋白呈下降趋势，肾小球病理变化得到明显改善，说明小檗碱不仅有降血糖作用，而且对糖尿病性并发症也有一定作用16。 (6)抗溃疡 黄连及盐酸小檗碱具有抗实验性胃溃疡的作用。作用机制与其抗幽门螺杆菌和抑制胃酸分泌相关17。(7)抗肿瘤 黄连杀伤鼻咽癌细胞的作用主要表现为细胞毒作用，

32、而盐酸小檗碱抗胃癌的作用与促进癌细胞分化有关。小檗碱还可以通过抑制癌细胞呼吸作用，阻碍癌细胞嘌呤及核酸的合成，干扰癌细胞代谢等途径从而产生抗癌作用。 2其他药理作用 (1)对心血管系统的影响 正性肌力作用：在一定剂量范围内，小檗碱对动物离体心脏及整体心脏都能显示出正性肌力作用。小檗碱有抗心力衰竭作用，对戊巴比妥钠引起衰竭的豚鼠心脏，可使左心室内压变化以最大速率上升。静脉注射和口服小檗碱均可使犬心衰模型心排血量增加，左室舒张末压下降，心率减慢。其正性肌力作用机理与增加心肌细胞内的Ca2+浓度有关。 负性频率作用：小檗碱静脉注射，使清醒大鼠心率先加快后慢慢持久地减慢，对肾上腺素引起的心率加快有非竞

33、争性的拮抗作用。 抗心律失常：小檗碱具有显著的抗心律失常作用，对多种原因诱发的实验性心律失常有对抗作用，能防治CaCl2、肾上腺素、哇巴因、乌头碱、电刺激以及冠状动脉结扎所引起的室性心律失常，并有明显量效关系。其抗心律失常机制可能与降低心肌自律性、延长动作电位时程及有效不应期，消除折返冲动有关。小檗碱能选择性地对抗哇巴因诱发的动物室性心律失常，其抗心律失常作用可能与抑制心肌Na+内流作用有关。大剂量小檗碱可显示Ca2+通道阻滞作用。 降压：小檗碱有明显的降压作用，降压同时伴有后负荷和心率下降；左室心肌收缩力加强，其降压作用主要是通过竞争性阻断n-肾上腺素受体、减缓心率及降低外周血管阻力所致。

34、抗心肌缺血：小檗碱对缺血性心肌具有保护作用。体外实验发现，小剂量的盐酸小檗碱对缺氧性损害心肌细胞的搏动、乳酸脱氢酶的释放、细胞超微结构和细胞存活率均有明显的保护作用，而大剂量盐酸小檗碱则可加重缺氧引起的心肌细胞损害。 (2) 抗血小板聚集小檗碱对多种诱导剂如花生四烯酸、ADP及钙离子载体诱发的血小板聚集和ATP释放均有不同程度抑制作用。小檗碱抗血小板聚集作用与Ca2+拮抗作用以及升高血小板内cAMP水平有关。 (3) 抗脑缺血小檗碱能扩张麻醉小鼠脑膜血管，从而增加其局部血流量。对缺血再灌引起的脑组织损伤具有明显的保护作用，提高动物缺血再灌流早期海马CAl区神经元内线粒体、高尔基体以及粗面内质网

35、对缺血的耐受性，减轻缺血再灌流晚期海马CAl区迟发性神经元的死亡程度，降低继发性癫痫的发生率。小檗碱抗脑缺血作用与抑制神经细胞内游离钙浓度(Ca2+)的异常升高以及抗氧自由基作用有关。 综上所述，黄连清热燥湿、泻火解毒功效与其抗内毒素、抗病原体、抗炎、解热、镇静催眠、降血糖、抗溃疡、抗肿瘤等药理作用相关。黄连还具有显著的心血管药理活性，以及抗血小板聚集、抗脑缺血等作用18。1.3.3 黄连的发展前景目前，黄连的应用主要是集中在清热去火，解毒等方面，在其他方面临床应用尚不广泛，值得进一步挖掘。如虽然经研究发现黄连具有抗肿瘤的作用，但至今黄连还未作为抗肿瘤药物应用于临床，非常具有开发前景。1.4

36、提取方法的介绍1.4.1 超声波提取技术超声波是一种机械波，指频率为20千赫50兆赫左右的电磁波，它需要能量载体介质来进行传播。超声波萃取的特点是，适用于中药材有效成份的萃取，是中药制药彻底改变传统的水煮醇沉萃取方法的新方法、新工艺。 超声波在传递过程中存在着的正负压强交变周期，在正相位时，对介质分子产生挤压，增加介质密度；负相位时，介质分子稀疏、离散，减小介质密度。这就是说，超声波是在溶剂和样品之间产生声波空化作用，导致溶液内气泡的形成、增长和爆破压缩，从而使固体样品分散，增大样品与萃取溶剂之间的接触面积，提高目标物从固相转移到液相的传质速率，而并不能使样品内的分子产生极化。在工业应用方面，

37、利用超声波进行清洗、干燥、杀菌、雾化及无损检测等，已经成为一种非常成熟且有广泛应用的技术。超声波技术能耗低、效率高、不破坏有效成分,近年来在天然产物提取方面得到了广泛应用。1.4.2 加热回流提取法回流提取法是用乙醇等易挥发的有机溶剂提取原料中有效成分，将浸出液加热蒸馏，其中挥发性溶剂馏出后又被冷却，重复流回浸出容器中浸提原料，这样周而复始，直至有效成分回流提取完全的方法。回流提取法本质上是浸渍法，可分为热回流提取和循环提取，其工艺特点是溶剂循环使用，浸取更加完全。缺点是由于加热时间长，所以不适用于挥发性性物料和热敏物料的提取。回流法提取液在蒸发锅中受热时间比较长，因此不适用于受热易破坏的原料

38、成分的浸出。从中药中提取活性成分时，由于存在多种成分之间的相互增溶作用，情况比较复杂，因此很难用固定的模式进行提取，通常须根据提取要求、目的成分及杂质的性质差别以及溶剂的溶解能力来确定使用何种溶剂进行提取。1.5盐酸小檗碱的介绍通用名称：小檗碱 英文名称：Berberine 中文别名：黄连素、盐酸黄连素、小蘖碱、小檗硷、盐酸小蘖碱、盐酸小檗碱英文别名：Berberine Hydrochloride、Berberine Sulphate 对大肠杆菌、痢疾杆菌、金葡菌、肺炎双球菌、伤寒杆菌、链球菌及阿米巴原虫均有抑制作用。临床上主要用于肠道感染及菌痢等。近来经研究还发现本品有抗心律失常的作用。 小

39、檗碱有较强的体内外抗肿瘤活性并能诱导B16细胞分化，同盐酸阿糖胞苷在体外具有协同作用。1.5.1 盐酸小檗碱的理化性质 盐酸小檗碱是一种异喹啉生物碱。分子式C20H18NO4+。亦称黄连素 ，存在于小檗科等4科10属的许多植物中。小檗碱从乙醚中可析出黄色的针状晶体。熔点为145。溶于水，难溶于苯、乙醚和氯仿。小檗碱为一种季铵生物碱，它的盐类在水中的溶解度都比较小，例如硫酸盐为130，盐酸盐为1500。小檗碱从水或稀乙醇中析出的晶体带有5.5分子的结晶水；若从氯仿、丙酮或苯中结晶，也带有相应的结晶溶剂分子。小檗碱用不同的碱处理，可得到季铵式、醛式和醇式三种不同形式的小檗碱，其中以季铵式最稳定19

40、。1.5.2 盐酸小檗碱的应用 黄连素治疗非依赖型糖尿病已有大量报道, 经临床验证,黄连素降血糖有效率达90%以上。中国医学科学院药物研究所的研究证实,黄连素兼有磺酸脲类和胍类降糖药的特点,并且不影响胰岛素受体数目和亲和力。 降压作用：这是由于黄连素中的小蘖碱可直接作用于血管平滑肌，具有舒张血管作用。 治疗消化性溃疡和胃炎：黄连素具有消炎、制酸，抑制和杀灭幽门螺杆菌的作用，治疗消化性溃疡与庆大霉素相同。 防治高血脂症：研究表明,黄连素对降低血清胆固醇、脂蛋白及甘油三脂也有良好作用, 抗心律失常：科研成果显示：黄连素能增加冠状动脉血流量，改善心肌功能，从而降低因冠状动脉梗塞所引起的心律失常的发病

41、率。 防治短暂性脑缺血发作：黄连素对防治短暂性脑缺血发作亦有良好效果。 抑制血小板凝集：黄连素如同阿司匹林可抑制血小板凝集，并且作用更为广泛，是比阿司匹林更加有效的药物。 防癌作用：黄连素具有抑制肿瘤细胞DNA、RNA蛋白质和脂肪合成的作用，有一定的防癌作用20。第2章 实验材料、仪器与方法 2.1 实验试剂甲醇 分析纯 成都市科龙化工试剂厂无水乙醇 分析纯 成都市科龙化工试剂厂蒸馏水 分析纯 成都市科龙化工试剂厂丙酮 分析纯 成都市科龙化工试剂厂2.2 实验仪器设备FZ102型植物粉碎机 天津市泰斯特仪器有限公司产品；Ph030(A)干燥/培养二用箱 上海齐欣科学仪器有限公司；YP202N电

42、子天平 上海精密科学仪器有限公司；ZDHW电子调温电热套 北京中兴伟业仪器有限公司； HHW21电子恒温水箱 北京中兴伟业仪器有限公司；WZD1B恒温水浴锅 上海申顺生物科技有限公司；Unico 2100型紫外可见分光光度计 龙尼柯(上海)仪器有限公司；2.3 实验材料毛莨科植物黄连Coptis chinensis Franch、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.cheng et Hsiao或云连Coptis tecta wall的干燥根茎。2.4 实验方案21黄连生药黄连生药干燥粉碎，过60目筛黄连粉末乙醇提取过滤残渣乙醇液冷却 过滤 沉淀滤液少量乙醇洗涤洗涤液合并液定容吸

43、光度测定计算盐酸小檗碱含量2.5 实验方法2.5.1 黄连根茎的预处理 选取外观颜色鲜艳的黄连根茎，于恒温干燥箱中60烘干至恒重。粉碎后过60目筛备用。2.5.2 盐酸小檗碱标准曲线的绘制精密称取阿魏酸标准品4mg，置于100mL容量瓶中，用80乙醇溶解并定容至刻度，摇匀。再分别用移液管精密量取上述溶液1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL、4.0ml分别置于25mL的容量瓶中，也用80乙醇定容至刻度，摇匀。分别配成浓度为0.0016mg/mL、0.0024mg/mL、0.0032mg/mL、0.004mg/mL、0.0048mg/mL、0.0056mg/mL、

44、0.0064mg/mL的盐酸小檗碱溶液。对上述所配制的溶液在323nm波长处测定其紫外吸光度，以80的乙醇作为空白对照。测定结果见表2-1：表2-1 盐酸小檗碱标准品吸收度浓 度mg/mL 吸 光 度 平 均 值 1 2 30.0016 0.163 0.165 0.165 0.1640.0024 0.201 0.203 0.204 0.2030.0032 0.242 0.245 0.249 0.2450.004 0.291 0.295 0.294 0.2930.0048 0.342 0.344 0.346 0.3440.0056 0.372 0.377 0.377 0.3750.0064 0.417 0.418 0.417 0.417 根据测定的结果，以吸光度对浓度进行回归分析，绘出标准曲线(见图2-1)。得直线回归方程y=53.39x+0.078,R2=0.997,R=0.9985。图2-1 盐酸小檗碱的标准曲线2.5.3 提取溶剂的选择试验22取预处理后的黄连生药粉3.000g，精密称定，分别加入不同溶剂50mL回流提取60min，滤过，定容至50mL。然后采用紫外分光光度法测定其吸光度并计算出提取量(见表2-2)。根据结果表明：采用甲醇、乙醇作溶剂提取量较高。考虑生产中生产成本的问题，选择乙醇作为黄连中盐酸小檗碱的提取溶剂。表2-2 提