棉田钾细菌促进棉花生长的机制 生物技术毕业论文.doc

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1、 2011 届毕业生毕业论文棉田钾细菌促进棉花生长的机制学生姓名 孙少清 学 号 1091207043 所属学院 生命科学学院 专 业 生物技术 班 级 2011 指导教师 龚明福 日 期 2011.5.28 塔里木大学教务处制目 录摘要1关键词1ABSTRACT:1KEY WORDS1引言21.材料与方法21.1材料21.1.1 样品21.1.2 主要仪器与设备21.1.3 试剂与溶液31.2 方法31.2.1对钾细菌进行重筛31.2.2测定固氮酶活性31.2.3 测定产ACC酶活性：41.2.4测定产植物激素IAA的能力：41.2.5.解钾的能力测定：52 结果与分析52.1对钾细菌进行重

2、筛52.2固氮酶活性62.3测定产ACC酶活性：62.3.1标准曲线：62.3.2 ACC脱氨酶活性72.4测定产植物激素IAA的能力：82.4.1标准曲线：82.4.2测得的发酵液中IAA的浓度92.5解钾能力测定：93结论与讨论：103.1.固氮酶活性：103.2.ACC酶活性：103.3.产IAA能力：103.4.解甲能力：10参考文献：10致 谢12棉田钾细菌促进棉花生长的机制孙少清（塔里木大学 生命科学学院，塔里木盆地生物资源保护利用新疆生产建设兵团重点实验室，新疆阿拉尔 843300）摘要 对分离自不同连作棉田土中的79株硅酸盐细菌（Silicate bacteria）通过用硅酸盐

3、分离培养基重新筛选得到的20株钾细菌进行了4项生理指标的测定，包括固氮酶活性、1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶活性、产植物激素（IAA）的能力以及解钾能力等。结果表明：这20株菌中（1）菌株K19、K44、K27、K43、K22、席10-6、J7、K35、席K3等9株菌具有较强的固氮酶活性；(2)菌株席10-10产生ACC脱氨酶的能力最强，为3.157 molmin ；(3)菌株红袋K10、K35、J7、K37产IAA能力较强；(4) K19、K27、K37、K43、K45这5株菌的发酵液中速效钾含量分别比对照多出48.489%、168.152%、38.942%、38.942%和83.

4、191%。关键词 棉田钾细菌；促进；棉花；生长机制The Silicate bacteria of cotton field promotion cotton grows mechanismSun Shaoqing（Tarim University, College of Life Science, Protection and utilization of biological resources in the Tarim Basin of Xinjiang Production and Construction Corps Laboratory, Alar, Xinjiang 843300

5、）Abstract: To separated 79 bacillus mucilaginosus through uses 20 potassium bacteria from the different continuous cropping cotton field earth in which the silicate separation culture medium screened obtains to carry on 4 physiological target determination, including the nitrogen fixation enzyme act

6、ivity, ACC deaminase activeness, produced IAA the ability as well as solution potassium ability.The result indicated that,In these 20 fungi (1) strain K19, K44, K27, K43, K22, X10-6, J7, K35, the XK3 altogether 9 fungi have the strong nitrogen fixation enzyme activity; (2) strain X10-10 has the ACC

7、deaminase ability to be strongest, is 3.157 mol/min; (3) strain HDK10, K35, J7, K37 produce the IAA ability to be strong; (4) K19, K27, K37, K43, in the K45 these 5 fungus fermentation fluid the fast-acting potassium content compares separately are more than 48.489%, 168.152%, 38.942%, 38.942% and 8

8、3.191%.Key words： Silicate bacteria of cotton ；Promotion；Cotton；Grows mechanism引言农作物生产不仅要求高产、稳产，而且要求品质优良。长期以来，为了确保农产品的高产丰收，人们大量使用化学肥料和农药，使得生态环境每况愈下，十分不利于农业的可持续发展。微生物肥料由于具有增加土壤生物多样性、改善农产品品质、能够自我更新增殖和永续利用的特性，其发展始终为人们所关注。微生物肥料是指应用于植物或土壤环境中有生物活性，起肥料效应的、或以肥料方法施用的，以微生物活性生物体或其代谢产物为主要作用因子的生物制剂或肥料制品1。微生物肥料种类

9、繁多，按照微生物的作用机理可分为根瘤菌肥料、自生固氮菌肥料、解磷细菌肥料、解钾细菌肥料、抗生菌肥料和复合微生物肥料2。但是不论如何分类，钾细菌都是一种不可或缺的成分。早在1912年，K. Passik就发现了一种芽抱杆菌，用它可以分解正长石等硅酸盐矿物和磷灰石，1930年，原苏联学者亚历山大洛夫从土壤中分离出一种细菌，能分解正长石和磷灰石而释放出磷钾，称之为硅酸欲细菌，在我国又被称为钾细菌。硅酸欲细菌是化能异养细菌，能利用葡萄糖、淀粉等多种碳源，在无氮培养基上生长很好，表明它能固氮，每利用1g糖仅固定1. 3mg氮，其利用有机氮能力差。硅酸盐细菌是兼性好氧菌，生长适宜温度为25 -28 ,最适

10、pH值为7. 0-7. 2，低于5. 0或高于8. 0则受抑制。3解钾细菌多是硅酸盐细菌，它能分解硅酸盐类矿物并释放出钾等元素供植物利用，同时它也有固氮、解磷功能。硅酸盐细菌是土壤中一类能分解硅酸盐类矿物，破坏其晶格结构，使矿物钾转化成有效钾释放出来供植物生长的细菌4。它不仅能溶磷解钾，亦有固氮的作用5。目前发现的解钾细菌种类主要有， 环状芽孢杆菌( Bacillus circulans) 6,7、胶质芽孢杆菌( B.mucilaginosus)8 和土壤芽孢杆菌( B.edaphicus)9 三个种的菌株。由于硅酸盐细菌的独特作用，已广泛应用于采矿、冶金、微生物肥料、饲料工业上10。我国在硅

11、酸盐细菌的生物学功能方面已进行了大量的工作，尤其是在硅酸盐细菌作为生物肥料方面，但是对我国新疆不同连作棉田硅酸盐细菌的生理生化研究较少，由于这里特殊的地理环境，使硅酸盐细菌的生理生化特性有别于全国其他区域。土壤中的硅酸盐很多，但它不溶于水，无法被植物利用，解钾菌的活化作用，可将其中的钾活化而溶于水，极易被植物吸收。解钾菌可通过自身生命活动产生草酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸等多种有机酸，分解土壤中的含钾矿物，释放出钾和其它矿质元素，供植物吸收利用。需要指出的是，不管是解磷菌还是解钾菌，它们在生命活动过程中都会产生多种植物激素（如吲哚乙酸、生长素、赤霉素和细胞分裂素），促进作物生长。土壤中钾矿物主要

12、以稳定的铝硅酸盐状态存在,不能被作物直接吸收利用。而硅酸盐细菌是土壤中一类特殊的革兰氏阴性芽孢杆菌,能分解岩石矿物,释放难溶性的钾、磷等,改善土壤的供肥能力,满足作物生长发育的需要。11因此,研究如何将这些土壤矿物中的钾释放出来,成为作物能吸收利用的可给态钾,具有理论和实践意义。1.材料与方法1.1材料1.1.1 样品由新疆塔里木盆地生物资源保护利用新疆生产建设兵团重点实验室提供的分离自塔里木盆地不同棉田的79株钾细菌1.1.2 主要仪器与设备(1) LXJ264201 型离心机(北京医疗仪器修理厂)(2) HYA 恒温摇床(中国科学院武汉仪器厂)(3) LDZX-50KB 立式电热压力蒸汽灭

13、菌锅(上海申安医疗器械厂)(4) HG30323 K电热恒温培养箱(杭州汇尔仪器设备有限公司) (5) YXQ. SG41. 280 电热高压蒸汽消毒器(上海华岩仪器设备有限公司)(6) SHIMADZU) 10AVP 高效液相色谱仪(日本岛津公司）(7) HITACHIZ28000 原子吸收分光光度计（河南博金仪器有限公司）（8) SHIMADZU GC - 14B气相色谱仪(日本岛津公司）1.1.3 试剂与溶液1.1.3.1培养基（1）牛肉膏蛋白胨（NA）培养基：牛肉膏 5 g，蛋白胨 5 g，NaCl 5 g，pH=7.2-7.4。（2）硅酸盐细菌分离培养基配方11：蔗糖5.0 g，1%

14、FeCl3 6滴，Na2HPO4 2.0 g，MgSO47H2O 0.5 g，CaCO3 0.1 g，土壤矿石 1.0 g，去离子水1000 mL，琼脂20 g，pH=7.5。土壤矿石：取耕层土加20%HCl（土：HCl=1：10）煮沸30min，蒸馏水洗至无Cl-，磨碎过100目筛。（3）Ashby培养基：葡萄糖 10.0 g，K2HPO4 0.02 g，MgSO4 0.2 g，NaCl 0.2 g，CaCO3 1.0 g，CaSO4 0.1 g， H2O 1000 mL，pH=7.0-7.2。(4)LB液体培养基 :蛋白胨 10 g，酵母膏 5 g，NaCl 10 g H2O 1000 m

15、L，pH=7.4。(5)PDA培养基：马铃薯（去皮） 200 g，葡萄糖 20 g，水 1000 mL 。 将马铃薯去皮切成小块，与加水1000 mL，煮沸30 min，用双层纱布过滤，取滤液加糖，并加水补充至1000 mL，自然pH。（6）Fa培养液：蔗糖10.0 g，ACC 1.0 g，无机盐溶液1000 mL（注：无机盐溶液：KH2PO4 10%,MgSO47H2O 0.05%,CaCl22H2O 0.013%，FeSO47H2O 0.0013%，pH7.0）。（7）DFa培养液：不加ACC，其它同Fa培养液。（8） 解钾发酵液12：蔗糖 10 g；MgSO47H2O 0.5g；(NH4

16、)2SO4 0.2g； NaCl 0.1g；CaCO3 0.1g； 玻璃粉 5.0g；pH7.27.5；蒸馏水 1.0 L。 1.1.3.2所用的主要溶液(1) 0. 5% 溴麝香酚兰(BTB)溶液(2) 0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液(pH:8.5及7.6)(3) 0.1%2,4-二硝基苯胼溶液(4) 100 mmol/L -丁酮酸溶液（5）比色液PC：PC：FeCl3 ：7.9 molL H2SO4=12 g： 1 LS2：FeCl3 ：10.8 molL H2SO4=4.5g：l L1.2 方法1.2.1对钾细菌进行重筛将已有的79株钾细菌接种至硅酸盐分离培养基平板上，选取其

17、中生长活力旺盛的菌株进行其它各项指标测定。1.2.1.1菌株活化制备液体NA培养基分装于试管中（每支试管5 mL）灭菌后用移液器从保存菌种的甘油管中分别加入试管中，于恒温摇床上 28、150 r/min条件下培养24 h。将菌液在硅酸盐分离培养基上进行划线，观察其生长活力。选取其中生长活力旺盛的菌株进行固氮酶活性、产ACC脱氨酶活性、产IAA的能力、解钾能力以及对棉花枯黄萎病原菌的抗病性的测定。1.2.2测定固氮酶活性乙炔还原法:各试验按设计要求培养48 h后，将透气的硅胶塞换成不透气的橡胶塞，从瓶内抽出2 mL气体，再注入2 mL乙炔，使瓶内乙炔浓度达10%左右，继续培养48 h后,测定乙烯

18、生成量。将分离出来的钾细菌分别接种于装有2 ml半固体Ashby培养基的血清小瓶中(每种培养基2个重复) ，在28-30下培养24-48 h后，将血清小瓶盖在无菌条件下换成橡胶塞,用无菌注射器抽出10%的气体，然后给每瓶注入2 mL C2H2，再置培养箱中培养24-48 h。从各培养瓶中取气样10 L ，注入气相色谱仪 (GC)中，测定C2H2, C2H4的生成情况。从气相色谱仪显示屏的C2H2，C2H4峰值判断有无C2H4的产生 13。色谱条件用日本岛津公司的GC-14B气相色谱仪测定乙烯生成量。色谱条件为玻璃柱长2 m ，内径0. 4 cm ，填充柱GDX403，柱温50，检测器温度200

19、，进样器温度110；气体流量为H2 72 mL/min；N2 43 mL/min；空气50 mL/min，检测器为火焰离子发生器 (FID )。外标法计算测定结果，以nmol C2H4/mL菌液表示固氮酶活性。根据下列公式计算固氮酶活性的大小14。 ARA（mmol/h）=(样品C2H4 峰面积CC2H4标准C2H4 进量样品气体总体积)/(标准C2H4 峰面积培养时间样品进样量) CC2H2 = n/V = P(/RT) = 90. 005 kPa/(8. 314 kPaL-1mol - 1(273. 15 + 27) k) = 0. 036 molL- 11.2.3 测定产ACC酶活性：1

20、.2.3.1.标准曲线的制定用0.1 mol/L PH 8.5 Tris-HCI配制100 mmol/L -丁酮酸，4保存，用前母液稀释至10 mmol/L,取出200 L -丁酮酸稀释(0.1-1.5 mol/L)，分别加入300 L 2% 2,4-二硝基苯肼，混匀后于30 温育30 min，加入2 mL 2 mol/L NaOH显色，在540 nm处测定光吸收值，以-丁酮酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标制成标准曲线15.1.2.3.2.细胞悬液制备菌株在DFa培养基中培养48 h后，4，8 000 r/min离心10 min收集菌体，去上清，加入5 mL 0.1 mol/L Tris-HC

21、l(pH 7.6)，4 ，8 000 r/min离心10 min，弃上清，洗涤两次。用1 mL 0.1 mol/L Tris-HCl(pH 7.6)悬浮。转移到1.5 mL的离心管中，16 000 r/min离心5 min，去上清，用600 L 0.1 mol/L Tris-HCl(pH 8.5)重悬浮，加入30 L的甲苯，最高速振荡30s15.1.2.3.3.酶活测定取200 L细胞悬液于1.5 mL离心管中，加入20 L 0.5 mol/L ACC，振荡混匀。于30保温15 min后，加入l mL 0.56 mol/L HCl，振荡混匀，室温16 000 r/min离心5 min。取l m

22、L上清液，加入800 L 0.56 mol/L HCl，混匀后，加入300 L 2,4-二硝基苯肼，混匀后于30保温30 min。然后用2.0 mL 2 mol/L NaOH显色，于540 nm处测定光吸收值。通过标准曲线计算出-丁酮酸的浓度15。1.2.4测定产植物激素IAA的能力：采用 Salkowski比色法16测定分离物产生植物生长激素类物质 IAA的能力。比色液的组成S2：FeCl3 4.5 g，10.8 mol/L H2S04 l L，测定范围 5-200 g/mL，一般超过 100 g/mL就应该稀释 ；PC：FeC13 12 g，7.9 mol/L H2SO4 1 L，测定范围

23、 0.3-20 g/mL。标准曲线采用纯的IAA制作16。菌悬液的制备，在盛有 10 mL LB液体培养基的试管中，接种供试菌株。28下，置于轨道摇床上培养2-3 d。用分光光度计测定菌株悬浮液的OD值，并用无菌水调节OD值为0.6(波长600 nm)。在液体发酵48 h分别取发酵液，在10 000 r/min离心10 min，取上清液3 mL再加比色液3 mL进行显色，在黑暗中静止30 min，取出立即用TU-1810型分光光度计测定，波长是530 nm17。1.2.4.1.标准曲线的制作配制2组3-IAA 溶液，浓度依次为2. 5, 5. 0,7. 5, 10. 0, 12. 5,15.0

24、,17.5 mg/L和25, 50, 75, 100, 125, 150, 175 mg / L，分别取上述IAA溶液4 mL，在第1组中加入PC 比色液4 mL，第2 组中加入S2 比色液4 mL 在黑暗中静置0.5 h，取出立即用分光光度计测定OD530值，以加了比色液的蒸馏水调零，重复3 次，获得数据制作标准曲线。1.2.4.2.IAA定量测定菌悬液的制备，在盛有10 mL LB 液体培养基的试管中，接种供试菌株，28 下，置于轨道摇床上培养2- 3 d。用分光光度计测定菌株悬浮液的OD值，并用无菌水调节OD值为0.6(波长600 nm) 。取发酵液，在10 000 r/ min 离心1

25、0 min，取上清液1 mL 再加比色液1 mL 进行显色，并根据PC 比色液和S2 比色液的测定范围对结果进行选择，在黑暗中静止30 min，取出立即用TU-1810紫外可见分光光度计测定，波长是530 nm。1.2.5.解钾的能力测定：挑取一环活化好的斜面菌种接入50 mL种子培养液中，150 r/min摇床,适宜温度下培养到对数期，菌体含量不少于2108 cfu/mL。500 mL三角瓶加入解钾发酵液95 mL，高压灭菌备用。接入种子液5 mL，同时做加入等量灭活种子液的发酵液为对照，在28、150 r/min条件下培养72 h11。发酵液的处理，将全部发酵液转入蒸发皿中，在水浴锅中浓缩

26、至10 mL左右，加2.0 mL H2O2溶液，继续蒸发，并不断搅动，反复加20% H2O2溶液几次至粘性物质完全消化。3 500 r/min离心10 min，将上清液收集在50 mL容量瓶中，用蒸馏水定容,测定溶液中速效钾。上清液中钾的测定取上清液离心沉淀多糖、菌体蛋白和未被溶解的土壤矿石18。用火焰光度法测定钾，解钾量为扣除不接种对照的值11。2 结果与分析2.1对钾细菌进行重筛图1 硅酸盐培养基分离筛选到的钾细菌图中 K39为在硅酸盐分离培养基上生长活性最差的一种菌种，可将其视为空白对照（右）左边为筛选的到的生长活性较强的菌种经过重筛得到了20株生长良好的菌株作为进一步测定的对象。部分菌

27、株的生长状况如图1通过筛选得到了K19、K20、K22、K25、K27、K35、K37、K43、K44、K45、席K3、席K4、席K5、席10-6、席10-9、席10-10、J7、红袋K10、红袋K16、红袋11等20株钾细菌。2.2固氮酶活性 将气相色谱仪所得数据换算为固氮酶活性，再用用DPS统计分析软件进行单因素方差分析和LSD法多重比较检验得到表1。表1： 固氮菌酶活性的测定菌株编号均值标准误差K191.9710.137aAK44 1.5810.024abABK27 1.5390.475abABCK43 1.5190.292abABCDK22 1.4200.224abcABCDE席10-

28、6 1.4090.190abcABCDEJ7 1.3770.472abcABCDEK35 1.2620.120abcdeABCDEF席K3 1.2500.160bcdeABCDEFCK 1.0620.144bcdefABCDEF席10-9 0.9600.372bcdefgBCDEFK25 0.9530.046bcdefgBCDEFK37 0.9470.027bcdefgBCDEF席10-10 0.8950.176bcdefgBCDEFK45 0.7130.518cdefgBCDEFK20 0.6080.113defgCDEF红袋K10 0.5560.277efgDEF席K4 0.5550.07

29、0efgDEF红袋11 0.5010.067fgEF席K5 0.4630.159fgEF红袋K160.3070.016gF注：小写字母完全不同表示在5%水平显著；大写字母完全不同表示在1%水平不同。（1）对样本整体进行单因素方差分析结果显示其P值0.01，样本差异极显著这表明供试菌株的固氮酶活性差异极显著。（2）表中席10-9、K25、K37、席10-10、K45、K20、红袋K10、席K4、红袋11、席K5、红袋K16等11株菌的ARA值小于对照说明其不具有固氮酶活性。（3）菌株K19、K44、K27、K43、K22、席10-6、J7、K35、席K3等9株菌具有较强的固氮酶活性。其中K19固

30、氮酶活性最高，且与其他菌株差异极显著。2.3测定产ACC酶活性：2.3.1标准曲线：测得-丁酮酸吸光度标准曲线如图2：图2：-丁酮酸吸光度标准曲线2.3.2 ACC脱氨酶活性将在TU-1810紫外可见分光光度计上策得数据换算为ACC脱氨酶活性，再用用DPS统计分析软件进行单因素方差分析和LSD法多重比较检验得到表2。表2：ACC脱氨酶活性菌株编号平均值标准误差席10-103.1570.008aAJ70.8440.035bB席K30.6400.018bcBCK440.5950.052bcdBCD席10-90.5350.036bcdeBCDE席K40.5170.020cdeBCDE席K50.484

31、0.027cdefBCDE席10-60.4200.009cdefgBCDEK220.3800.004cdefgCDEK200.3780.021cdefgCDE红袋110.3450.142cdefgCDE红袋K160.3260.005cdefgCDE红袋K100.3040.095defgCDEK270.3030.036defgCDEK370.2840.091defgCDEK430.2780.277defgCDEK250.2210.332efgCDEK350.1970.029fgDEK190.1810.002fgDEK450.1100.020gE注：小写字母完全不同表示差异显著；大写字母完全不同表

32、示差异极显著。（1）对样本整体进行单因素方差分析结果显示其P值0.01，样本差异极显著这表明供试菌株的产ACC脱氨酶活性差异极显著。（2）菌株席10-10产生ACC脱氨酶的能力最强，且与其他供试菌株差异极显著。2.4测定产植物激素IAA的能力：2.4.1标准曲线：测得IAA在不同显色液下的吸光度曲线如图（3、4）： 图3： 显色液为PC时的IAA吸光度标准曲线PC：PC：FeCl3 ：7.9 molL H2SO4=12 g： 1 L 图4： 显色液为S2时的IAA吸光度标准曲线S2：FeCl3 ：10.8 molL H2SO4=4.5g：l L2.4.2测得的发酵液中IAA的浓度将在TU-18

33、10紫外可见分光光度计上策得数据换算为浓度，再用用DPS统计分析软件进行单因素方差分析和LSD法多重比较检验得到表3。表3： IAA浓度菌株编号均值标准误差红袋K107.8590.353aAK355.3590.326bBJ73.8880.147cCK373.8000.059cCK19 2.6530.029dCDK22 2.5940.294dCD红袋K16 1.9180.206deDEK25 1.5941.206efDEFK27 1.5360.030efDEF红袋11 1.1240.030efgEFGK20 0.9480.326fghEFG席10-10 0.8300.206fghEFG席K3 0

34、.6830.118fghEFGK43 0.4470.059ghFG席K4 0.1830.089ghG席K5 0.1830.089ghGK44 0.1830.030ghGK450.1530.000hG席10-90.0000.000hG席10-60.0000.000hG注：小写字母完全不同表示差异显著；大写字母完全不同表示差异极显著。（1）对样本整体进行单因素方差分析结果显示其P值0.01，样本差异极显著这表明供试菌株的产IAA能力差异极显著。(2)菌株红袋K10、K35的菌液分别与其他供试菌株的菌液中IAA浓度差异极显著。(3)菌株J7、K37的菌液与红袋K16、K25、K27、红袋11、K20

35、、席10-10、席K3、K43、席K4、席K5、K44、K45、席10-9、席10-6等14株菌的菌液中IAA浓度差异极显著。（4）菌株K19、K22的菌液与红袋11、K20、席10-10、席K3、K43、席K4、席K5、K44、K45、席10-9、席10-6等11株菌的菌液中IAA浓度差异极显著。(5)菌株红袋K16的菌液与K43、席K4、席K5、K44、K45、席10-9、席10-6等7株菌的菌液中IAA浓度差异极显著。(6)菌株K25、K27的菌液与席K4、席K5、K44、K45、席10-9、席10-6等6株菌的菌液中IAA浓度差异极显著。(7)菌株红袋11的菌液与K45、席10-9、席

36、10-6等3株菌的菌液中IAA浓度差异显著。2.5解钾能力测定：表4：钾细菌解甲能力的测定菌株号 速效钾含量（g/ml） 速效钾含量增加百分比%K194.14748.489K277.488168.152K373.88038.942K433.88038.942K455.11683.191CK2.793由上表可以看出K19、K27、K37、K43、K45这5株菌的发酵液中速效钾含量分别比对照多出48.489%、168.152%、38.942%、38.942%和83.191%。3结论与讨论：3.1.固氮酶活性：（1）席10-9、K25、K37、席10-10、K45、K20、红袋K10、席K4、红袋1

37、1、席K5、红袋K16等11株菌的ARA值小于对照说明其不具有固氮酶活性。（2）菌株K19、K44、K27、K43、K22、席10-6、J7、K35、席K3等9株菌具有较强的固氮酶活性。其中K19固氮酶活性最高，且与其他菌株差异极显著。3.2.ACC酶活性：菌株席10-10产生ACC脱氨酶的能力最强，且与其他供试菌株差异极显著。3.3.产IAA能力：（1）菌株K45的菌液与K20、席10-10、席K3、K43、席K4、席K5、K44、席10-9、席10-6等9株菌的菌液中IAA浓度差异极显著。（2）红袋K10、K35、J7、K37等4株菌的菌液与K25、K27、红袋11、K20、席10-10、

38、席K3、K43、席K4、席K5、K44、席10-9、席10-6等12株菌的菌液中IAA浓度差异显著。3.4.解甲能力：K19、K27、K37、K43、K45这5株菌的发酵液中速效钾含量分别比对照多出48.489%、168.152%、38.942%、38.942%和83.191%。参考文献：1 葛城.微生物肥料的生产应用及发展.北京:中国农业科技出版社,1996.2 陈华癸.土壤微生物学.上海科学技术出版社,1981.3 蒋先军，黄昭贤，彭盛德，杨雪梅.硅酸盐细菌的研究现状及展望J.世界农业,1998.5:28-314 蒋宝贵，赵斌. 解磷解钾自生固氮菌的分离筛选及鉴定. 华中农业大学学报,20

39、05.2（1）：43-48.5 李元芳.硅酸盐细菌肥料的特性和作用J.土壤肥料,1994.2:48-49.6 李凤汀，郝正然，杨则瑗，等.硅酸盐细菌HM8841菌株解钾作用的研究.微生物学报,1997，1:79-81.7 Zahra M K, Monib M, Abdel-A1 S I, et al.Significance of soil inoculation with silicate bacteria.Zentralblatt for Mikrobiologie,1984,139(5):349-357.8 Avankyan Z A,Pivovarova T A, Karavaiko G

40、 I. Properties of a new species, Bacillus mucilaginosus. Mikrobioloigiya , 1986,55:477-482.9 Shelobolina E S. Avakyan Z A, Bulygina E S, et al.Description of a new species of mucilaginosus bacteria,Bacillus edaphicus sp. nov. and confirmation the taxonomic status of Bacillus mucilaginosus.Mikrobiolo

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42、定及其分布特性J.植物学报,1999, 41 (9) : 927 - 931.15 刘深,赵宇华，傅庆林.盐胁迫对茄苗的影响及利用ACC脱氨酶活性菌株DW1提高茄苗的耐盐性E.浙江大学硕士论文, 2007.5.16 吴瑛，席琳乔. 燕麦根际固氮菌分泌 IAA的动态变化研究J.安徽农业科学,2007，35(15)：4424-4425，4441.17 ERIC GHCKMANN，YVES DESSAUXA critical exa mination of the specificity of the salkowski reagent for indolic compounds produced

43、by phytopathogenic bacteriaJApplied And Environmental Micmbiology，1995，2：793-796.18 盛下放,黄为一,殷永娴.硅酸盐菌剂的应用效果及其解钾作用的初步研究J .南京农业大学学报,2000, 23(1)： 43-46.致 谢此论文是在导师龚明福副教授的精心指导下完成的。导师博大的胸怀、渊博的学识、敏锐开阔的思维、严谨的治学态度、孜孜不倦的工作热情，对科学问题的独到见解，对事业不懈的追求，对科学的忘我投入，是学生的骄傲和永远学习的榜样，并将使我终生受益。在本人课题的开展过程中，导师一直投入很大的关注和帮助，不仅对我授之

44、以鱼，更注重授之以渔，帮助我寻求科学的研究方法，指导我在课题研究过程中解决一个又一个的难题。在此，谨致以最衷心的感谢和崇高的敬意！试验过程中得到了关统伟老师、徐彪老师、孙红专老师等和韩松、张守村、冯姝、黄晓燕等学长的无私帮助和支持；王东东、蔡光辉、张占利、牟雪英、沈玉婷、张成容等同学协助完成部分工作。舍友铁鑫、谢飞、李怀志在生活上给了我很大的帮助和鼓励。谨此向他们致以真诚的感谢!除此之外，在实验过程中还得到了其它许多老师和同学的帮助，在此虽未一一列出他们的名字，但对他们给予的一切帮助，我将永远铭记于心。向他们表示衷心的感谢！感谢我的父母和家人长期以来对我的培养、关心、鼓励和支持，是他们无私的奉献和爱才使我能够顺利完成学业！