三唑类杀菌剂对意大利蜜蜂经口毒性毕业论文.doc

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1、说 明一、指导教师评语根据学生实习及撰写论文情况进行评定： 1、对待实习的态度及实习纪律的遵守情况； 2、能否准确熟练地进行观察记载、搜集整理、查阅资料及运用数据的水平； 3、能否准确熟练地进行各项操作，并运用所学知识解决实际问题； 4、能否很好地完成任务书规定的工作量。二、评阅教师意见参照以下几方面进行评定： 1、论文选题的实用性、分析的科学性和体系的完整性； 2、获取资料是否丰富，处理资料是否科学、严谨； 3、综合运用基础理论和专业知识的深度、归纳、概括及运算的能力； 4、文字表达能力，文章的逻辑性。三、论文答辩成绩由答辩小组根据学生语言表达能力及回答问题的准确性进行评定。四、论文综合评定

2、成绩按优秀、良好、中等、及格和不及格五级计分。五、毕业论文的成绩评定按照毕业论文评分标准综合评定。六、论文由学生本人按照毕业论文（设计）规范用计算机排版、打印，一律使用统一封面（16K）。七、学生的论文文本（含任务书、图片等）由学院按学校规定存档。目录中文摘要6英文摘要61前言71.1意大利蜜蜂简介81.1.1意大利蜜蜂的基本特征81.1.2意大利蜜蜂的经济意义91.2农药对蜜蜂的风险评价及生物毒性测试方法101.3蜜蜂农药中毒的表现121.4供试药剂简介132.1 试验药剂142.2 试验蜜蜂及来源142.3试验方法152.3.1试验条件152.3.2蜜蜂饲养及适应期152.3.3试验设备1

3、52.3.4试验染毒浓度和分组152.3.5试验方法选择162.3.6染毒方法162.3.7症状观察与数据记录162.4数据处理162.5质量控制163 结果与结论173.1质量控制实际测量数据173.2中毒症状173.3结果173.4结论184 附表：19参考文献25致谢26DirectoryChinese abstract.6English abstract.61 Introduction.71.1 Italian bees Introduction 81.1.1 basic characteristics of the Italian bee.81.1.2 Italian bees ec

4、onomic significance.91.2 pesticide risk assessment and biological toxicity test method bees .101.3 Bee pesticide poisoning symptoms .121.4 for test pharmaceutical About .132 Materials and methods142.1 Experimental Pharmacy.142.2 test bees and sources.152.3 Test Method.152.3.1 Test conditions.152.3.2

5、 bee breeding and adaptation of.152.3.3 The test equipment152.3.4 test exposure concentration and grouping.152.3.5 Test method to select.162.3.6 exposure method162.3.7 symptoms of observation and data recording.162.4 Data Processing.162.5 Quality Control.163 Results and conclusions.173.1 Quality con

6、trol of the actual measurement data.173.2 The symptoms of poisoning.173.3 the results of.173.4 Conclusion.184 Schedule:.19Reference25Acknowledgements.26六种三唑类杀菌剂对意大利蜜蜂经口毒性评价作者：郑玉涛（09级制药2班）指导教师：姜兴印 副教授摘要：本试验以意大利蜜蜂为试材，利用经口法测定了10%苯醚甲环唑微乳剂、250克/升丙环唑乳油、25%戊唑醇水乳剂、20%戊菌唑水乳剂、25%氟环唑悬浮剂、8氟硅唑微乳剂六种药剂对蜜蜂的经口毒性，实验结

7、果得：24h后，10%苯醚甲环唑微乳剂经口LC50值为1322.60a.i.mg/L，95%置信限为988.82-2035.11a.i.mg/L, 250克/升丙环唑乳油经口LC50值为1306.38a.i.mg/L，95%置信限为966.94-2052.08a.i.mg/L, 25%戊唑醇水乳剂经口LC50值为778.34a.i.mg/L，95%置信限为641.42-983.79a.i.mg/L, 20%戊菌唑水乳剂经口LC50值为1375.02 a.i.mg/L，95%置信限为1012.38-2188.84 a.i.mg/L, 25%氟环唑悬浮剂经口LC50值为293.97a.i.mg/L

8、，95%置信限为224.86-431.13a.i.mg/L, 8氟硅唑微乳剂经口LC50值为103a.i.mg/L，95%置信限为83.7-135a.i.mg/L。根据化学农药环境安全评价试验准则可得出结论：10%苯醚甲环唑微乳剂、250克/升丙环唑乳油、25%戊唑醇水乳剂、20%戊菌唑水乳剂药剂对蜜蜂的经口毒性均为低毒, 25%氟环唑悬浮剂、8氟硅唑微乳剂对蜜蜂的经口毒性为中毒。关键词：三唑类杀菌剂，意大利蜜蜂，经口毒性，安全性评价Six three triazole fungicide on the Italian bee oral toxicity evaluationAuthor:Zh

9、eng Yu Tao (09 pharmaceutical engineering 2 classes)Instructor: associate professor of Jiang Xing YinAbstract: In this test, the Italian bees as test materials, use the tag method for the determination of 10% difenoconazole ME,250g/L propiconazole, EC, 25% tebuconazole EW,20% penconazole EW 25% epox

10、iconazole SC, 8% flusilazole ME, six three triazole fungicide on the Italian bee oral toxicity evaluation, the experimental results measured: 24h later10% difenoconazole ME oral LC50 were 1322.60a.i.mg/L, the 95% confidence limit were 988.82-2035.11a.i.mg/L, 250g/L propiconazole, EC oral LC50 were 1

11、306.38a.i.mg/L, the 95% confidence limit were 966.94-2052.08a.i.mg/L, 25% tebuconazole EW oral LC50 were 778.34a.i.mg/L, the 95% confidence limit were 641.42-983.79a.i.mg/L, 20% penconazole EW oral LC50 were 1375.02 a.i.mg/L, the 95% confidence limit were 1012.38-2188.84 a.i.mg/L, 25% epoxiconazole

12、SC oral LC50 were 293.97a.i.mg/L, the 95% confidence limit were 224.86-431.13a.i.mg/L, 8% flusilazole ME oral LC50 were 103a.i.mg/L , the 95% confidence limit were 83.7-135a.i.mg/L. Under chemical pesticide environmental safety evaluation criteria can be concluded that: 10% difenoconazole ME,250g/L

13、propiconazole, EC, 25% tebuconazole EW,20% penconazole EW oral toxicity of the four kinds of pesticides on bees are low toxicity,25% epoxiconazole SC, 8% flusilazole ME are moderate toxicity.Keywords: three triazole fungicide, Italian bees, oral toxicity 1前言蜜蜂是一种重要的经济昆虫，可为人类提供大量蜂产品，如蜂蜜、花粉、王浆、蜂胶和蜂蜡等。

14、除此之外，蜜蜂对人类的最大贡献在于其是一种重要的传粉昆虫，全世界有上万种植物可靠蜜蜂进行传粉。1自2006年冬以来，欧美相继出现蜂群大量减少的情况，科学家们称之为蜂群崩溃失调病(Colony Collapse Disorder，简称CCD)，如在20062007年冬，估计在美国有65.187.5万蜂群消失，而这之前有240万蜂群。引起蜂群衰退的因素有很多，其中农药的大量使用被认为是一个重要诱因，如早在1993年，法国西南部就发现用吡虫啉处理向日葵种子后导致大量蜜蜂死亡的情况，并在后来取消其在向日葵上的使用。Frazier等从108份蜂花粉中检测出46种不同的农药及6种农药代谢产物，其中在1份样

15、品中最多检测出17种农药，平均每份样品中检出5种农药，只有3份样品中未检测出农药残留，由此可见农药已对蜜源造成了广泛而严重的污染，势必会影响蜜蜂的健康。2保护环境中有益生物的安全,是农药使用中一项十分重要的任务。为此,我们于2007年依据国家环保局颁布的化学农药环境安全评价试验准则的要求旨在为其合理评价与使用提供科学依据。3以科学的方法研究农药对蜜蜂的毒性，并对其风险性作出评价，是农药安全使用的必要前提之一。化学农药对蜜蜂的危害表现为急性毒性和慢性毒性两方面，常通过室内的毒力测定来完成对蜜蜂急性毒性的危害评价。从急性经口和急性触杀两方面综述农药对蜜蜂的急性毒力测定方法和危害评价体系。急性经口毒

16、性的毒力测定方法也称摄入法，按给药时间通常可分为连续摄入和初始摄入两种，即连续摄入法和初始摄入法。连续摄入法是基于中国国家环保总局 1989 年制定的化学农药安全评价试验准则中推荐的检测农药对蜜蜂的经口毒性的方法，该方法现已广泛应用于中国农药产品的登记试验。具体做法是将一定量的农药溶于糖水或蜂蜜中，配制成不同浓度的药蜜混合液(简称药蜜)，将药蜜分别浸渍在适量的脱脂棉中，装在10ml 小烧杯内，杯口用纱网封住，通过网眼供蜜蜂摄取，定时观察蜜蜂摄食情况，随时添加药蜜。记录 24 h内蜜蜂死亡数，求出相应的致死中量LD50或致死中浓度LC50。对难溶于水的农药，可加少量助溶剂(如丙酮等)。连续摄入法

17、是在不考虑大田中推荐使用浓度的情况下测试农药对蜜蜂的急性毒性。这种方法的优点是农药对蜜蜂的影响可以用LD50表示，并进行各农药间的毒力比较，将大田试验等实际应用中得来的数据和室内采用摄入法求出的LD50数据联系起来，可以推断农药在大田推荐浓度下对蜜蜂的影响但这种方法本身存在缺陷：在测试过程中，24 h 或者更长时间持续地接触一定浓度的农药，并没有客观、真实地反映出农药对蜜蜂的危害，而是放大了农药对蜜蜂的影响，因而，该方法不利于新农药的推广，但对于发展可持续农业和保护生态环境却大有裨益。41.1意大利蜜蜂简介1.1.1意大利蜜蜂的基本特征意大利蜜蜂简称意蜂。原产于意大利的亚平尼半岛，是典型的地中

18、海型气候和生态环境的产物。一些学者认为，意大利蜂是亚平宁半岛上原有的欧洲黑蜂与引进的塞浦路斯蜂长期自然杂交形成的。亚平宁半岛的气候和蜜源条件的特点是：冬季短、温暖而湿润；夏季炎热而干旱，蜜源植物丰富，花期长。意大利蜂在类似上述自然条件下，可表现出很好的经济性状；但在冬季长而严寒、春季经常有寒潮袭击的地方，则适应性较差。5意大利蜂的体形比黑蜂略小，腹部细长，吻较长（6.36.6mm）；腹板几丁质颜色鲜明，在第2至第4腹节背板的前部具黄色环带。但黄色区域的大小和色泽深浅有很大变化，有的蜂群较宽而浅，有的窄而深。浅色的蜂种，常具有黄色的小盾片，类似塞普路斯蜜蜂。意蜂的特浅色类型，就是众所周知的“黄金

19、种蜜蜂”，仅在腹部末端具有黑色小斑。意蜂的绒毛亦具黄色，这在雄蜂上特别易于区别。其覆毛短，绒毛带宽而密。肘脉指数中等或偏高，平均为2.22.5。61.1.2意大利蜜蜂的经济意义蜜蜂是对人类有益的昆虫类群之一，通常广泛指的是生产用蜂种：西方蜜蜂和中华蜜蜂。它为农作物、果树、蔬菜、牧草、油茶作物和中药植物传粉。蜂蜜是人们常用的滋补品，有“老年人的牛奶”的美称；蜂花粉被人们誉为“微型营养库”，蜂王浆更是高级营养品，不但可增强体质，延长寿命，还可治疗神经衰弱、贫血、胃溃疡等慢性病；蜂毒对风湿、神经炎等均有疗效；蜂蜡和蜂胶都是轻工业的原料。蜂胶还被称为“紫色黄金”，在全世界的产量比黄金还少。蜜蜂既能酿蜜

20、，又能为植物传粉。在农副业生产中，它具有相当的经济价值。然而，在整个生态系统中，由于农药的广泛使用，对蜜蜂安全的威胁亦不可避免。因此农药对蜜蜂安全性的评价，是农药开放中不可缺少的组成部分。我国饲养蜂群约7 0 0万群，其中意大利蜂约500万群，是蜂业生产的支柱，也是作物授粉的主力军。 由于农药的大量使用，引起蜜蜂中毒事件逐年增加，使养蜂业蒙受重大的经济损失，也使一些农作物因为得不到充分授粉而导致产量降低和品质下降，影响农业的收益。7意蜂产蜜能力强，生产王浆的能力强，是蜜浆兼产型的理想品种，而且也是花粉生产的理想品种，还可用其进行蜂胶生产。正因为如此，意蜂的饲养范围早已远远超出了原产地，成为受到

21、普遍欢迎的世界性品种。蜂毒为蜜蜂螫刺腺体中的毒液。又名蜜蜂毒素。其采收有几种方法，最好用电刺激取蜂毒法：将电取蜂毒器置于蜂箱巢门口，当蜜蜂触及电网时就会螫刺其下面的取蜂毒蜡纸，并将蜂毒排出在蜡纸背面。蜜蜂拔出螫针后能够继续工作。王浆为工蜂咽腺的分泌物，是蜂王及早期幼虫的饲料。又名蜂乳、王乳、蜂王浆、蜂皇浆、皇浆。在移虫后4872小时，检查产浆群，如发现蜡杯都已由工蜂改成王台，王台里的幼虫也已长大，即可取浆。取浆应在清洁的室内进行，并穿工作服，带口罩。先取下各段板条，用小镊子移出幼虫，再用牛角匙或竹制小匙（不要用金属匙）挖出王浆，立即放入带色的玻璃瓶内。将所采王浆，密闭低温（不超过4）保存或送去

22、做成制剂。蜂蜡为蜜蜂分泌的蜡质，经加工而成的块状物。又名蜜蜡。将要用于制蜡的蜂巢除去蜂蜜，放入水中，加热熔化，静置放冷，蜡层即浮于水面。取出此蜡块再熔化，并保温放置，待其中杂质沉淀后，将上层经滤过倒入模型中固化而成。蜂胶为蜜蜂用来修补蜂箱隙缝，涂搽巢房和封闭蜂箱内异物用的粘性物质。每10天左右采收一次，选择天气暖和，蜂胶柔软时用刮刀将蜂胶刮起，并立即捏成团块，用蜡纸或油纸包好，以防硬化，放凉暗处贮存备用。蜂毒主要用于与疼痛有关的各种疾病的治疗，如风湿热、风湿性及类风湿性关节炎、各种周围神经炎及神经痛、肌痛、腰肌劳损及其他周围神经障碍。此外用于眼科疾病、早期高血压、荨麻疹及神经官能症等。81.2

23、农药对蜜蜂的风险评价及生物毒性测试方法1996年USEPA下属防治农药和毒性物质办公室结合“污染防治与毒性物质办公室”、“联邦管理条例”等相关实验要求，在USEPA原有工作基础上制订了蜜蜂急性经口毒性实验导则、叶面残留蜜蜂毒性实验导则以及传粉昆虫田间实验导则，这些导则包含实验室毒性实验、模拟实验及田间实验，基本构成了USEPA农药对蜜蜂生物安全性研究的多层次实验体系。农药对蜜蜂的影响是环境生态风险评价的一个重要组成部分,目前大多引用 USEPA 的经典生态风险评价程序来进行。美国于 1998年发布的最新生态风险评价程序中将生态风险评价过程分为 3个主要阶段,即问题表述、问题分析和风险表征。而陆

24、生生物的生态风险评价规程则由美国生态委员会生态风险评价陆生生物工作组 ( The Ecological Committee on FIFRA Risk Assessment M ethods TerrestrialW ork Group) 在 1997年的工作报告中提出,共包括问题表述、饮食途径暴露和效应评价、风险表征几个部分。目前 USEPA 主要是通过急性接触毒性试验 (LD50值 )来估计农药施通过叶面暴露试验估计蜜蜂直接摄取或暴露于叶面残留农药时的致死效应。农药对蜜蜂的风险评价主要包括以下 3个过程: 农药对蜜蜂的危害分析:确定危害存在与否,制定风险分析计划。农药对蜜蜂的风险分析与估算

25、:农药自身的毒性,通常用LD50值来表示;确定农药暴露浓度,估算产生危害影响的剂量水平。风险表征:表征一种农药对蜜蜂的影响。如果生态系统中各种浓度下的暴露均不会引起危害,则认为这种农药不会对蜜蜂造成有害影响;如果怀疑或已经产生了危害,则需进行田间风险评用时药液与蜜蜂身体直接接触的毒性危害,同时评价,以便进一步了解风险并将其降低到可以接受的水平。9目前，应用最多、最完善的农药对蜜蜂生物安全性评价体系是由洲-地中海植物保护组织经过几十年的研究逐渐形成的。该组织成立于1951年，主要围绕农药对环境生物安全性评价问题，开展农药对环境生物毒性测试方法及安全性风险评价技术研究，EPPO的农药对蜜蜂生态风险

26、评价体系被其成员国如荷兰、德国、法国及其他非该组织成员国如新西兰等国家广泛采用。农药对蜜蜂生态风险评价体系包括毒性数据与实验、暴露评价以及风险评价等部分。蜜蜂急性毒性试验是农药对蜜蜂生物毒性等级评价的划分依据，通常以半致死浓度/剂量（Sub-Lethal Concentration or Dose ，LC50/ LD50）表示，即实验条件下受试农药引起50%实验蜜蜂死亡所对应的浓度或剂量10。根据农药对蜜蜂的不同暴露途径，蜜蜂急性毒性实验可分为接触暴露毒性试验（接触法）和经口暴露毒性实验（摄入法）。1998年经济合作与发展组织（Organization for Economic Co-oper

27、ation and Development,OECD）制定了农药和其他化学品对蜜蜂经口急性毒性实验导则“Honeybees.Acute oral toxicity test.OECDs Guidelines for the Testing of Chemical. TG No.213”及接触毒性实验导则Honeybees.Acute oral toxicity test.OECDs Guidelines for the Testing of Chemical. TG No.214”。OECD蜜蜂摄入法毒性实验采用饲喂管法，即将含有受试药液的蔗糖溶液注入尖嘴玻璃管中（50mm10mm，2mm），

28、然后将其安装在蜂笼顶部，蜂笼内蜜蜂通过口器深入管内趋势含药溶液；接触法则是将蜜蜂夹于两层纱网中，通过网孔用微量注射器对准蜜蜂中胸背板出点滴一定浓度的受试药液，待蜂身晾干后，将蜜蜂转入实验蜂笼正常饲喂。实验条件通常为温度（252），相对湿度50%70%，避光黑暗，实验周期为2496h。10农药对蜜蜂的毒性研究，有实验室研究和大田试验两种，后者更接近实际，但工本高，显然不可能对所有的农药都进行大田试验，根据Atkins等人的研究，只有经实验室研究接触毒性LD5010g/蜂（以有效成分计）的农药，才需考虑进一步开展大田试验。供测定农药毒性用的蜜蜂，一般有东蜂（本地蜂）和西蜂二个品系，西蜂主要以意大利

29、蜂为代表。由于意大利蜂具有个大体壮、产蜜量高、蜜质好、性情较温和便于管理等优点，现已在全世界普遍养殖。因此一般都用意大利成年工蜂作试验蜂种。根据以上情况，农药对蜜蜂急性毒性试验按接触、摄入和熏蒸三种染毒方法分别进行。农药对蜜蜂的毒性等级划分为四级，（1）触杀毒性：LC5011.0g/蜂为低毒，2.011.0g/蜂为中毒，0.0012.0g/蜂为高毒，LC500.001g/蜂为剧毒；（2）摄入毒性：LC50200mg/L为低毒，20200mg/L为中毒，0.520mg/L为高毒，LC500.5mg/L为剧毒。1.3蜜蜂农药中毒的表现 蜜蜂突然大量死亡，蜂群越强，死蜂越多。死蜂多为采集蜂，不少采集

30、蜂死于蜂场附近和蜂箱周围，有的死蜂后足还带有花粉团。中毒蜂在地上翻滚、打转、痉挛、爬行，身子不停地颤抖，最后麻痹死亡。死蜂腹部内弯，翅膀张开呈“K”字形，吻伸出。蜜蜂采集秩序混乱、漫天飞舞、追蜇人畜。开箱检查，箱底有大量死蜂，箱内蜜蜂性情暴躁，爱螫人，提脾检查，可见大量蜜蜂无力附脾而掉落箱底；巢房内的大幼虫“跳子”至巢房口或脱落出来。中毒严重的蜂群，有的全群离开巢脾，爬出巢外在巢门口附近或箱底聚集成团，其中有机磷农药中毒典型症状是：蜜蜂身体湿润、精神萎靡不振、腹部膨大、围绕打转，大部分中毒蜂死于箱内。有机氯农药中毒典型症状是：蜜蜂尾部拖地，中毒蜜蜂异常激怒，爱蜇人，部分蜜蜂死于箱外或回归途中。

31、111.4供试药剂简介（1）10%苯醚甲环唑：苯醚甲环唑因杀菌谱广、 高效、安全， 从 2003 年以来， 一直在全世界农药市场中成为销售量很高的产品， 是三唑类杀菌剂中除戊唑醇、 氟环唑之外， 第三个销量过亿产品， 且每年的销售额仍以约 15%的速度增长， 是一个仍处于发展阶段的品种， 也将是未来杀菌剂的主流品种之一。苯醚甲环唑具有保护、 治疗和内吸活性， 抑制细胞壁甾醇的生物合成， 阻止真菌的生长。对子囊菌纲、 担子菌纲和半知菌亚门的多种病原菌有持久的保护和治疗作用。（2）250克/升丙环唑乳油：丙环唑是一种具有保护和治疗作用的内吸性三唑类杀菌剂，可被根、茎、叶部吸收，并能很快地在植物株体

32、内向上传导，防治子囊菌，担子菌和半知菌引起的病害，特别是对小麦全蚀病、白粉病、锈病、根腐病，水稻恶菌病，香蕉叶斑病具有较好的防治效果，可有效地防治大多数高等真菌引起的病害，但对卵菌类病害无效。丙环唑具有杀菌谱广泛、活性高、杀菌速度快、持效期长、内吸传导性强等特点，已经成为世界上大吨位的三唑类新兴广谱性杀菌剂代表品种。（3）戊唑醇水乳剂：农药杀菌剂戊唑醇可以防治白粉菌展、柄锈菌属、喙孢属、核腔菌属和壳针孢属菌引起的病害如小麦白粉病、小麦散黑穗病、麦纹枯病、小麦雪腐病、小麦全蚀病、小麦腥黑穗病、大麦云纹病、大麦散黑穗病、大麦纹枯病、玉米丝黑穗病、高粱丝黑穗病、大豆锈病、油菜菌核病、香蕉叶斑病、茶饼

33、病、苹果斑点落叶病、梨黑星病和葡萄灰霉病等。（4）20%戊菌唑水乳剂：戊菌唑是一种兼具保护、治疗和铲除作用的内吸性三唑类杀菌剂，是甾醇脱甲基化抑制剂，在真菌孢子萌发和侵入其间起作用。可由作物根、茎、叶等组织吸收，并向上传导，经室内活性测定和田间药效试验结果表明，对葡萄白腐病有较好的防治效果，对叶斑病、黑星病、炭疽病、白粉病也有很好的防治效果。（5）25%氟环唑悬浮剂：氟环唑是一种内吸性三唑类杀菌剂，其活性成分氟环唑抑制病菌麦角甾醇的合成，阻碍病菌细胞壁的形成，并且氟环唑分子对一种真菌酶(14-dencthylase)有强力亲和性，与目前已知的杀菌剂相比，能更有效抑制病菌原真菌。氟环唑可提高作物

34、的凡丁质酶活性，导致真菌吸器的收缩，抑制病菌侵入，这是氟环唑在所有三唑类产品中独一无二的特性。对香蕉、葱蒜、芹菜、菜豆、瓜类、芦笋、花生、甜菜等作物上的叶斑病、白粉病、锈病以及葡萄上的炭疽病、白腐病等病害有良好的防效。（6）8氟硅唑微乳剂：可用于内吸性杀菌。可抑制甾醇脱甲基化。主要可用于防治子囊菌纲，担子菌纲和半知菌类真菌有效，如苹果黑星菌、白粉病菌，禾谷类的麦类核腔菌、壳针孢属菌、钩丝壳菌等，球座菌及甜莱上的各种病原菌，花生叶斑病。三唑类杀菌剂，破坏和阻止麦角甾醇的生物合成，导致细胞膜不能形成，使病菌死亡。对子囊菌、担子菌和半知菌所致病害有效，对卵菌无效，对梨黑星病有特效。2材料和方法2.1

35、 试验药剂10%苯醚甲环唑微乳剂、250克/升丙环唑乳油、25%戊唑醇水乳剂、20%戊菌唑水乳剂、25%氟环唑悬浮剂、8氟硅唑微乳剂以上药剂均由山东农业大学环境毒理研究中心提供。2.2 试验蜜蜂及来源试验蜜蜂蜂种为意大利蜜蜂（Apis mellifera L），购于山东省泰安市泰东养蜂合作社。在室外自然条件下人工控制饲养，选择大小一致、活泼、健康的成年工蜂作为试验测试的标准蜂，体重约0.10g。2.3试验方法2.3.1试验条件实验室温度控制在252，相对湿度为50%70%，微光条件下进行试验。2.3.2蜜蜂饲养及适应期试验用蜜蜂在试验前一天从蜂箱中取出，饲养于蜂盒内，蜂盒两端用医用脱脂纱布和橡

36、皮筋封口，饲喂50%蔗糖水溶液，放置在试验环境中保持24小时适应期，使试验用蜜蜂适应实验室环境，适应期后观察试验用蜜蜂个体的活力，剔除死亡或表现异常的个体，剩余个体为试验用标准蜜蜂，并于试验前2小时停止饲喂，饥饿2小时后方可进行试验。2.3.3试验设备万分之一电子天平、称量瓶（25ml）、容量瓶、冰箱、蜂盒（8cm12cm）、玻璃棒、镊子、烧杯（10ml、100ml、250ml、500ml）、胶头滴管、温湿度表、加湿器、移液器（1mL、5mL）、面罩、防护服、起刮刀、喷水器、蜂刷、医用脱脂纱布、脱脂棉、50%蔗糖水等。2.3.4试验染毒浓度和分组10%苯醚甲环唑微乳剂：125、250、500、

37、1000、2000a.i.mg/L五个浓度250克/升丙环唑乳油：125、250、500、1000、2000a.i.mg/L五个浓度25%戊唑醇水乳剂：125、250、500、1000、2000a.i.mg/L五个浓度20%戊菌唑水乳剂：125、250、500、1000、2000a.i.mg/L五个浓度25%氟环唑悬浮剂：31.25、62.50、125、250、500a.i.mg/L五个浓度8氟硅唑微乳剂：12.5、25.0、50.0、100、200 a.i.mg/L五个浓度同时设置空白对照和溶剂对照。每处理3次重复，每个重复20只蜜蜂。2.3.5试验方法选择摄入法,参照国标GB/T 2181

38、2-20082.3.6染毒方法按设计浓度定量称取样品，置于烧杯中用蒸馏水进行溶解，再转移至25 mL容量瓶中，将烧杯冲洗3次，冲洗液均转入容量瓶，再用蒸馏水定容，配成10000a.i.mg/L的母液，再用蒸馏水稀释成试验所需系列浓度。试验前，将上述稀释系列浓度药液分别与50%蔗糖水以1:1混匀，装入10 mL小烧杯中，杯内浸渍0.3 g 0.5 g脱脂棉，用量以小烧杯内药液不流出，并且能在试验期间保持湿润为准。小烧杯口用40目纱网和橡皮筋封住后，放入饥饿2小时的试验蜂盒内，让试验蜜蜂通过网眼取食。试验蜂盒置于遮光的试验架上。以不含药剂处理为空白对照。2.3.7症状观察与数据记录于药剂处理后24

39、h、48h观察并记录试验蜜蜂中毒症状和死亡数。2.4数据处理试验结果用DPS V13.5统计软件处理，计算样品对蜜蜂24h、48h的半致死中浓度（LC50）和95%置信限。2.5质量控制1)试验用蜜蜂空白对照组和溶剂对照组死亡率不超过10%。2)适应期结束后，观察试验用蜜蜂个体的活力，剔除死亡或表现异常的个体，死亡个体不超过20%。3)二氧化碳麻醉后，试验蜜蜂的无死亡情况。3 结果与结论3.1质量控制实际测量数据1)试验期间，空白对照组蜜蜂的死亡率为0%。2)适应期结束后，观察试验用蜜蜂个体的活力，死亡个体为0%。3)二氧化碳麻醉后，试验蜜蜂的死亡率为0%。3.2中毒症状经过10%苯醚甲环唑微

40、乳剂、250克/升丙环唑乳油、25%戊唑醇水乳剂、20%戊菌唑水乳剂、25%氟环唑悬浮剂、8氟硅唑微乳剂等农药处理意大利蜜蜂后，中毒死亡的蜜蜂身体蜷缩，双翅展开；未死亡的蜜蜂行动迟缓。3.3结果实验结果见下表表1 六种药剂对蜜蜂的经口毒力药剂24h LC50值24h 95%置信限(a.i.mg/L)48h LC50值48h 95%置信限(a.i.mg/L)10%苯醚甲环唑微乳剂待添加的隐藏文字内容31322.60a.i.mg/L988.82-2035.111010.37a.i.mg/L789.46-1413.69250克/升丙环唑乳油1306.38a.i.mg/L966.94-2052.088

41、89.97a.i.mg/L695.22-1233.4425%戊唑醇水乳剂778.34a.i.mg/L641.42-983.79518.76a.i.mg/L437.11-617.420%戊菌唑水乳剂1375.02a.i.mg/L1012.38-2188.84699.60a.i.mg/L584.11-863.3625%氟环唑悬浮剂293.97a.i.mg/L224.86-431.1363.57a.i.mg/L134.42-204.428氟硅唑微乳剂103a.i.mg/L83.7-13564.5a.i.mg/L54.7-77.73.4结论依据化学农药环境安全评价试验准则，农药对蜜蜂急性经口毒性按LC

42、50的大小划分为四个等级：LC50200a.i.mg/L为低毒，20a.i.mg/LLC50200a.i.mg/L为中毒，0.5a.i.mg/LLC5020a.i.mg/L为高毒，LC500.5a.i.mg/L为剧毒。在本实验室条件下，10%苯醚甲环唑微乳剂、250克/升丙环唑乳油、25%戊唑醇水乳剂、20%戊菌唑水乳剂药剂对蜜蜂的经口毒性均为低毒, 25%氟环唑悬浮剂、8氟硅唑微乳剂对蜜蜂的经口毒性为中毒。 4 附表：表1 10%苯醚甲环唑微乳剂对蜜蜂经口毒性数据记录表处理浓度(a.i.mg/L)重复试虫数(只)24h死亡数(只)48h死亡数(只)空白对照-12100220003190011

43、25119112211232122225012033221343222435001215722055320464100012177219993216852000121141522012153221618表1.1 10%苯醚甲环唑微乳剂对蜜蜂经口毒性结果时间(h)LC50(a.i.mg/L)95%置信限(a.i.mg/L)241322.60988.822035.11481010.37789.461413.69表2 250克/升丙环唑乳油对蜜蜂经口毒性数据记录表处理浓度(a.i.mg/L)重复试虫数(只)24h死亡数(只)48h死亡数(只)空白对照-121002210031800112512022220113211422501202422133319333500120462197832057410001219112218932181352000121161722012133191013表2.1 250克/升丙环唑乳油对蜜蜂经口毒性结果时间(h)LC50(a.i.mg/L)95%置信限(a.i.mg/L)241306.38966.942052.0848889.97695.221233.44表3 25%戊唑醇水乳剂对蜜蜂经口毒性数据记录表处理浓度(a.i.mg/L)